JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 7:22 min. • July 8th, 2025
Weź odcinki tylnej tętnicy mózgowej myszy.
Inkubuj z roztworem enzymu, aby zdegradować macierz tkankową, rozluźniając komórki.
Zastąp roztwór buforem, a następnie przenieś segment do komory rejestrującej.
Mechanicznie dysocjuj warstwę tkanki łącznej i komórek mięśni gładkich, izolując leżącą poniżej rurkę śródbłonka.
Zabezpiecz rurkę, usuń zdysocjowane warstwy i dodaj bufor fizjologiczny.
Umieścić komorę w systemie rejestrującym z ciągłym przepływem buforowym.
Wprowadź fluorescencyjny wskaźnik wapnia, który dostaje się do komórek śródbłonka, a następnie włóż elektrodę rejestrującą do komórki.
Podaj lek, który wyzwala napływ jonów wapnia i indukuje dalszą sygnalizację uwalniania wapnia z retikulum endoplazmatycznego.
Wskaźnik wiąże się z wapniem i po wzbudzeniu emituje fluorescencję.
Wzrost stężenia wapnia aktywuje zależne od wapnia kanały potasowe, powodując odpływ potasu i zmieniając potencjał błonowy.
Jednoczesne rejestrowanie zmian wewnątrzkomórkowego wapnia za pomocą sygnału fluorescencyjnego i potencjału błonowego za pomocą elektrody.
W tej procedurze należy przygotować aparat do rozcierania za pomocą mikroskopu, kamery i aluminiowego stolika z komorą i mikromanipulatorami. Za
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych