JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:41 min. • July 8th, 2025
Przymocuj znieczulony, genetycznie zmodyfikowany Drosophila melanogaster na boku do szkiełka nakrywkowego.
Rozciągnij przednie kończyny i zabezpiecz je, aby odsłonić segmenty stępu.
Segmenty te mają neurony smakowe wyrażające kompleksy wskaźnikowe wapnia, które fluoryzują w postaci związanej z wapniem.
Narysuj hydrofobową barierę wokół muchy, aby zatrzymać roztwór.
Pozwól muszce dojść do siebie i nałóż buforowany roztwór soli fizjologicznej na odsłonięte segmenty stępu, aby je zwilżyć.
Pod mikroskopem konfokalnym obserwuj segmenty stępu i zobrazuj neurony smakowe na różnych głębokościach, aby uzyskać fluorescencję przed stymulacją.
Dodać do segmentu roztwór stymulacyjny zawierający lipofilowe ligandy.
Ligandy te wiążą się z receptorami neuronów smakowych, inicjując szlaki sygnałowe i wyzwalając otwieranie kanałów wapniowych.
Dzięki temu jony wapnia z płynu pozakomórkowego mogą dostać się do cytoplazmy i związać się z kompleksami wskaźnikowymi wapnia, powodując emisję fluorescencji.
Przy ponownej obserwacji wzrost fluorescencji neuronów potwierdza fizjologiczną odpowiedź neuronów na ligand.
Po znieczuleniu muchy przymocuj ją do 0,17-milimetrowego szkiełka nakrywkowego, używając bard
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych