Test fagocytozy żywych komórek komórek podobnych do mikrogleju przy użyciu ludzkich synaptosomów
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:28 min. • April 28th, 2025
Weź płytkę wielodołkową zawierającą komórki podobne do mikrogleju wykazujące aktywność fagocytarną.
Inkubuj z plamą jądrową, aby oznaczyć jądra.
Dodaj inhibitor polimeryzacji aktyny do dołka kontroli negatywnej.
Podczas inkubacji inhibitor wiąże się z filamentami aktyny, hamując polimeryzację aktyny i fagocytozę.
Utrzymuj płytkę w niskich temperaturach i dodaj wrażliwe na pH ludzkie synaptosomy znakowane barwnikiem - izolowane fragmenty nerwowych zakończeń synaptycznych.
Odwiruj płytkę w niskich temperaturach, aby promować interakcje komórka-synaptosomy, ale zapobiec przedwczesnemu wchłanianiu.
Przenieś płytkę do systemu obrazowania żywych komórek.
W badanym dołku synaptosomy są fagocytozowane i łączą się z lizosomami, tworząc fagolizosomy. Lizosomalne środowisko kwaśne aktywuje barwnik, powodując jego fluorescencję.
Z biegiem czasu, w studni testowej, więcej synaptosomów zostaje pochłoniętych, powodując dalszy wzrost fluorescencji.
Jednak w dołku kontroli ujemnej polimeryzacja aktyny jest hamowana, co uniemożliwia wychwyt synaptosomy. Uzyskana minimalna fluorescencja potwierdza zależność fluorescencji od fagocytozy za pośrednictwem aktyny.
W dniu testu usuń 40 mikrolitrów pożywki z dołka i
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych