JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:11 min. • July 8th, 2025
Umieść zmienne i zmutowane larwy Drosophila w oddzielnych naczyniach zawierających bufor wolny od glukozy.
Wypreparuj larwy, aby usunąć narządy wewnętrzne, odsłaniając ośrodkowy układ nerwowy lub OUN.
Ośrodkowy układ nerwowy obejmuje brzuszny rdzeń nerwowy, w którym znajdują się neurony ruchowe. U zmutowanych larw neurony te wykazują podwyższony metabolizm glukozy.
Neurony ruchowe w obu grupach wyrażają wewnątrzkomórkowe czujniki glukozy zawierające fluorofory dawcy i akceptora.
Umieść larwy pod mikroskopem konfokalnym. Po wzbudzeniu fluorofor dawcy emituje fluorescencję.
Zlokalizuj neurony ruchowe za pomocą tej fluorescencji.
Zastąp bufor roztworem uzupełnionym glukozą.
Glukoza dostaje się do neuronów, wiążąc się z czujnikami i wywołując zmianę konformacyjną, która zbliża do siebie dwa fluorofory.
Po wzbudzeniu akceptor pochłania energię emitowaną przez donor, zwaną transferem energii rezonansu fluorescencji lub FRET, i emituje fluorescencję.
Sygnał FRET koreluje z wychwytem glukozy. Wyższa intensywność sygnału akceptorowego u zmutowanych larw w porównaniu z kontrolą wskazuje na zwiększony metabolizm glukozy.
Przed przystąpieniem do sekcji włącz mikroskop obrazowy i lasery. Następ
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych