Barwienie immunofluorescencyjne mózgów Drosophila do obrazowania pojedynczych komórek glejowych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:26 min. • July 8th, 2025
Zacznij od mózgów transgenicznych much Drosophila, zawierających różne typy komórek glejowych zawierających specyficzny dla komórek system rekombinazy.
Napędza ekspresję białka powierzchniowego komórki połączonego z różnymi epitopami antygenowymi na tym samym typie komórek.
Potraktuj tkankę utrwalaczem, aby usieciować białka i zachować architekturę tkanki.
Umyć, aby usunąć nadmiar utrwalacza.
Dodaj białka blokujące, aby zamaskować niespecyficzne miejsca wiązania, aby zmniejszyć barwienie tła.
Inkubuj tkankę z pierwszorzędowym koktajlem przeciwciał, który wiąże się z różnymi epitopami wyrażającymi się na komórkach glejowych.
Przemyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał pierwszorzędowych.
Inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z fluoroforem, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Przemyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał drugorzędowych.
Zamontuj mózg w przekładce obrazowej i umieść szkiełko nakrywkowe. Przekładka tworzy komorę dla tkanki, zachowując jej trójwymiarową strukturę.
Różne komórki tego samego typu glejowego znakowane różnymi przeciwciałami sprzężonymi z fluoroforem pozwalają zrozumieć interakcje komórka-komórka.
Przenieś izolowane
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych