Zapisy elektrofizjologiczne z Drosophila sensilla w odpowiedzi na lotne substancje zapachowe

Zamontuj żywą muchę Drosophila w tubie z odsłoniętą głową, czułkami przyklejonymi do taśmy klejącej i zabezpieczonymi prętem przytrzymującym.

Preparat należy przechowywać w stałym strumieniu nawilżonego powietrza, aby zapobiec wysuszeniu.

Przełóż elektrodę referencyjną przez clypeus, konstrukcję nośną chroniącą aparat gębowy, aby dotrzeć do układu krążenia.

Umieść elektrodę rejestrującą w pobliżu czułka, narządu zmysłów owada.

Włóż elektrodę do podstawy sensillum.

Rejestruj sygnały z określonymi skokami, aby potwierdzić prawidłowe położenie elektrod w pobliżu neuronów receptorów węchowych.

Podłącz wkład zawierający testowy środek zapachowy do rurki doprowadzającej.

Ustaw rurkę skierowaną w stronę anteny muchy, regulując wysokość i odległość od elektrod.

Za pomocą oprogramowania ustaw natężenie przepływu zapachu i ilość dozowania, a następnie uwolnij środek zapachowy.

Teraz nagraj sygnały elektryczne, aby uchwycić neuronalną reakcję muchy na środek zapachowy.

Aby wykonać nagrania, włóż elektrodę referencyjną do clypeusa szybkim i płynnym ruchem. Umieść go tuż pod naskórkiem, gdzie będzie miał kontakt z hemolimfą. Następnie powoli opuść elektrodę rejestrującą, aż znajdzie się w tej samej płaszczyźnie view, co czujnik docelowy. Następnie włóż elektrodę nagrywającą do podstawy sensillar.

Zanim przejdziesz dalej, upewnij się, że istnieje wysoki stosunek sygnału do szumu, z możliwymi do zidentyfikowania skokami z neuronów at4A i at4C. Neuron at4A powinien wystrzeliwać nie szybciej niż 20 herców.

Teraz podłącz wkład do rurki doprowadzającej nawaniacz. W takim przypadku dołączony jest wkład z kwasem oleopalmitynowym. Następnie za pomocą mikromanipulatora należy manewrować wkładem w kierunku preparatu, jednocześnie kierując go w stronę głowicy. Umieść końcówkę wkładu skierowaną bezpośrednio na antenę z odległości około 4 milimetrów. Wkład musi również znajdować się około 1 milimetr nad zamkiem.

Wkład może być ściśle otoczony elektrodami i szkiełkiem. Najlepiej, aby znajdował się co najmniej cztery milimetry od każdej elektrody. W celu stymulacji ustaw regulator przepływu nawaniacza na 500-milisekundowe impulsy i użyj natężenia przepływu 500 mililitrów na minutę. Dla każdego wybuchu bodźca rejestruj aktywność elektryczną przez 10 sekund.