Barwienie immunologiczne interneuronów w odcinku hipokampa szczura
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:36 min. • July 8th, 2025
Weź utrwalony odcinek hipokampa szczura zawierający interneuron wypełniony biocytyną, cząsteczką sprzężoną z biotyną.
Następnie dodaj roztwór zawierający białka blokujące i niejonowy detergent, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu i przepuszczalności neuronów.
Inkubuj z pierwotnym przeciwciałem skierowanym przeciwko specyficznym receptorom kannabinoidowym na interneuronach.
Przemyć buforem w celu usunięcia nadmiaru przeciwciał.
Następnie dodaj barwnik fluorescencyjny sprzężony ze streptawidyną i przeciwciało drugorzędowe sprzężone z fluoroforem.
Podczas inkubacji streptawidyna silnie wiąże się z biocytyną, umożliwiając wizualizację interneuronu wypełnionego biocytyną, podczas gdy przeciwciało drugorzędowe celuje w przeciwciała pierwotne związane z receptorem na interneuronach.
Przepłukać buforem, usuwając niezwiązane cząsteczki.
Teraz zamontuj sekcję za pomocą wodnego nośnika montażowego. Umieść szkiełko nakrywkowe i zamknij je.
Za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego zwizualizuj ekspresję interneuronu wypełnionego biocytyną i receptora kannabinoidowego, umożliwiając analizę morfologii interneuronu i rozmieszczenia receptorów.
Zamknij tkanki 10% serum blokującego na godzinę w temp
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych