Wyłuszczenie oka myszy do zdalnego fenotypowania o wysokiej przepustowości
19 listopada 2011
Technika preparacji ilustruje enukleację oka myszy w celu utrwalenia tkanki w celu przeprowadzenia fenotypowania w wysokoprzepustowych badaniach przesiewowych.
Ten film zilustruje oko myszy i zarodkowanie lub usunięcie gałki ocznej z oczodołu. Gałka oczna jest ograniczona dolnym brzegiem powieki. Oto kant przyśrodkowy lub nosowy.
Z tyłu znajduje się kantus skroniowy lub boczny. Powyżej znajduje się górny margines powieki. Oto próbka chirurgiczna.
Igła jest skierowana do przezroczystej rogówki. Widzimy trochę soczewki wystającej poza tęczówkę. Przysłona jest tutaj w kolorze brązowym, zakrywając soczewkę.
Najważniejszym punktem orientacyjnym operacji jest ta biała linia, w przeciwnym razie rąbek będzie robił ranę kłutą tuż za nią. Tylna połowa kuli ziemskiej znajduje się za rąbkiem i wskazujemy na przyczep mięśniowy. Widać tu mięsień przylegający do kuli ziemskiej, a następnie tkankę łączną, która wypełnia orbitę i obejmuje gruczoł ariański.
I wreszcie, to jest biały długi pasek nerwu wzrokowego z rozwarstwienia. Używając zakrzywionych kleszczy opatrunkowych, dostosowanych za pomocą ostrej końcówki, zacznij od rozsunięcia powiek. Ma to tendencję do podpierania opiekania oka na zewnątrz i do tyłu.
Ostrożnie użyj kleszczy, aby wejść na orbitę i za gałkę oczną, ściśnij je delikatnie za gałką oczną, nie ściskając jej i pociągnij do przodu. Powinieneś być w stanie uchwycić tkankę łączną, a nie gałkę oczną. Jeśli odwrócisz gałkę oczną na bok, zobaczysz tkankę oczodołu wraz z białym nerwem wzrokowym.
To jest druga sekcja tylko po to, aby pokazać, że znowu wchodzisz do kantu, wciskasz kleszcze za gałkę oczną, chwytasz tkankę łączną i ciągniesz ją do przodu, nie naciskając na samą gałkę oczną. Ponownie można zobaczyć tkankę łączną w długim pasku białego nerwu wzrokowego. Aby zrobić ranę kłutą, chwyć gałkę oczną za pomocą przyczepu mięśniowego i wbij igłę za rąbkiem tuż obok miejsca, w którym trzymasz oko, aby je ustabilizować.
Umożliwi to utrwalacz dostanie się do oka. Jeśli wykonasz nakłucie daleko od miejsca, w którym trzymasz oko, gałka oczna będzie bardzo niestabilna i trudno będzie zrobić tę ranę, o ile nie uciskasz oka ani nie wywierasz nadmiernego nacisku. Możesz również chwycić całą tkankę łączną tuż za samą gałką oczną.
Niektóre utrwalacze nie wymagają rany kłutej. Ogólnie rzecz biorąc, umieszczamy oko w fiolce scyntylacyjnej o pojemności pięciu cm3 z co najmniej trzema cm3 utrwalacza, aby upewnić się, że oko jest zanurzone. W przypadku zwierząt utrwalonych w obfitości konieczna jest ostra sekcja.
Używamy zakrzywionych kleszczyków calibri i zakrzywionych nożyczek wescott. Chwyć dolną powiekę kleszczami kalibru. Włóż nożyczki do kości oczodołu i zacznij przecinać tkankę łączną.
Używamy krzywej z dala od gałki ocznej i unikamy w rozmiarze. Każde oko będzie pracować wzdłuż dolnego brzegu powieki od jednego kantu do drugiego. W pewnym momencie większość tkanki łącznej zostanie usunięta i możesz wsunąć nożyczki za kulę ziemską i ją odciągnąć.
Oto kolejny przykład, włożenie nożyczek do orbity, ale przy kości oczodołu, a nie w gałce ocznej i odcięcie tkanki łącznej. To zacznie uwalniać gałkę oczną, która jest jak piłka do koszykówki w koszu. Użyj kleszczy, aby cofnąć powieki i wykonaj delikatne skróty wokół gałki ocznej.
Tutaj chwytamy tkankę łączną lub przyczep mięśniowy za pomocą Collibra i kończymy odcinanie gałki ocznej od oczodołowej tkanki łącznej. Po odpowiednim zamocowaniu gałek ocznych i jeśli zajdzie potrzeba ich transportu, umieszczamy folię para. My wokół fiolki z sacyjnością.
Opakowanie musi być zgodne z przepisami obowiązującymi na Twojej uczelni i przepisami rządowymi. Zazwyczaj umieszczamy je w pojemniku z odrobiną bawełny Aby złapać jakikolwiek płyn, pojemnik ten musi być bardzo szczelnie zamknięty. Ten pojemnik transportowy jest następnie umieszczany w torbie z folii bąbelkowej.
Jest on umieszczany w płynnym laboratoryjnym opakowaniu wysyłkowym wraz z wszelką dokumentacją.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
To wideo ilustruje technikę enukleacji oka mysiego, która jest kluczowa dla fiksacji tkanek w wysokowydajnych badaniach fenotypu. Procedura polega na usunięciu gałki ocznej z jej gniazda, podkreślając anatomiczne punkty odniesienia dla jasności.
Kluczowe elementy badania
Obszar nauki
- Neuronauka
- Biologia
Tło
- Enukleacja jest krytyczną techniką w różnych badaniach biologicznych.
- Rozumienie anatomii oka pomaga w precyzyjnych zabiegach chirurgicznych.
- Ta metoda jest niezbędna dla zastosowań wysokowydajnych przesiewów.
- Właściwa fiksacja tkanek jest konieczna dla dokładnego fenotypu.
Cel badania
- Aby zademonstrować technikę enukleacji do celów edukacyjnych.
- Aby zapewnić wizualny przewodnik dla badaczy wykonujących podobne procedury.
- Aby zwiększyć zrozumienie punktów anatomicznych podczas operacji.
Stosowane metody
- Wideo demonstracyjne procesu enukleacji.
- Identyfikacja kluczowych cech anatomicznych oka mysiego.
- Krok po kroku wskazówki do wykonania procedury.
- Pomoce wizualne wspierające naukę i zastosowanie.
Główne wyniki
- Jasna wizualizacja techniki enukleacji.
- Identyfikacja kąta przyśrodkowego i bocznego.
- Demonstracja preparatu chirurgicznego po enukleacji.
- Zwiększone zrozumienie procedury dla wysokowydajnych przesiewów.
Wnioski
- Wideo służy jako skuteczne narzędzie edukacyjne dla badaczy.
- Zrozumienie procesu enukleacji jest niezbędne dla udanej fiksacji tkanek.
- Właściwa technika może poprawić wyniki w badaniach fenotypu.
Często zadawane pytania
Executive Industry Relevance
Remote high-throughput phenotyping of mouse eyes enables distributed genetic resource utilization and accelerates discovery of genotype-phenotype correlations in ophthalmic disease models. Standardized enucleation and tissue transfer protocols reduce geographic and operational barriers, supporting scalable, multi-site preclinical research. This approach enhances portfolio-wide access to rare or geographically dispersed transgenic lines for early-stage target validation and phenotypic screening.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Facilitates systematic collection of ocular tissues from diverse genetic backgrounds for hypothesis-driven studies.
- Enables functional validation of candidate genes implicated in ocular development and disease.
- Supports predictive confidence in linking genetic perturbations to phenotypic outcomes.
Screening & Assay Development
- Provides standardized, fixed tissue samples suitable for downstream molecular and morphological assays.
- Improves reproducibility and comparability across multi-site phenotyping screens.
- Enables scalable preparation of samples for high-throughput screening platforms.
Translational & Preclinical Research
- Aligns mouse phenotyping with translational biomarker discovery for human ophthalmic diseases.
- Supports continuity from genetic discovery to preclinical validation of disease mechanisms.
- Reduces logistical barriers to accessing rare or geographically distributed mouse models.
Pipeline & Workflow Integration
This remote enucleation and tissue transfer protocol integrates into the early discovery and preclinical continuum, bridging genetic model generation with centralized phenotyping and analysis.
- Discovery Biology: Enables hypothesis testing and mechanistic de-risking by providing access to diverse genetic models.
- Screening: Standardizes sample preparation for reproducible, quantitative phenotyping assays.
- Analytics: Supports acquisition of morphological and molecular readouts for comparative analysis.
- Translational Research: Facilitates alignment of mouse phenotypes with human disease biomarkers.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable protocol for distributed tissue acquisition across research networks.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in genotype-phenotype associations and target validation.
- Operational Value: Streamlines logistics, standardizes procedures, and enables multi-site scalability.
- Strategic Value: Enhances go/no-go decision-making by broadening access to phenotypic data from rare models.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of genetic targets and disease models.
Implementation Considerations
- Requires surgical proficiency in mouse eye enucleation and tissue handling.
- Needs access to fixation reagents, validated shipping containers, and compliance with shipping regulations.
- Demands cross-site standardization of collection and documentation protocols.
- Adaptable to both unfixed and perfusion-fixed tissue workflows as supported by the protocol.
- Dependent on institutional and governmental guidelines for biological sample transport.
