Ładowanie i rozładowywanie barwnika FM za pośrednictwem mikroelektrod w komórkach nerwowych larw Drosophila
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:43 min. • July 8th, 2025
Zacznij od larw Drosophila, z odsłoniętymi włóknami mięśniowymi i nerwowymi zanurzonymi w roztworze zawierającym pęcherzyki barwnika membranowego fluorescencyjnego lub barwnika FM.
Barwnik FM wiąże się z lipidami w błonie komórkowej, tworząc na niej powłokę fluorescencyjną
.Za pomocą mikromanipulatora umieść końcówkę mikroelektrody ssącej pod mikroskopem.
Skoncentruj się na włóknach nerwowych i mikroelektrodzie.
Użyj podciśnienia, aby zassać pętlę włókna nerwowego do mikroelektrody.
Zastosuj impulsy prądu, aby stymulować włókno nerwowe.
To wyzwala połączenie nerwowo-mięśniowe, w którym neuron ruchowy łączy się z włóknem mięśniowym, aby zainicjować endocytozę pęcherzyków synaptycznych.
Podczas tego procesu komórka pochłania błonę pokrytą barwnikiem FM, tworząc barwione pęcherzyki endocytarne, idealne do wizualizacji presynaptycznych etapów neuroprzekaźnictwa.
Zmyj barwnik FM i wymień roztwór zewnętrzny.
Zastosuj impulsy prądu, aby usunąć pęcherzyki zabarwione barwnikiem FM z komórki.
Do stymulacji elektrycznej przygotuj pipetę ssącą za pomocą ściągacza do mikroelektrod, aby uzyskać wymagany rozmiar stożka i końcówki. Następnie wypoleruj końcówkę mikroelektrody za pomocą mikrokuźni,
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych