Barwienie immunologiczne fluorescencji neuronów hipokampa szczura w chipie mikroprzepływowym
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:50 min. • July 8th, 2025
Weźmy chip mikroprzepływowy zawierający neurony hipokampa szczura.
Chip zawiera zbiorniki somatyczne i aksonalne, z przedziałami podzielonymi mikrorowkami, skutecznie dzieląc neurony i izolując regiony somatyczne i aksonalne.
Usuń podłoże i dodaj formaldehyd. Inkubuj, aby naprawić neurony i zachować ich strukturę.
Usuń nadmiar formaldehydu i przemyj buforem. Następnie dodaj detergent, aby przepuszczalność neuronów.
Zastąp detergent roztworem blokującym, aby zablokować niespecyficzne miejsca wiązania.
Usuń roztwór blokujący i inkubuj z pierwszorzędowymi przeciwciałami, które wiążą się ze specyficznymi neuronalnymi markerami synaptycznymi, które są integralnymi białkami błonowymi na pęcherzykach synaptycznych.
Usunąć niezwiązane przeciwciała i przemyć buforem.
Inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi znakowanymi fluoroforem, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi skierowanymi przeciwko markerom synaptycznym.
Usunąć niezwiązane przeciwciała drugorzędowe i przemyć buforem.
Pod mikroskopem konfokalnym zobrazuj chip, aby uwidocznić fluorescencyjne markery synaptyczne neuronów.
Aby rozpocząć barwienie immunologiczne fluorescencyjne, usuń większość pożywki z chipa, utrzymując
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych