Obrazowanie mikroskopem konfokalnym nienaruszonych altan dendrytycznych i morfologii kręgosłupa w oczyszczonym mózgu myszy
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:02 min. • May 29th, 2025
Weźmy oczyszczony mózg myszy z komórkami wyrażającymi białka fluorescencyjne i lipidy usunięte w celu uzyskania przezroczystości do obrazowania głębokich struktur w wysokiej rozdzielczości.
Siatka hydrożelowa zachowuje biomolekuły i utrzymuje sieci neuronowe.
Przenieś mózg do komory obrazowania zawierającej pierścień agarozowy dla wsparcia.
Zabezpiecz tkankę klejem i wypełnij komorę roztworem dopasowującym współczynnik załamania światła, aby zminimalizować rozpraszanie światła i stworzyć stabilne środowisko obrazowania.
Umieść komorę na stoliku mikroskopu konfokalnego i delikatnie opuść obiektyw do roztworu, aby ustanowić ciągłą kolumnę kontaktu.
Użyj epifluorescencji, aby zlokalizować obszary zainteresowania. Następnie dostosuj parametry lasera i obrazowania, aby zoptymalizować jakość obrazu.
Uchwyć serię stosów z, aby stworzyć trójwymiarową reprezentację tkanki.
Użyj odpowiedniego oprogramowania do analizy morfologii komórek, w tym altan dendrytycznych, ich kolców oraz rozmieszczenia i gęstości neuronów.
Aby zbudować dużą komorę do obrazowania tkanek dla tkanek o grubości większej niż 5 milimetrów, użyj 10-centymetrowego szklanego naczynia o wysokiej ściance. Umieść stożkową rurkę
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych