Ocena funkcji motorycznych w eksperymentalnym mysim modelu autoimmunologicznego zapalenia nerwu

Umieść mysz na bieżni, aby rejestrować jej ruch podczas biegu, oceniając jej funkcję motoryczną, która reprezentuje zdolność do kontrolowania ruchów ciała.

Po badaniu wstrzyknąć toksynę krztuścową do jamy brzusznej znieczulonej myszy, aby osłabić jej barierę krew-nerwy.

Następnie usuń włosy między łopatkami myszy, zdezynfekuj obszar i wstrzyknij peptydy naśladujące mielinę z adiuwantem do tkanki podskórnej.

Powtórz oba wstrzyknięcia, aby uzyskać optymalne reakcje.

Peptydy stymulują komórki prezentujące antygen, które migrują do węzłów chłonnych i wytwarzają autoreaktywne limfocyty T.

Te limfocyty T dostają się do krwiobiegu, przekraczają upośledzoną barierę krew-nerw i atakują nerwy obwodowe, prowadząc do uwalniania cytokin.

To przyciąga makrofagi i limfocyty B, które uwalniają cząsteczki efektorowe, które degradują osłonkę mielinową.

Rozpad mieliny upośledza przekazywanie sygnałów nerwowych i początek eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia nerwów lub EAN.

Na koniec powtórz test na bieżni. Mysz wykazuje trudności z bieganiem i koordynacją ruchów kończyn, co wskazuje na dysfunkcję motoryczną.

Na trzy dni przed indukcją choroby włącz aparat do oceny funkcji motorycznych i włącz przycisk światła. Podnieś mysz i opuść ją na pojemnik z czerwonym barwnikiem spożywczym. Umieść mysz w komorze do chodzenia i ustaw prędkość bieżni na 15 centymetrów na sekundę. Włącz bieżnię i kliknij "nagraj", aby użyć systemu obrazowania funkcji chodu do uchwycenia ruchu myszy podczas biegu przez 36 sekund.

Po 36 sekundach zatrzymaj nagrywanie i bieżnię, a następnie zapisz plik wideo z biegu treningowego w wyznaczonym folderze.

Na dzień przed pierwszym szczepieniem użyj strzykawki o pojemności 0,5 mililitra wyposażonej w igłę o rozmiarze 30_1/2, aby podać 1,6 mikrograma na mililitr toksyny krztuścowej w 250 mikrolitrach mysiego izotonicznego PBS IP, znieczulonym sześcio- lub ośmiotygodniowym samcom myszy C57 Black 6.

Następnego dnia połączyć równe objętości świeżo przygotowanych roztworów peptydu w 0,9% soli fizjologicznej i 20 miligramów na mililitr Mycobacterium tuberculosis w kompletnym adiuwantzie Freunda w ubijaku do kulek i mieszać roztwory z maksymalną prędkością przez 1 minutę w temperaturze pokojowej.

Załadować inokulum do strzykawki wyposażonej w igłę o rozmiarze 23, a następnie odwrócić i wstrząsnąć strzykawką przed usunięciem powietrza z trzonu strzykawki.

Przed podaniem inokulum usuń włosy tuż obok linii środkowej między łopatkami i zdezynfekuj odsłoniętą skórę 70% etanolem.

Następnie użyj pary kleszczy Addison, aby chwycić skórę i dostarczyć 50 mikrolitrów roztworu do myszy, której wstrzyknięto toksynę krztuścową poprzez wstrzyknięcie podskórne.

Następnego ranka podaj 1,2 mikrograma na mililitr toksyny krztuścowej w 250 mikrolitrach PBS IP, jak właśnie pokazano, a następnie kolejne 1,2 mikrograma na mililitr toksyny krztuścowej IP 48 godzin później.

Trzy dni później, po trzecim wstrzyknięciu krztuśca, należy podać kolejne 50 mikrolitrów świeżo przygotowanego inokulum w to samo miejsce wstrzyknięcia, co poprzednio, i monitorować wynik kliniczny i funkcje motoryczne zwierząt dwa razy w tygodniu, aż do końca eksperymentu.