JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:20 min • July 8th, 2025
Rozpocznij od zestawu elektrofizjologicznego zawierającego unieruchomiony segment okrężnicy myszy w zrównoważonym roztworze elektrolitu.
Okrężnica ma odsłonięty główny ganglion miednicy z wstępnie wypreparowaną gałęzią nerwu czuciowego doprowadzającego okrężnicy, która przekazuje sygnały z okrężnicy do mózgu.
Okrężnica jest kaniulowana na obu końcach za pomocą zastawek trójdrogowych do infuzji soli fizjologicznej.
Napełnij elektrodę rejestrującą i umieść ją w pobliżu nerwu doprowadzającego.
Zastosuj łagodne ssanie, aby wciągnąć nerw do elektrody, tworząc szczelne uszczelnienie.
Monitoruj wyjściowy sygnał elektryczny nerwu i ciśnienie wewnętrzne jelita grubego.
Zamknij kran na kaniuli wylotowej, jednocześnie stale wlewając sól fizjologiczną do okrężnicy.
Powoduje to stopniowy wzrost ciśnienia wewnątrz jelita grubego, co powoduje rozdęcie okrężnicy i stymulację nerwu doprowadzającego.
Ponownie nagraj sygnał nerwowy i ciśnienie w okrężnicy.
Stopniowy wzrost sygnału nerwowego wraz ze wzrostem ciśnienia potwierdza stymulację nerwu doprowadzającego.
Sprawdź wstępnie wyciągniętą szklaną pipetę pod mikroskopem preparacyjnym. Złamij końcówkę elektrody parą kleszczy, tak aby miała rozmiar zgodny ze średnicą nerwu, który ma być rejestrowany. Następnie ukosuj końcówkę, umieszczając ją w pobliżu jaśniejszego rozbłysku.
Osoby, które są nowicjuszami w tej metodologii, mogą również mieć trudności z ukosowaniem końcówki elektrody zgodnie z rozmiarem nerwu.
Następnie umieść skośną elektrodę w uchwycie elektrody. Następnie podłącz 10-mililitrową strzykawkę do bocznego portu uchwytu w celu przyłożenia podciśnienia lub nadciśnienia do elektrody. Następnie podłącz uchwyt do stopnia głównego bioamplifier i zamontuj stopień główny na manipulatorze.
Następnie przenieś elektrodę do kąpieli tkankowej i napełnij elektrodę roztworem Krebsa, delikatnie odsyszając, aż zetknie się ze srebrnym drutem uchwytu. Następnie umieść końcówkę elektrody blisko odciętego końca nerwu i zastosuj podciśnienie, aby zassać nerw do elektrody. Następnie zastosuj większe podciśnienie, aby około 1 milimetr nerwu został wciągnięty do elektrody i utworzył szczelne uszczelnienie.
Teraz włącz biowzmacniacz i ustaw filtr na 300 do 3,000 herców. Monitoruj sygnał na oscyloskopie i rejestruj sygnał nerwowy oraz sygnał ciśnienia śródświetlnego w oprogramowaniu do przetwarzania danych Spike Data. Następnie zastosuj rampowe rozdęcie okrężnicy, zamykając trójkierunkowy kran na kaniuli wylotowej, jednocześnie stale podając doświetlnie. Monitoruj ciśnienie śródświetlne, aż osiągnie 60 milimetrów słupa rtęci.