JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:54 min. • July 8th, 2025
Umieścić szkiełko nakrywkowe zawierające embrionalne komórki nerki wykazujące ekspresję zależnych od światła kanałów jonowych i fluorescencyjne białko reporterowe w komorze pomiarowej z dodatkiem krzemu. Zamknij go i dodaj bufor zewnętrzny.
Umieść tę komorę pod mikroskopem. Umieść elektrodę do kąpieli wypełnioną agarem. Perfuzja z buforem w celu usunięcia resztek pożywki i martwych komórek.
Za pomocą filtra fluorescencyjnego zidentyfikuj komórkę docelową i skup się na niej.
Podłącz pipetę z plastrem do mikromanipulatora. Zastosuj nacisk, aby zapobiec zatkaniu i zbliż się do komórki.
Umieść pipetę w pobliżu kuwety i uwolnij nadciśnienie, aby utworzyć łatkę membrany na końcówce.
Po uformowaniu łaty membrany zastosuj podciśnienie, aby rozerwać membranę.
Zastosuj światło o określonej długości fali, aby otworzyć kanały jonowe. Ruch jonów jest rejestrowany jako zmiana napięcia przez elektrodę.
Na początek uszczelnij komorę pomiarową silikonem, aby zapobiec wyciekowi zewnętrznego bufora. Następnie umieść jedno szkiełko nakrywkowe w komorze i zamknij ją. Ostrożnie napełnij komorę buforem zewnątrzkomórkowym, aby zapobiec oderwaniu się komórek. Następnie umieść komorę pomiarową pod mikroskop
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych