Testowanie połączeń monosynaptycznych za pomocą tetrodotoksyny i kanałów sodowych opornych na tetrodotoksynę

Zacznij od układu elektrofizjologicznego zawierającego unieruchomioną transgeniczną muchę z odsłoniętym mózgiem.

Umieść mikropipetę rejestrującą w pobliżu neuronu postsynaptycznego połączonego z neuronem presynaptycznym wykazującym współekspresję kanałów sodowych opornych na tetrodotoksynę i kanałów wrażliwych na światło czerwone oraz interneuronu z kanałami sodowymi wrażliwymi na tetrodotoksynę.

Zastosuj łagodne ssanie do mikropipety, aby uzyskać szczelne uszczelnienie z błoną neuronalną.

Następnie zastosuj silne ssanie, aby przerwać membranę.

Utrzymuj stały potencjał komórek. Wprowadź tetrodotoksynę, która blokuje kanały sodowe w interneuronie, zapobiegając przekazywaniu sygnału z interneuronu do neuronu postsynaptycznego.

Jednak kanały sodowe oporne na tetrodotoksynę pozostają nienaruszone, umożliwiając jonom sodu przedostanie się do neuronu presynaptycznego.

Oświetl muchę impulsami czerwonego światła.

Stymuluje to kanały wrażliwe na światło, umożliwiając napływ kationów i aktywację neuronu presynaptycznego.

Ten neuron presynaptyczny bezpośrednio przekazuje sygnał do neuronu postsynaptycznego bez angażowania interneuronu, a wynikająca z tego aktywność elektryczna potwierdza połą