Analizy morfometryczne przekrojów siatkówki

Witajcie, nazywam się Regina i pracuję w laboratorium chorób neurodegeneracyjnych w Katedrze Anatomii na Uniwersytecie w Hongkongu. Dzisiaj pokażę Państwu, jak przeprowadzić analizę progresji przekrojów siatkówki. Zanim przejdziemy do analizy, przekroje próbek siatkówki zostały przygotowane w czterech grupach i poddane barwieniu H&E.

Następnie sesję siatkówki podzielono na cztery obszary. Są to: górny obszar obwodowy, górny obszar centralny, dolny obszar centralny oraz dolny obszar obwodowy. Po zdefiniowaniu obszarów, obraz każdego z nich został wykonany przy powiększeniu 10x40 przy użyciu mikroskopu z jasnym polem marki decor.

Jesteśmy teraz gotowi do analizy informacji morfologicznych siatkówki. W tej sesji zostanie zaprezentowany sposób pomiaru grubości warstwy ziarnistej wewnętrznej siatkówki. Otwórz oprogramowanie o nazwie thorough investigator.

Wybierz 40 typów, a następnie z głównego paska narzędzi wybierz opcję otwierania obrazu. W karcie plik wybierz obraz pożądanego obszaru siatkówki, który chcesz przeanalizować. Z menu rozwijanego na głównym pasku narzędzi wybierz typ linii konturowej.

Upewnij się, że funkcja automatycznego przesuwania jest włączona. Możesz powiększyć obraz, klikając przycisk powiększenia. Możesz użyć przycisku pomniejszenia, aby zmniejszyć rozmiar wyświetlanego obrazu.

Zarówno ślad, jak i preparat można przesuwać w czterech różnych kierunkach, klikając przyciski ruchu. Kliknij prawym przyciskiem myszy w oknie śledzenia i wybierz prosty ślad pęknięć. Narysuj linię konturową wzdłuż wewnętrznej krawędzi warstwy wewnętrznej.

W przypadku popełnienia błędu, przerwij czynność w oknie obrysowywania i naciśnij przycisk cofania, aby usunąć ostatni punkt rysowania. Kontynuuj obrysowywanie aż do ostatniego punktu linii. Po zakończeniu rysowania przerwij czynność w oknie obrysowywania, wybierz otwarty kontur i uruchom obraz, klikając przybliż.

Kliknij lewym przyciskiem myszy w oknie śledzenia. Aby powiększyć obraz, wybierz marker na pasku markerów w miejscu złączenia.

Po dodaniu wszystkich markerów, zaznacz ikonę markera w pozycji paska marker two i kursor. W centrum jednego z markerów, w oknie śledzenia, kliknij prawym przyciskiem myszy, wybierz zakładkę quick measure angles i zaznacz opcję continuous. Pomiar kąta przeprowadź, klikając najpierw w centrum markera sąsiadującego z zaznaczonym markerem.

W przypadku końców odcinka linii należy przesunąć go jak najbliżej centrum obszaru zainteresowania. Marker i pęknięcie. Ponownie rozciągnij linię gumki do zewnętrznej krawędzi warstwy inia i dostosuj kąt do 90 stopni.

Przesuń kursor nad lewą szczelinę w wybranym miejscu. Po kliknięciu pojawi się okno dialogowe wyświetlające pomiar kąta. Naciśnij klawisz enter, trzymając kursor myszy w tym samym miejscu.

Kliknij w oknie obrysu, aby linia została narysowana od jednego końca do nowo wybranego końca. Przerwij ją w oknie obrysu i wybierz otwartą kontrolę. Należy wykonać cztery pomiary wypustek wewnętrznej warstwy jądrowej w każdym regionie, w których zostaną narysowane cztery linie.

Poprowadź linię prostopadle od podstawy kontrolnej w prawo do zewnętrznej granicy wewnętrznej warstwy jądra i uruchom obraz, aby wyraźnie widzieć granicę. Jeśli koniec linii nie znajduje się na zewnętrznej krawędzi wewnętrznej warstwy jądra, można je połączyć lub skrócić linię w trybie edycji. Wybierz tryb edycji i zaznacz linię.

Kliknij okno śledzenia i wybierz funkcję dodawania punktu w sterowaniu elektrycznym, dodając punkt na zewnętrznej krawędzi, przy czym edycja punktu powinna odbywać się wzdłuż tej samej linii. Usuń oryginalny punkt. W ten sposób można uzyskać wyrównanie z nowym podnośnikiem.

