JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:13 min. • August 7th, 2025
Zacznij od znieczulonej myszy i nałóż środek rozszerzający źrenice.
Pod mikroskopem należy otworzyć powiekę i lekko wysunąć oko, aby odsłonić miejsce wstrzyknięcia.
Nałóż kroplę okulistycznego roztworu lepkosprężystego, a następnie umieść szkiełko nakrywkowe, aby uwidocznić siatkówkę.
Za pomocą cienkiej igły utwórz otwór za połączeniem rogówka-twardówka, unikając uszkodzenia naczyń krwionośnych i soczewki.
Przez ten wstępnie nakłuty otwór włóż strzykawkę stycznie do przestrzeni podsiatkówkowej w pobliżu nabłonka barwnikowego siatkówki lub RPE, który wspiera neurony siatkówki.
Wstrzyknąć wektor lentiwirusowy przenoszący geny docelowe do przestrzeni podsiatkówkowej.
Obserwuj tworzenie się pęcherzyka podsiatkówkowego w wyniku nagromadzenia płynu, potwierdzając pomyślne dostarczenie wektora.
Delikatnie zamknij powiekę, aby zakryć miejsce wstrzyknięcia i pozwolić myszy dojść do siebie.
Lentiwirus dostaje się do RPE poprzez endocytozę, uwalnia swój materiał genetyczny i przekształca go w odpowiednie DNA, które integruje się z genomem gospodarza, umożliwiając ekspresję genów.
Najpierw przygotuj mikrolitrową strzykawkę z igłą o rozmiarze 33. Wysterylizuj go za pomocą gazowego tlenku etylenu. Nastę
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych