Badanie przedłużonego depolaryzacyjnego potencjału wtórnego (PDA) w fotoreceptorach Drosophila

Przymocuj muchę białooką Drosophila do uchwytu na arenie nagraniowej.

Umieść źródło światła w pobliżu muchy.

Wszczep elektrodę uziemiającą w grzbiet muchy.

Wprowadzić elektrodę rejestrującą na zewnętrznym obrzeżu oka muchy, w pobliżu komórek fotoreceptorów siatkówki zawierających fotopigment.

Na krótko dostosuj muchę do ciemności. To przekształca metarodopsynę, aktywowaną światłem formę fotopigmentu, w rodopsynę, jego nieaktywną formę.

Zastosuj impuls światła pomarańczowego o dużej intensywności. To przekształca pozostałą metarodopsynę w rodopsynę.

Następnie zastosuj impulsy światła niebieskiego. Niebieskie światło przekształca rodopsynę w metarodopsynę, inicjując kaskadę sygnalizacyjną i otwierając określone kanały jonowe.

Powoduje to ciągły napływ jonów dodatnich i trwałą depolaryzację, nawet po usunięciu niebieskiego światła - przedłużonego depolaryzującego potencjału wtórnego lub PDA, rejestrowanego przez elektrodę.

Teraz ponownie zastosuj pomarańczowe impulsy świetlne, aby przekształcić metarodopsynę w rodopsynę.

To zatrzymuje kaskadę sygnałową, przerywa PDA i repolaryzuje błonę fotoreceptorów.

Umieść uchwyt na muchy w ciemnej klatce Faradaya na bloku magnetycznym i upewnij się, że mucha znajduje się około pięciu milimetrów od końca światłowodu. Umieść elektrodę rejestrującą nad okiem muchy, a elektrodę masową nad górną częścią pleców muchy za pomocą mikromanipulatorów. Następnie włóż elektrodę uziemiającą do tylnej części muchy za pomocą mikromanipulatorów.

Włożyć elektrodę rejestrującą w zewnętrzne obrzeża oka muchy, najlepiej za pomocą mikromanipulatorów. Zamknij klatkę Faradaya i wyłącz światła w pomieszczeniu, aby umożliwić adaptację do ciemności na pięć minut. Wprowadź parametry, zaczynając od czasu trwania impulsu 500 metrów na sekundę, interwału impulsów 60 sekund i liczby impulsów ustawionej na sześć.

Aby zmierzyć PDA, ustaw główny generator impulsów w trybie Train. Następnie daj 5-sekundowy impuls świetlny o maksymalnej intensywności za pomocą pomarańczowego filtra. Sprawdź odpowiedź napięciową. Wymień pomarańczowy filtr na szerokopasmowy niebieski filtr i daj trzy 5-sekundowe impulsy świetlne o maksymalnej intensywności. Sprawdź odpowiedź napięciową.

Odczekaj co najmniej 60 sekund w ciemności. Zastąp niebieski filtr poprzednim pomarańczowym filtrem. Następnie podaj dwa 5-sekundowe impulsy świetlne w 60-sekundowych odstępach. Sprawdź odpowiedź napięciową.