Stymulacja optogenetyczna i elektrofizjologiczny zapis zdarzeń synaptycznych w wycinkach mózgu szczura

0 wyświetleń3:18 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zacznij od wycinka mózgu szczura zawierającego docelowy region neuronu połączony ze światłoczułym aksonem z innego regionu mózgu.

Umieść plasterek w zanurzonej komorze nagrywającej i zabezpiecz go kotwą do krojenia.

Pod mikroskopem zlokalizuj żądaną warstwę i zidentyfikuj docelowy neuron piramidowy.

Podnieś obiektyw mikroskopu, aby utworzyć menisk z powierzchnią plastru.

Opuść szklaną mikropipetę wypełnioną wewnątrzkomórkowym roztworem rejestrującym do tej menisku.

Dotknij zidentyfikowanej komórki piramidalnej końcówką pipety, aby utworzyć wgłębienie w membranie.

Zastosuj ssanie, aby utworzyć uszczelkę.

Zwiększaj ssanie, aż membrana pęknie, ustanawiając konfigurację całych komórek.

Za pomocą zamontowanego źródła światła nałóż impulsy świetlne na plasterek.

Te impulsy świetlne wyzwalają potencjał czynnościowy w światłoczułym aksonie, uwalniając neuroprzekaźniki w szczelinie synaptycznej.

Rejestruj reakcje neuronu piramidowego na te uwolnienia, aby przeanalizować wydajność synaptyczną.

W celu identyfikacji komórki docelowej umieść plasterek w komorze rejestracyjnej i unieruchom, używając kotwicy do cięcia. Przy małym powiększeniu, korzystając z oświetlenia w podczerwieni, przejdź do warstwy 5 LEC. Następnie zmień na obiektyw zanurzony w wodzie o dużym powiększeniu i zidentyfikuj neurony piramidowe.

Zaznacz położenie komórki na monitorze za pomocą taśmy. Następnie, aby utworzyć klamrę krosową na całe komórki, należy wyprodukować mikropipetę ze szkła borokrzemianowego i napełnić ją roztworem do zapisu wewnątrzkomórkowego. Umieść napełnioną mikropipetę w uchwycie elektrody i zastosuj nadciśnienie, mocno w ustnik podłączony do bocznego portu uchwytu elektrody.

Podnieś obiektyw mikroskopu tak, aby utworzył się menisk i włóż elektrodę do menisku, aż będzie widoczny na mikroskopie. Otwórz okno testowe uszczelnienia i sprawdź, czy rezystancja pipety wynosi od trzech do pięciu megaomów. Następnie dotknij zidentyfikowanej komórki końcówką pipety, co spowoduje wgłębienie w błonie komórkowej.

Następnie zastosuj podciśnienie poprzez zasysanie ustnika, zwiększając opór pipety. Kontynuuj stopniowe stosowanie podciśnienia, aż błona komórkowa pęknie, co spowoduje stany przejściowe pojemności całej komórki. Aby wprowadzić konfigurację cęgową prądu, należy użyć zamontowanej diody LED skierowanej na ścieżkę światła mikroskopu z kostkami filtrującymi i odpowiednią optyką, a następnie przyłożyć impulsy świetlne do warstwy za pomocą obiektywu 40x. Dostarczaj ciągi wielu impulsów świetlnych z częstotliwością 5 Hz, 10 Hz i 20 Hz, aby zbadać właściwości uwalniania presynaptycznego.

11:13

Ex vivo Optogenetyczna analiza obwodów strachu w wycinkach mózgu

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:07

Wewnątrzmózgowe zastrzyki stereotaktyczne in vivo do optogenetycznej stymulacji sygnałów wejściowych dalekiego zasięgu w wycinkach mózgu myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

04:44

Podwójne nagrania zewnątrzkomórkowe w hipokampie myszy i korze przedczołowej myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

14:57

Przygotowanie ostrych wycinków hipokampa od szczurów i myszy transgenicznych do badania zmian synaptycznych podczas starzenia się i patologii amyloidu

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:52

Badanie elektrofizjologiczne synaps retinogenikulacyjnych i kortykopochodnych w wycinkach mózgu myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:05

Fotostymulacja i zapisy klamer całokomórkowych neuronów w wycinkach hipokampa myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

04:08

Jednoczesne optyczne i elektrofizjologiczne monitorowanie komórek neuronalnych w wycinkach mózgu

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:10

Rejestrowanie odpowiedzi synaptycznych CA3-CA1 w wycinku hipokampa szczura

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:10

Generowanie spontanicznych i na żądanie zdarzeń ictal w wycinkach kory mózgowej myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:24

Rejestracja i modulacja aktywności padaczkowej w wycinkach mózgu gryzoni sprzężonych z układami mikroelektrod

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 1 sierpnia 2026