Ocena interakcji neuronów glutaminergicznego i komórek glejaka w kokulturze

Zacznij od pokrytego lamininą, podzielonego na przedziały urządzenia mikroprzepływowego umieszczonego na wzorzystym układzie wieloelektrodowym lub MEA.

Urządzenie przenosi hodowane neurony glutaminergiczne pochodzące z iPSC przyklejone do mikroelektrod MEA.

Neurony te komunikują się za pomocą sygnałów elektrycznych. Rejestruj te sygnały jako podstawową aktywność neuronalną.

Następnie zasiej urządzenie bogatymi w glutaminian pediatrycznymi komórkami glejaka o wysokim stopniu złośliwości, rodzajem komórki guza mózgu, i inkubuj.

Z biegiem czasu komórki glejaka wchodzą do kanału i przyczepiają się, ustanawiając kokulturę. Później komórki glejaka uwalniają glutaminian, neuroprzekaźnik pobudzający.

Uwolniony glutaminian oddziałuje z receptorami neuronalnymi, prowadząc do napływu jonów wapnia i sodu, który powoduje depolaryzację błony neuronalnej

.

To indukuje pobudliwość neuronów i zwiększa aktywność neuronów.

Ponownie zarejestruj sygnały elektryczne, a znaczny wzrost po wspólnej hodowli wskazuje na udaną interakcję neuronów i komórek glejaka.

Wysiewaj trypsynizowane komórki UW479 i BT35 na wierzchu dojrzałych przylegających neuronów glutaminergicznego w każdym dedykowanym urządzeniu mikroprzepływowym. Utrzymuj kokultury przez dwa dni w kontrolowanym środowisku w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla z neuronem glutaminergicznym D11 i dalszym podłożem.

Policz pediatryczne komórki glejaka o wysokim stopniu złośliwości, korzystając ze zdjęć mikroskopowych analizowanych za pomocą oprogramowania do analizy obrazu, aby ocenić ich żywotność i obliczyć procent komórek. Umieść MFD w urządzeniu rejestrującym i użyj dostępnego na rynku oprogramowania, aby przeprowadzić elektrofizjologiczny zapis neuronów glutaminergicznego w 21 dniu.

Przed wysiewem pediatrycznych komórek glejaka o wysokim stopniu złośliwości należy wykonać drugi zapis elektrofizjologiczny zróżnicowanych neuronów glutaminergicznego hodowanych jako kontrola, równolegle do kohodowli.