Barwienie immunofluorescencyjne mózgów Drosophila do obrazowania pojedynczych komórek glejowych

0 wyświetleń3:26 min • July 8th, 2025

Zacznij od mózgów transgenicznych much Drosophila, zawierających różne typy komórek glejowych zawierających specyficzny dla komórek system rekombinazy.

Napędza ekspresję białka powierzchniowego komórki połączonego z różnymi epitopami antygenowymi na tym samym typie komórek.

Potraktuj tkankę utrwalaczem, aby usieciować białka i zachować architekturę tkanki.

Umyć, aby usunąć nadmiar utrwalacza.

Dodaj białka blokujące, aby zamaskować niespecyficzne miejsca wiązania, aby zmniejszyć barwienie tła.

Inkubuj tkankę z pierwszorzędowym koktajlem przeciwciał, który wiąże się z różnymi epitopami wyrażającymi się na komórkach glejowych.

Przemyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał pierwszorzędowych.

Inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z fluoroforem, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.

Przemyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał drugorzędowych.

Zamontuj mózg w przekładce obrazowej i umieść szkiełko nakrywkowe. Przekładka tworzy komorę dla tkanki, zachowując jej trójwymiarową strukturę.

Różne komórki tego samego typu glejowego znakowane różnymi przeciwciałami sprzężonymi z fluoroforem pozwalają zrozumieć interakcje komórka-komórka.

Przenieś izolowane mózgi za pomocą końcówki pipety P10 do probówki mikrowirówkowej o pojemności 200 mikrolitrów z roztworem utrwalającym. Nigdy nie dotykaj mózgu za pomocą kleszczy. Inkubować tkanki chronione przed światłem. Unikaj zasysania mózgu podczas przenoszenia roztworu.

Aby usunąć utrwalacz, użyj trzech lub więcej 15-minutowych myć roztworem myjącym. Następnie zablokuj tkanki roztworem blokującym na 30 minut lub dłużej. Następnie zastąp roztwór blokujący przeciwciałami pierwszorzędowymi rozcieńczonymi w roztworze płuczącym i inkubuj mózgi przez noc w temperaturze 4 stopni Celsjusza.

Aby usunąć przeciwciała pierwszorzędowe, należy użyć trzech 1-godzinnych płukań w roztworze do mycia. Następnie dodaj drugorzędowe przeciwciała sprzężone z fluoroforem w roztworze do płukania i inkubuj mózgi przez noc w temperaturze 4 stopni Celsjusza lub przez 4 godziny w temperaturze pokojowej. Aby całkowicie zmyć niezwiązane przeciwciała, należy użyć trzech 1-godzinnych płukań w roztworze myjącym, a następnie dłuższego płukania PBS.

Następnie zamontuj mózgi. Przygotuj dwa szkiełka nakrywkowe z przekładką obrazową. W przekładce i na dodatkowe szkiełko nakrywkowe nałóż 10 mikrolitrów podłoża montażowego ze środkiem zapobiegającym blaknięciu. Następnie, za pomocą pipety P10, przenieś mózgi do szkiełka nakrywkowego, umieszczając je obok pożywki wraz z odrobiną PBS. Nie pozwól, aby chusteczka wyschła.

Teraz ostrożnie przenieś mózgi do podłoża mocującego za pomocą pipety. Na koniec przenieś je na podłoże w przekładce i ułóż je za pomocą kleszczyków. Następnie usuń samoprzylepną wkładkę z przekładek i przymocuj szkiełko nakrywkowe. Zabezpiecz szkiełko nakrywkowe niewielkim naciskiem za pomocą kleszczy i natychmiast przystąp do obrazowania.

09:20

Sekwencyjna immunofluorescencja i immunohistochemia na kriowyciętych zarodkach danio pręgowanego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:12

Obrazowanie na żywo migracji komórek glejowych w tarczceImaginal oka Drosophila

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

05:20

Wizualizacja neuronów ciała grzyba w mózgach Drosophila za pomocą barwienia immunologicznego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:33

Znakowanie pojedynczych komórek w ośrodkowym układzie nerwowym Drosophila melanogaster

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:10

Wspomagane sonikacją barwienie immunofluorescencyjne tkanek drobnoustrojowych i larwalnych drobnoustrojowych i larwalnych Drosophila in situ

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:50

Obrazowanie na żywo neuroblastów larw Drosophila

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:13

Rozwarstwienie i barwienie immunofluorescencyjne neuronów ciała grzyba i fotoreceptorów w mózgach dorosłych Drosophila melanogaster

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:30

Zastosowanie techniki MultiColor FlpOut do badania wysokorozdzielczych morfologii pojedynczych komórek i interakcji komórkowych gleju u Drosophila

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:52

Zastosowania immobilizacji tkanek Drosophila ze skrzepami fibryny do obrazowania na żywo

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:06

Obrazowanie żywymi komórkami mózgów larwalnych Drosophila melanogaster

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 29 sierpnia 2026