Wpływ stymulacji prądem stałym na wywołane napady padaczkowe w wycinkach mózgu myszy

Weźmy wycinek mózgu myszy zawierający przyśrodkowe wzgórze lub MT, wystający do przedniej kory obręczy lub ACC.

Zabezpiecz plasterek w komorze wieloelektrodowej wypełnionej natlenionym aCSF, aby rejestrować sygnały elektryczne.

Umieść elektrody dodatnie i ujemne i zastosuj stymulację prądem stałym lub DCS, generując pole elektryczne w poprzek warstwy.

Wyłącz DCS i umieść elektrodę w MT. Dostarcz bodziec, aby wywołać potencjały czynnościowe w neuronach wzgórzowych, wyzwalając uwalnianie neuroprzekaźników.

Neuroprzekaźniki wywołują napływ jonów w neuronach ACC i generują sygnały elektryczne, zwane odpowiedziami synaptycznymi wywołanymi stymulacją.

Reaktywuj DCS, aby monitorować jego wpływ na odpowiedzi synaptyczne ACC.

Następnie dezaktywuj DCS i wprowadź leki wywołujące drgawki.

Leki zwiększają pobudliwość neuronalną, powodując, że bodziec wzgórzowy wytwarza ciągłe impulsy sygnałów w ACC, zwane wywołanymi napadami padaczkowymi.

Na koniec należy ponownie aktywować DCS, aby ocenić jego wpływ na napady, mierząc zmniejszenie amplitudy i czasu trwania napadów.

W tej procedurze należy zapewnić wytwarzanie jednorodnych pól elektrycznych poprzez przepuszczanie prądów między dwoma równoległymi drutami srebrnymi pokrytymi chlorkiem srebra, które są umieszczone w komorze MEA. Jeśli nie ma żadnych problemów, DCS powinien pozostać w zakresie od 0,5 do 2 miliamperów.

Następnie wyłącz DCS i stymuluj wzgórze elektrodą wolframową. Aby uzyskać maksymalne odpowiedzi synaptyczne w ACC, zapisz od 10 do 20 odpowiedzi i uśrednij je. Następnie włącz DCS i jednocześnie stymuluj wzgórze. Oceń zmiany amplitudy odpowiedzi ACC wywołanej stymulacją wzgórza podczas DCS.

Teraz wyłącz DCS. Dodać 250 mikromolowych 4-AP i 5 mikromolowych dwuśladów do roztworu perfuzyjnego i odczekać dwie do trzech godzin. Jeśli leki wpływają na wycinek mózgu, wycinek powinien wywołać korowe reakcje napadowe. Następnie zbierz od 10 do 20 odpowiedzi kory mózgowej przedniego zakrętu obręczy i zmierz amplitudę i czas trwania wywołanych elektrycznie wywołanych reakcji napadowych kory

mózgowej.

Następnie włącz DCS i jednocześnie stymuluj wzgórze. Oceń zmiany amplitudy i czasu trwania wywołanych reakcji napadowych kory mózgowej podczas aplikacji DCS. Następnie zastąp roztwór perfuzyjny świeżymCSF, aby wypłukać leki.