JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:23 min • July 8th, 2025
Przejmij kontrolę i transgeniczne larwy muszki owocowej Drosophila.
Transgeniczne larwy wyrażają światłoczuły kanał jonowy w neuronach receptora węchowego lub ORN. Neurony te są częścią obwodu węchowego, który wykrywa bodźce zapachowe i przekazuje sygnały do mózgu, kierując ruchem larw w odpowiedzi na bodźce.
Umieść larwy na naczyniu ze zestaloną agarozą w arenie behawioralnej i przykryj naczynie.
Wystaw larwy na działanie światła o długości fali, które stymuluje kanały jonowe i rejestruje zachowania nawigacyjne larw.
Światło aktywuje all-trans-retinal, chromofor, który indukuje otwieranie kanałów jonowych, znane jako stymulacja optogenetyczna, i umożliwia napływ kationów.
Napływ generuje potencjały czynnościowe, które przekazują sygnały wzdłuż obwodu węchowego, wpływając na zachowanie nawigacyjne larw.
Transgeniczne larwy z światłoczułymi kanałami jonowymi wykazują zmianę odległości przebytej w linii prostej przed zmianą kierunku, znaną jako długość biegu, w porównaniu z larwami kontrolnymi.
W przypadku testu zachowania utrzymuj stałą temperaturę i wilgotność w pomieszczeniu behawioralnym. Przygotuj pożywkę dla larw, wlewając 150 mililitrów stopionej 1,5% agarozy do kwadratowej szalki Petriego o wymiarach 22 cm na 22 cm.
Pozwól agarozie zestalić się i ostygnąć przez 1 do 2 godzin na szalkach Petriego, przed użyciem ich w teście zachowania. Po zestaleniu się agarozy przenieś nie więcej niż 20 przygotowanych larw w trzecim stadium do środka szalki Petriego i przykryj szalkę Petriego pokrywką.
Umieść szalkę Petriego na arenie zachowania pod kamerą CCD. Włącz 850-nanometrowe źródło światła LED na podczerwień, aby wyświetlić larwy na filmie. Uruchom kamerę CCD, aby zarejestrować ruch larw. Na koniec przejdź do przetwarzania i analizy danych.