JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:53 min. • July 8th, 2025
Zabezpiecz preparat rdzenia kręgowego pnia mózgu od nowonarodzonego gryzonia w komorze rejestracyjnej z przepływem natlenionego aCSF. Usunąć cienką tkankę pokrywającą preparat.
Sieć neuronalna pnia mózgu generuje rytmiczną aktywność elektryczną, zwaną wybuchem wdechowym, przekazywaną przez neurony ruchowe czwartego brzusznego korzenia nerwowego rdzenia kręgowego lub C4 w celu kontrolowania oddychania.
Umieść pipetę rejestrującą w pobliżu korzenia nerwowego i użyj ssania, aby wciągnąć korzeń do środka, tworząc uszczelnienie.
Wewnętrzne właściwości neuronów pnia mózgu powodują napływ sodu, depolaryzując błonę i generując potencjał czynnościowy, a następnie odpływ potasu w celu repolaryzacji.
Wynikająca z tego hiperpolaryzacja zapobiega nowym potencjałom czynnościowym, dopóki ATPaza sodowo-potasowa nie wykorzysta ATP do przywrócenia potencjału błonowego.
Potencjały czynnościowe rozchodzą się do korzenia nerwowego w postaci rytmicznych wybuchów.
Przepływ aCSF pozbawiony tlenu w celu zakłócenia produkcji ATP i upośledzenia funkcji ATPazy, opóźnienia potencjałów czynnościowych i zmniejszenia impulsów rytmicznych.
Przełączenie z powrotem na natleniony aCSF przywraca liczbę rytmicznych impulsów.
W tej procedurze umieść tkankę nerwową w komorze rejestracyjnej brzuszną stroną skierowaną do góry. Przymocuj go za pomocą szpilek w najniższej części rdzenia kręgowego i najbardziej rostralnej części pnia mózgu. Następnie usuń błonę pajęczynówki, która jest cienką tkanką pokrywającą powierzchnię tkanki nerwowej. Uważaj, aby nie usunąć pia mater i naczyń krwionośnych tkanki nerwowej. Następnie napełnij elektrodę ACSF.
Za pomocą mikromanipulatora ostrożnie umieść elektrodę blisko czwartego korzenia brzusznego. Delikatnie zassać korzeń nerwu za pomocą strzykawki. Następnie umieść elektrodę z korzeniem nerwowym przy rdzeniu kręgowym. Następnie przez co najmniej 20 minut należy rejestrować czynności elektrofizjologiczne generowane przez tkankę nerwową w warunkach normoksyjnych w celu określenia podstawowych parametrów preparatu.
Zamień roztwór perfuzyjny z ACSF z bąbelkami karbogenu na ACSF z bodźcem hipoksji i nagrywaj przez 15 minut. Następnie zmień roztwór perfuzyjny z powrotem na standardowy ACSF z pęcherzykami karbogenu i nagrywaj przez co najmniej kolejne 15 minut przed zakończeniem nagrywania.