JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:17 min. • July 8th, 2025
Umieścić szkiełko nakrywkowe zawierające kokulturę w komorze nagraniowej wypełnionej natleniznym roztworem zewnątrzkomórkowym.
Kokultura składa się z astrocytów, neuronów korowych szczurów wyrażających światłoczułe kanały jonowe połączone z białkiem fluorescencyjnym oraz neuronów pochodzących z iPSC wyrażających inne białko fluorescencyjne.
Za pomocą mikroskopu konfokalnego zidentyfikuj fluorescencyjny neuron pochodzący z iPSC.
Przesuń pipetę rejestrującą wypełnioną roztworem wewnątrzkomórkowym w kierunku neuronu, aby ustalić konfigurację całej komórki.
Utrzymuj stały ujemny potencjał membrany w celu uzyskania dokładnych pomiarów prądu.
Oświetl kokulturę światłem, aby aktywować wrażliwe na światło kanały jonowe w neuronach korowych, generując w ten sposób potencjał czynnościowy.
Potencjał czynnościowy powoduje uwalnianie neuroprzekaźnika do szczeliny synaptycznej.
Jeśli są połączone synaptycznie, neuroprzekaźniki wiążą się z receptorami na połatanym neuronie pochodzącym z iPSC, otwierając kanały jonowe i generując prądy postsynaptyczne.
Zwiększone prądy postsynaptyczne w neuronach pochodzących z iPSC po stymulacji światłem potwierdzają połączenia synaptyczne z neuronami korowymi.
U
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych