Obrazowanie uwalniania neuroprzekaźników za pomocą komórkowych neuroprzekaźników fluorescencyjnych

Weźmy mysz z oknem czaszkowym zawierającym cienką warstwę czaszki, aby umożliwić wizualizację mózgu.

Ruch głowy jest ograniczony za pomocą dołączonego pałąka.

Kora mózgowa jest wstępnie wstrzykiwana za pomocą neuroprzekaźników opartych na komórkach, zaprojektowanych fluorescencyjnie reporterów lub CNiFER, które są komórkami reporterowymi, które umożliwiają wykrywanie uwalniania neuroprzekaźników w czasie rzeczywistym.

CNiFER wyrażają receptor neuroprzekaźnika sprzężony z białkiem G i cytoplazmatyczny detektor wapnia, który składa się z domeny wiążącej wapń połączonej z fluoroforami donorowymi i akceptorowymi.

Za pomocą mikroskopu dwufotonowego wzbudzić detektor, aby spowodować emisję fluorescencji donorowej i umożliwić wizualizację CNiFER.

Aktywność neuronalna docierająca do kory mózgowej powoduje uwalnianie neuroprzekaźników.

Te neuroprzekaźniki wiążą się z receptorami CNiFER i aktywują szlaki sygnałowe, które indukują uwalnianie wapnia z retikulum endoplazmatycznego.

Zwiększony cytoplazmatyczny wapń wiąże się z detektorem, powodując zmianę konformacyjną, która zbliża fluorofory.

Dawca przekazuje energię do akceptora w celu stymulacji emisji fluorescencji akceptora, co wskazuje na uwalnia