Zmniejsz rozmiar obrazu, klikając przycisk pomniejszenia. Wyłącz tryb edycji i narysuj ostatni odcinek linii. Po narysowaniu linii kolejności wybierz tryb edycji.

Kliknij prawym przyciskiem myszy w oknie śledzenia i odpowiednio ustaw cztery segmenty linii. Teraz można uzyskać cztery pomiary, naciskając przycisk pomiaru CONT. Zaznacz te cztery pomiary i prześlij je do specjalisty, klikając kopiuj.

Aby zapisać dane, należy wybrać opcję „zapisz jako” w zakładce „plik”. Dane z obrysu mogą zostać zapisane jako plik danych. W tej części określimy ilościowo liczbę komórek czerwonego ogona gagan, wybierając opcję „otwórz obraz”.

W zakładce plik wybierz obraz pożądanego obszaru siatkówki, który chcesz poddać analizie. Przede wszystkim musimy zidentyfikować, które komórki są żywe, a które martwe. Komórki o w przybliżeniu okrągłym kształcie, z wyraźnie widoczną subtelną strukturą jądra, uznaje się za żywe komórki zwojowe siatkówki.

Komórki te, będące małymi i skondensowanymi strukturami, są uznawane za tę konkretną komórkę. Z rozwijanego menu głównego paska narzędzi należy wybrać typ linii konturowej. Za pomocą opcji otwartego konturu należy narysować linię wzdłuż krawędzi lewej warstwy włókien i wykonać obrys.

Na każdym końcu dodaj jeden znacznik: jeden na końcówce linii, a drugi w pozycji blisko zespołu. Wybierz ikonę znacznika na pasku znaczników. Ustaw kursor w centrum znaczników.

W menu narzędzi wybierz szybki pomiar kątów w odpowiedniej zakładce. Następnie kliknij prawym przyciskiem myszy w oknie trasowania, wybierz opcję ciągłą, a następnie za pomocą linii gumki zmierz kąt 19 stopni. Po utworzeniu pola wyboru naciśnij klawisz enter.

Należy jednak pamiętać, że mysz w tym samym czasie wciąż pozostaje w tej samej pozycji. Przerwij okno śledzenia, aby nowa linia mogła zostać odpowiednio przedłużona od wierzchołka. Przerwij okno śledzenia i wybierz sterowanie otwarte.

Narysuj kolejną nową linię w dokładnie taki sam sposób jak na drugim końcu. Utworzyliśmy dwie granice, w obrębie których zliczana jest liczba komórek zwoju rętropatycynego. Wybierz jeden rodzaj markera i przypisz go do każdej piątej komórki.

Wybierz jedną granicę jako linię wykluczającą, której dotykanie przez komórkę oznacza brak aktualności. Wybierz inny typ markera dla komórek martwych. Liczba przestrzeni każdego typu markera zostanie wyświetlona obok odpowiedniej ikony markera.

W pasku marker two wybierz tryb edycji i zaznacz linię bazową konturu. Przerwij ją w oknie śledzenia, a następnie ponownie zakończ linię. Nazwę linii bazowej konturu można uzyskać, naciskając przycisk pomiaru konturu.

Liczbę komórek można następnie wyrazić na milimetr membrany. Zapiszmy to zatem w zakładce plik. Dane z obrysowania i z markerów można zapisać jako plik danych.

W tej części zostanie zademonstrowano, jak mierzyć stronę komórkową obrazu wybranej komórki zwojowej siatkówki. W zakładce plik wybierz obraz pożądanego obszaru siatkówki, który chcesz przeanalizować. Wybierz żywą komórkę zwojową zgodnie z kryteriami opisanymi w poprzedniej części.

W przypadku żywej komórki należy wybrać typ linii konturu z listy rozwijanej głównego paska narzędzi. Wyrysuj linię konturu wzdłuż obwodu komórki, a następnie w oknie śledzenia wybierz opcję end close contour. Pole powierzchni komórki zostanie wyświetlone w polu area w oknie dialogowym control measurement.

W niniejszym filmie zaprezentowano trzy proste metody, które pozwalają na obiektywną analizę siatkówki. Mamy nadzieję, że ten materiał wideo okaże się pomocny.