Uproszczona technika wytwarzania modelu rany niedokrwiennej

Ogólnym celem poniższego eksperymentu jest umożliwienie tworzenia ran niedokrwiennych, nie tylko u normalnych królików, ale także u królików o obniżonej odporności, takich jak króliki w podeszłym wieku lub z cukrzycą. Wszystkie obecnie stosowane techniki tworzenia ran niedokrwiennych są wysoce inwazyjne i jak dotąd żadna z tych technik nie może być stosowana u zwierząt z cukrzycą. Procedura ta wykorzystuje minimalnie inwazyjną chirurgię, która rozpoczyna się od wykonania trzech małych nacięć skóry nad trzema wiązkami naczyniowymi.

Następnym krokiem jest odizolowanie i ochrona żyły centralnej i pęczka naczyniowego dorszowego, tak aby krążenie krwi do ucha zostało zmniejszone, ale nie całkowicie wyeliminowane. Na koniec pozostałe naczynia, nerwy i tkanki podskórne są odcinane lub podwiązywane przez nacięcia skóry. Niedokrwienie ucha potwierdza brak tętna tętniczego, wygląd ucha, różnica temperatur i podskórne nasycenie tlenem.

Ta małoinwazyjna operacja może wydawać się trudna do wykonania, ale w rzeczywistości jest bardzo łatwa. Główną zaletą tej techniki jest to, że ma ona bardzo małe uszkodzenia skóry. Odkąd po raz pierwszy opublikowaliśmy tę technikę w 2007 roku, otrzymaliśmy wiele pytań.

Od tego czasu jeszcze bardziej uprościliśmy tę procedurę. Aby jeszcze bardziej ułatwić to bez użycia mikroskopu, Zacznij od zważenia wybranego królika, znieczul królika za pomocą mieszaniny ketaminy i ksylazyny. Monitoruj parametry życiowe królika, po stronie grzbietowej można zidentyfikować trzy wiązki naczyniowe, które zaopatrują ucho.

Są to wiązki centralne, które są największe z zabezpieczeniami łączącymi się z innymi statkami. Pęczek rozpieszczony, w którym tętnica jest zwykle bardzo mała lub nieobecna, oraz pęczek czaszkowy. Po stronie brzusznej dystalna skóra nie otrzymuje dopływu krwi z naczyń proksymalnych.

Zamiast tego wiązki naczyń na uchu grzbietowym mają liczne gałęzie penetrujące przez chrząstkę, aby zapewnić dopływ krwi do dystalnej skóry brzusznej. U niektórych królików bardzo małe naczynie podskórne występuje również po stronie brzusznej, które dostarcza krew do nie więcej niż jednej trzeciej brzusznej skóry. W otwartym obwodowym nacięciu skóry zasadniczo nie ma krwawienia z nacięcia brzusznego.

Zanim przejdziesz dalej, upewnij się, że królik nie reaguje na bodźce bólowe za pomocą szczypania palca u nogi i odruchu wzrokowego, chroń oczy zwierzęcia, stosując sztuczną łzę. Maść. Utrzymuj królika w cieple podczas zabiegu za pomocą poduszki grzewczej. Następnie, za pomocą Betadine i alkoholu, szoruj oba uszy i otaczające je skóry, udrapuj królika, tak aby odsłonięte były tylko dwoje uszu.

Jedno ucho będzie niedokrwione, podczas gdy drugie będzie służyć jako kontrola. Narzędzia używane do operacji to nóż chirurgiczny z ostrzem numer 15, dwie pary przetworników, jeden do skóry, a drugi do innych tkanek miękkich. Trzy zaciski na komary, jedna lub dwie pary zakrzywionych mikronożyczek, jedna para małych nożyczek do przecinania szwów i twardych tkanek, uchwyt na igłę i kilka stempli ze stali nierdzewnej.

Rozpocznij operację od zidentyfikowania trzech szypułek naczyniowych zgodnie z tętnicami i żyłami. Korzystanie z ostrza o numerze 15. Ostrożnie wykonaj jedno pionowe nacięcie skóry na centralnej szypułce naczyniowej.

Odizoluj żyłę centralną od otaczających tkanek i chroń ją. Ten krok okrąża. Żyła centralna do retrakcji.

Wypreparuj nerw centralny wolny. Zwykle znajduje się po rozpieszczonej stronie żyły. Nerw odcina się nożyczkami.

Wypreparuj tętnicę centralną swobodnie. Zwykle znajduje się po stronie czaszki i głębiej niż żyła, zwiąż tętnicę i podziel ją. Oczyść tkanki wokół żyły centralnej nad chrząstką ucha.

Nad szypułką pieszcza wykonuje się drugie nacięcie skóry. Aby zachować pakiet. Naczynia są swobodnie preparowane i otoczone w celu ochrony.

Jest to szczególnie przydatne, gdy żyła jest duża, jak u tego królika. Zrób tunel między tym a pierwszym nacięciem. Przetnij tkanki podskórne nad chrząstką.

Trzecie nacięcie skóry wykonuje się nad pęczkiem czaszki. Cała ta wiązka jest podwiązana i oddzielona. Skóra nad trzecim pęczkiem jest rozcinana.

Żyła ta znajduje się bardzo blisko skóry, więc nie należy ciąć zbyt głęboko. Cała wiązka naczyń jest następnie rozcinana, wiązana i oddzielana. Za pomocą noża i nożyczek wykonaj tunel podskórny.

Trzy nacięcia przerywają wszystkie tkanki podskórne, mięśnie, nerwy i małe gałęzie naczyniowe. Użyj dodatkowych ostrych i sekcji, aby oczyścić podstawę, pozostawiając gołą chrząstkę o szerokości około pięciu do 10 milimetrów. Krwawienie można kontrolować za pomocą ciśnienia gazy.

Elektrokoagulacja nie jest konieczna. Skóra wewnątrz ucha nie jest przecięta, ponieważ nie przenosi dużo krwi. Ważnym aspektem tej procedury jest zapewnienie odpowiedniego rozwarstwienia tunelu podskórnego przy jednoczesnej ochronie naczyń.

To nie powinna być taka trudna procedura. Po hemostazie trzy nacięcia skóry zamyka się za pomocą czterech ochów lub pięciu szwów oh i sprawdza ponownie, aby upewnić się, że nacięcia skóry są prawidłowo zamknięte i nie widać krwawienia W przypadku testów narkotykowych na rany, cztery. Okrągłe rany skóry o pełnej grubości można utworzyć po brzusznej stronie każdego ucha za pomocą sześciomilimetrowego stempla ze stali nierdzewnej.

Odległość między ranami wynosi co najmniej 20 do 30 milimetrów. Skóra i okołochrzęstne wewnątrz stempla są usuwane, ale chrząstka nie jest uszkodzona. Po utworzeniu ran na obu uszach przykryj je tymczasowo gazą i przenieś królika do sali zabiegowej w celu podania leku.

Po oczyszczeniu ran z wszelkich skrzepów krwi należy zastosować leki testowe i kontrolne. Rany przykrywa się opatrunkiem okluzyjnym, aby zapobiec wysuszeniu. Porównując dwa leki, należy zastosować każdy lek zarówno na ranę proksymalną, jak i dystalną.

Kontroluje to różnice w szybkości gojenia się ran w uchu dystalnym i bliższym po operacji. Ucho niedokrwienne zwykle staje się chłodne i sinicze ze zmniejszonym czuciem dystalnym do nacięcia. Łagodny obrzęk typu I może utrzymywać się przez kilka dni, ale znika samoistnie i nie jest konieczne leczenie.

Impuls tętnicy centralnej jest nieobecny. Ruch ucha jest zmniejszony, ale nie całkowicie wyeliminowany, ponieważ niektóre mięśnie są nadal przyczepione do podstawy ucha. Jeśli tunel jest wykonany prawidłowo, między nacięciami widać wyraźne wgłębienie.

Plaster z fentanylem jest przymocowany do skóry pleców w celu złagodzenia ewentualnego bólu pooperacyjnego. Temperatura skóry jest codziennie mierzona na każdym uchu za pomocą termometru. Krążenie krwi mierzy się w uchu za pomocą przezskórnego miernika napięcia tlenu lub laserowego przepływomierza dopplerowskiego.

Po tygodniu można usunąć szwy nacięć skórnych z 2007 roku. Zabieg zastosowano u ponad 70 królików. Obejmuje to 23 króliki z cukrzycą i cztery w podeszłym wieku.

Różnice temperatur między uchem niedokrwiennym a niedokrwiennym wahały się od jednego do 10 stopni Celsjusza, przy czym większość królików mieściła się w zakresie od dwóch do sześciu stopni Celsjusza. Różnica temperatur była większa w pierwszych dniach po operacji, zmniejszała się stopniowo po 15 dniu, ale nadal utrzymywała się pod koniec jednego miesiąca. Z każdego ucha pobrano sześć próbek tkanek i zmierzono zawartość wysokoenergetycznych fosforanów za pomocą HPLC, zarówno TP, jak i energii całkowitej.

Stężenia były wyższe w uszach prawidłowych niż w uszach niedokrwiennych. Czas gojenia się ran był zawsze dłuższy w przypadku ucha niedokrwiennego niż w uchu nieniedokrwiennym u zwierząt bez cukrzycy i z cukrzycą u 15 królików bez cukrzycy. Średni czas gojenia wynosił 17,8 dnia w uchu niedokrwiennym w porównaniu z 21,8 dnia w uchu niedokrwiennym.

U 10 12-miesięcznych zwierząt z cukrzycą średni czas gojenia wynosił 18,3 dnia w uchu niedokrwiennym w porównaniu do 29,1 dnia w uchu niedokrwiennym. U wszystkich zwierząt, w tym królików z cukrzycą, nacięcia skóry goiły się normalnie bez żadnych komplikacji u królików. Przy 24-miesięcznym okresie cukrzycy rany brzuszne mają większą skłonność do infekcji.

Ta cecha sprawia, że jest bliższy ludzkim ranom cukrzycowym. Próbka histologiczna pokazuje gojenie się tunelu podskórnego, w którym mięśnie są nieobecne i są zastępowane tkankami włóknistymi. Jednak skóra jest nienaruszona.

Podejmując się tej procedury, należy pamiętać o traktowaniu zwierząt w sposób humanitarny. Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w mniej niż godzinę. Zastosowaliśmy tę technikę u ponad 70 królików, w tym u 23 królików z cukrzycą, bez żadnych powikłań, takich jak krwawienie czy infekcja.

Jest to bardzo bezpieczna procedura po tej procedurze. Inne metody, takie jak dodatkowe niedokrwienie, uszkodzenie nerwów i inokulacja bakteryjna, mogą być wykonane w celu udzielenia odpowiedzi na dodatkowe pytania, takie jak owrzodzenia naczyniowe, odleżyny i neuropatia cukrzycowa.