Name: Zwiększenie skali hodowli komórek ssaków przy użyciu nowej wielowarstwowej kolby (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Naucz się hodowli komórek ssaków zwiększającej produktywność przy użyciu wielowarstwowych kolb BD Falcon. Ta metoda pozwala uzyskać trzy do pięciokrotnie wyższy plon komórek w porównaniu do tradycyjnych kolb T175.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Protokół wykorzystania flasks wielokomorowych do hodowli komórkowej
<ol>
	<li>Przygotowanie naczyń i dodawanie zawiesiny komórkowej
	<ol>
		<li>Przygotować pożywkę do wzrostu komórek zgodnie z potrzebami.</li>
		<li>Ustawić Multi-Flask pionowo na boku, zakrętką do góry, na powierzchni roboczej (sterylna komora z laminarnym przepływem powietrza).
		<ol>
			<li>Kolby te są dostępne w formatach 3- i 5-warstwowych i wykorzystują podobny schemat pracy jak kolba T-175.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Poluzować i zdjąć zakrętki. Dodać wymaganą ilość uprzednio ogrzanej pożywki do kolby, używając pipety 50 lub 100 mL lub poprzez wlewanie.
		<ol>
			<li>Pipety ≤ 10 ml mogą dotrzeć do dna naczynia, gdy Multi-Flaski są ustawione pionowo zakrętką do góry. Pipety ≥ 10 ml mogą wniknąć do naczynia bezpośrednio za logo na Multi-Flasku, zapewniając wygodny dostęp do dodawania większych objętości pożywki do naczynia.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Aby uniknąć powstawania pęcherzyków powietrza w pożywce, pozwolić strumieniowi cieczy spływać wzdłuż wewnętrznej ścianki pokrywy Multi-Flask (od strony logo).</li>
		<li>Dodać zawiesinę komórkową z koncentratu komórek do pożywki wzrostowej przez górną warstwę, używając pipety 10 mL, a następnie zakręcić kolby.
		 Wskazówki: 
		- Transportować Multi-Flaski na wózku do inkubatora i wykonać pozostałe kroki. 
		- Gęstość zasiewu komórek będzie się różnić w zależności od typu komórek, pożywki i wymaganego czasu hodowli. Przyjąć gęstość zasiewu i objętość pożywki stosowaną w standardowych kolbach T-175 i pomnożyć przez 3 lub 5, w zależności od użytego formatu Multi-Flask.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Mieszanie komórek
	<ol>
		<li>Pozycja mieszania: Trzymać Multi-Flask pionowo logo w stronę użytkownika i obrócić przeciwnie do ruchu wskazówek zegara pod kątem 45°, tak aby otwór mieszający (mix port) był skierowany w stronę użytkownika.</li>
		<li>Trzymając pod tym samym kątem, delikatnie przechylić Multi-Flask od przodu do tyłu (szyjka oddalona od użytkownika), aż ciecz z górnej warstwy całkowicie spłynie w dół przez otwór mieszający. Obracać wokół strony z otworem mieszającym.</li>
		<li>Analogicznie, delikatnie kołysać Multi-Flask od tyłu do przodu (szyjka skierowana w stronę użytkownika), aż pożywka całkowicie spłynie z dolnej warstwy w górę przez otwór mieszający. Powtórzyć kroki 1.2.2 i 1.2.3 jeszcze raz, aby zapewnić właściwe wymieszanie.</li>
		<li>Przywrócić Multi-Flask do pozycji mieszania (krok 1.2.1) i przejść do kroku 1.3.</li>
		<li>Alternatywnie, zawiesinę komórkową można przygotować poza Multi-Flaskiem i dodać ją do naczynia za pomocą pipety lub przez delikatne wlewanie.
		<ol>
			<li>Otwór mieszający umożliwia mieszanie komórek z pożywką wewnątrz naczynia i eliminuje potrzebę przygotowywania dużych objętości zawiesin komórkowych zewnętrznie.</li>
			<li>Umożliwia on również wyrównanie poziomu pożywki pomiędzy warstwami Multi-Flask</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Równoważenie cieczy
	<ol>
		<li>Po wymieszaniu/dodaniu zawiesiny komórkowej ustawić Multi-Flask pionowo na płaskiej powierzchni roboczej, aby wyrównać objętość cieczy w każdej z warstw.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Rozdzielenie cieczy do każdej warstwy
	<ol>
		<li>Trzymać Multi-Flask logo w stronę użytkownika i obrócić zgodnie z ruchem wskazówek zegara pod kątem 45°, aby rozdzielić ciecz do każdej z warstw. 
		Wskazówka: 
		- Dla uzyskania najlepszych rezultatów ważne jest korzystanie z płaskiej powierzchni roboczej w krokach 1.3-1.4</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Transport
	<ol>
		<li>Po rozdzieleniu pożywki zawierającej zawiesinę komórkową, transportować Multi-Flask pod tym samym kątem 45° (zgodnie z ruchem wskazówek zegara), jak w kroku 1.4.1, z pożywką oddaloną od otworu mieszającego, do inkubatora. Pozycja ta jest również odpowiednia podczas wyjmowania kolb z inkubatora w celu obserwacji pod mikroskopem.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Umieszczanie Multi-Flask na półce inkubatora
	<ol>
		<li>Trzymając Multi-Flask pod kątem 45° (zgodnie z ruchem wskazówek zegara, oddalony od otworu mieszającego), delikatnie obrócić go w dół poziomo na powierzchnię inkubatora (używając narożnika oddalonego od otworu mieszającego jako punktu obrotu). Położyć Multi-Flask logo do góry.
		<ol>
			<li>Konstrukcja Falcon Multi-Flask umożliwia sztaplowanie naczyń i utrzymuje je na miejscu dzięki solidnemu żebru stabilizującemu.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Rozprowadzanie komórek i odczynników
	<ol>
		<li>Po położeniu Multi-Flask płasko na powierzchni roboczej, delikatnie kołysać nim w przód i w tył oraz na boki, aby równomiernie rozprowadzić komórki na powierzchniach hodowlanych, dbając o to, by ciecz z żadnej z warstw nie wyciekła. Ułożyć kolby w stos.
		<ol>
			<li>Ta kolba jest wykonana z materiału optycznie przezroczystego, a komórki w ostatniej warstwie można łatwo obserwować pod mikroskopem.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wymiana pożywki
	<ol>
		<li>Odsysać pożywkę, przechylając Multi-Flask w lewo (stroną otworu mieszającego), z logo skierowanym w stronę użytkownika.</li>
		<li>Następnie przechylić Multi-Flask w prawo, kontynuując odsysanie całej pozostałej pożywki.</li>
		<li>Dodać odpowiednią ilość pożywki i postępować zgodnie z krokami 1.3-1.7</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Pozyskiwanie komórek z kolb wielokomorowych
<ol>
	<li>Aby przeprowadzić dysocjację komórek, ustaw kolby Multi-Flask pionowo i ustaw każdą z nich w pozycji mieszania (Krok 1.2.1). Delikatnie odwróć kolby szyjką w stronę operatora, aby umożliwić spłynięcie medium do górnej warstwy Multi-Flask.</li>
	<li>Wprowadź końcówkę aspiracyjną o pojemności 5 lub 10 mL przez szyjkę, aż osiągniesz poziom cieczy w pobliżu otworu do mieszania. Odessij zużyte medium.</li>
	<li>Dodaj odczyn dysocjujący/bufor piorący i ustaw w pozycji mieszania, zgodnie z krokiem 1.2.1, a następnie przejdź do kroków 1.3-1.7. Zneutralizuj medium wzrostowym/czynnikiem neutralizującym i przelej zawiesinę komórkową do probówki odbiorczej LUB odwróć kolbę tak, aby komórki spłynęły do górnej warstwy naczynia, a następnie zbierz komórki za pomocą pipety 10 mL. 
	Wskazówka: Aby zwiększyć odzysk komórek lub odczynników, ustaw Multi-Flask w pozycji mieszania (Krok 1.2.1) i odwróć szyjką w stronę operatora, aby umożliwić całkowite spłynięcie medium ze wszystkich warstw do warstwy górnej. Następnie, pozostawiając Multi-Flask w pozycji odwróconej, przechyl ją zgodnie z ruchem wskazówek zegara pod kątem 45° (oddalając od otworu do mieszania). Użyj pipety (1-10 mL), aby zebrać pozostałe odczynniki.</li>
</ol>
3. Zalecana objętość robocza w kolbach wielokomorowych Falcon Multi-Flasks
Pożywki hodowlane
3-warstwowa: 75-150 mL na Multi-Flask 5-warstwowa: 125-250 mL na Multi-Flask
Środek dysocjujący
3-warstwowy: ≥15 mL na jedną kolbę typu Multi-Flask 5-warstwowy: ≥25 mL na jedną kolbę typu Multi-Flask
Wskazówka: Należy wyjść od objętości pożywki stosowanej w standardowych kolbach T-175 i pomnożyć ją 3- lub 5-krotnie, w zależności od ocenianego formatu Multi-Flask, tak aby liczba mL na jednostkę powierzchni pozostała taka sama.
4. Reprezentatywne wyniki:
1. Projekt wielokolbowego układu Falcon
<img alt="Schemat wielowarstwowych kolb do hodowli komórkowej przedstawiający dostęp dla pipety i otwór do mieszania do użytku laboratoryjnego." src="/files/ftp_upload/3418/3418fig1.jpg" data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rycina 1"> Rycina 1.: Wielowarstwowe naczynia do hodowli komórkowej Multi-Flask są dostępne w formacie stosowalnym 3- i 5-warstwowym do zwiększania skali hodowli komórek, zapewniając odpowiednio 525 i 875 cm2 powierzchni wzrostu. Dostęp dla pipety ułatwia dodawanie i usuwanie komórek oraz odczynników z naczynia. Obecność otworu do mieszania (mix-port) pozwala na szybkie mieszanie wewnątrz naczynia i wyrównanie poziomu medium we wszystkich warstwach Multi-Flask.
2. Wydajność komórek przy użyciu wielu kolb:
Naczynia te są dostępne w formatach 3-warstwowych i 5-warstwowych, które odpowiadają odpowiednio 3- i 5-krotnej powierzchni flask T-175. W związku z tym, w Multi-Flaskach hodowano i odzyskano odpowiednio ≥ 3 i 5 razy więcej komórek BHK-21 (nerki noworodka chomika) niż we flaskach T-175 (130± 6,8 x 106 oraz 218 ± 23,6 x 106 komórek odpowiednio, w porównaniu do 43,2 ± 3,5 x 106 komórek; Ryc. 2A). Wydajność komórkowa na jednostkę powierzchni była równoważna w 3- i 5-warstwowych Multi-Flaskach oraz flaskach T-175 dla linii BHK-21, LnCAP (ludzka linia komórkowa gruczolakoraka prostaty), Hep-G2 (ludzka linia komórkowa raka wątroby) oraz EcoPack 2-293 (ludzka linia komórkowa nerki) hodowanych przez okres 48-96h (Ryc. 2B) w pożywkach wzrostowych (35 ml na warstwę) zgodnie z zaleceniami dostawcy komórek (ATCC, Sigma i/lub Clontech). Komórki policzono za pomocą automatycznego licznika Vi-CELL (1).
 
<img alt="Wykres słupkowy porównujący oczekiwaną i rzeczywistą wydajność komórkową w systemach kolbowych." src="/files/ftp_upload/3418/3418fig2A.jpg" data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rysunek 2A"> Rysunek 2A : Trzykrotna i pięciokrotna liczba komórek BHK-21 została wyhodowana i odzyskana z Multi-Flasków 3- i 5-warstwowych w porównaniu z kolbami T-175. Oczekiwana wydajność została wyznaczona na podstawie średniej wydajności komórkowej z kontrolnych kolb T-175 pomnożonej przez trzy i pięć dla odpowiednio 3- i 5-warstwowych Multi-Flasków (n=4 kolby/format).
<img alt="Porównanie gęstości komórek w zależności od typu kolby; wykres słupkowy przedstawia kolby T-175, 3-warstwowe i 5-warstwowe dla komórek od BHK-21 do EcoPack 2-293." src="/files/ftp_upload/3418/3418fig2B.jpg" data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rycina 2B"> Rycina 2B : Wydajność komórkowa na cm2 była zbliżona w 3- i 5-warstwowych kolbach Multi-Flask oraz kolbach T-175 dla komórek BHK-21, LnCAP, HepG2 i EcoPack2-293. Każdy słupek reprezentuje średnią z 4 do 6 kolb. Komórki BHK-21 (11 000 cells/cm2) hodowano przez 72 godziny, komórki LnCAP (20 000 cells/cm2) oraz komórki EcoPack2-293 (˜35 000 cells/cm2) hodowano przez 96 godzin, a komórki HepG2 (25 000 cells/cm2) hodowano przez 48 godzin przed zbiorem.
3. Rozdzielanie pożywki pomiędzy warstwy Multi-Flask
Do 5-warstwowych flasks Multi-Flask (250 mL/naczynie 5-warstwowe) dodano pożywkę do hodowli komórkowej (DMEM; Invitrogen) i podzielono ją na warstwy zgodnie z opisanym powyżej protokołem. Rozkład pożywki mierzono poprzez wiercenie otworów w każdej warstwie i wypompowywanie pożywki z poszczególnych warstw. Masa cieczy odzyskanej z każdej warstwy okazała się być stosunkowo jednolita pomiędzy warstwami, jak pokazano na Rys. 3. Wyniki prezentują się następująco: 51,8 ± 0,73, 50,3 ± 0,58, 50,21 ± 0,13, 49,88 ± 0,35, 49,45 ± 0,37 (gm).
<img alt="Wykres rozkładu masy pożywki w kolbie 5-warstwowej, każda warstwa wykazuje stałą masę około 50g." src="/files/ftp_upload/3418/3418fig3.jpg" data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rysunek 3"> Rysunek 3. Jednorodny rozkład pożywki w każdej z pięciu warstw 5-warstwowej kolby Multi-Flask. Do kolb Multi-Flask dodano pożywkę do hodowli komórkowej (250 ml/naczynie 5-warstwowe), po czym zrównoważono ją i podzielono na poszczególne warstwy. Pożywkę wypompowano przez otwory wywiercone w poszczególnych warstwach, a następnie odnotowano masę cieczy z każdej warstwy (n=6 kolb).
4. Rozdzielenie komórek pomiędzy warstwy w Multi-Flask
Komórki można dodawać i mieszać wewnątrz Multi-Flask. Symulowano rozprzestrzenianie się komórek między warstwami Multi-Flask, używając kulek (10μm; PolySciences Inc.) o rozmiarze zbliżonym do komórek. Zawiesinę kulek wprowadzono do naczynia Multi-Flask za pomocą pipety 10 mL przez górną warstwę i wymieszano z medium w naczyniu, zgodnie z opisanym powyżej protokołem. Rozkład kulek zmierzono, wiercąc otwory w każdej warstwie i wypompowując ciecz zawierającą zawiesinę kulek z poszczególnych warstw. Stężenie kulek odzyskanych z każdej warstwy odczytano za pomocą licznika Coulter Counter i zapisano. Poniżej przedstawiono równomierny rozkład kulek między warstwami w 3-warstwowych Multi-Flaskach (Rys. 4A). Port mieszający umożliwia jednorodne rozmieszczenie komórek i odczynników pomiędzy warstwami Multi-Flask.
<img alt="Wykres słupkowy przedstawiający liczbę kulek/ml w 3-warstwowym Multi-Flask do analizy hodowli komórkowych." src="/files/ftp_upload/3418/3418fig4A.jpg" data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rycina 4A"> Rycina 4A : Rozkład kulek w każdej z trzech warstw 3-warstwowego Multi-Flask. Suspensję kulek (3,6 x106/ml) dodano do pożywki naniesionej do Multi-Flasków (stosunek objętości suspensji kulek do pożywki wynosił 1:10, vol:vol), a następnie wymieszano, po czym przeprowadzono etapy równowagowania i rozdziału zgodnie z opisanym protokołem. Stężenie kulek odzyskanych z każdej warstwy (pożywka przepompowana przez otwory wykonane w każdej warstwie) zmierzono za pomocą licznika Coulter Counter i zapisano. Poniżej przedstawiono równoważne rozkłady kulek między warstwami w 3-warstwowych Multi-Flaskach (n=5 flaszków)
Poniżej przedstawiono reprezentatywne obrazy wzorców barwienia Ecopack 2-293 komórek hodowanych do &gt;80% konfluencji w 3-warstwowych Multi-Flaskach w uzupełnionych mediach wzrostowych. Monowarstwy komórkowe utrwalono i zabarwiono fioletem krystalicznym, następnie warstwy Multi-Flask wycięto, a obrazy zeskanowano (2). Należy zauważyć, że rozmieszczenie komórek było jednorodne na wszystkich warstwach Multi-Flask (Rys. 4B). Podobne wyniki uzyskano dla wielu ocenianych typów komórek (dane niepokazane).
<img alt="Porównanie hodowli komórkowych: 3-warstwowy Multi-Flask vs kolba T-175; ustawienie eksperymentu, analiza wzrostu komórek." src="/files/ftp_upload/3418/3418fig4B.jpg" data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Figura 4B"> Figura 4B : Ta rycina ilustruje homogeniczny wzrost komórek pomiędzy warstwami w Multi-Flaskach. Komórki Ecopack-2-293 hodowlane do &gt;80% konfluencji w 3-warstwowych Multi-Flaskach oraz w kolbach T-175 zostały utrwalone i zabarwione fioletem krystalicznym. Naczynia Multi-Flask zostały przecięte, a każda zabarwiona warstwa została zeskanowana.
5. Dopływ powietrza w Multi-Flask:
Analiza zużytych pożywek za pomocą analizatora BioProfile FLEX (3,4) (Nova Biomedical) z komórek EcoPack2-293 hodowanych przez 96 godzin nie wykazała różnic w nasyceniu powietrzem komórek hodowanych w 5-warstwowych Multi-Flaskach w porównaniu do kolb T-175 (81,03 ± 1,9 vs. 83,4 ± 5,8 % O2 z otoczenia).
<img alt="Wykres słupkowy porównujący nasycenie powietrzem (% O2) w 5-warstwowym Multi-Flask i T-175 do hodowli komórek." src="/files/ftp_upload/3418/3418fig5.jpg" data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rysunek 5"> Rysunek 5 : Nasycenie powietrzem (% tlenu w otoczeniu O2) w zużytych pożywkach było podobne w przypadku pożywek wymieszanych wcześniej w 5-warstwowych Multi-Flasks w porównaniu z kolbami T-175. Komórki EcoPack2-293 wysiano z gęstością 35 000 komórek/cm2 i hodowano przez 96 godzin przed analizą pożywki (n=3 kolby).

<ol><li>Szabo, S. E., Monroe, S. L., Fiorino, S., Bitzan, J., Loper, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+an+automated+instrument+for+viability+and+concentration+mesurements+of+cryopreserved+hematopoietic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Hematol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of an automated instrument for viability and concentration mesurements of cryopreserved hematopoietic cells.</a> Lab. Hematol. 10, 109-109 (2004).</li>
<li>Bonnekoh, B., Wevers, A., Jugert, F., Merk, H., Mahrle, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorimetric+growth+assay+for+epidermal+cell+cultures+by+their+crystal+violet+binding+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Dermatol.+Res%22%5BJournal%5D)">Colorimetric growth assay for epidermal cell cultures by their crystal violet binding capacity.</a> Arch. Dermatol. Res. 281, 487-487 (1989).</li>
<li>Sengupta, N., Rose, S. T., Morgan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+Flux+analysis+of+CHO+cell+metabolism+in+the+late+non-growth+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Metabolic Flux analysis of CHO cell metabolism in the late non-growth phase.</a> Biotechnol. Bioeng. 108, 83-83 (2010).</li>
<li>Zhu, M. M., Goyal, A., Rank, D. L., Gupta, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+elevated+pCO2+and+osmolality+on+growth+of+cells+and+production+of+antibody%E2%80%93fusion+protein+B1%3A+a+case+study%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Prog%22%5BJournal%5D)">Effects of elevated pCO2 and osmolality on growth of cells and production of antibody–fusion protein B1: a case study.</a> Biotechnol. Prog. 21, (2005).</li>
<li>Ryan, J. M., Sharf, B. B., Cristofalo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+culture+medium+volume+on+cell+density+and+life-span+of+human+diploid+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">The influence of culture medium volume on cell density and life-span of human diploid fibroblasts.</a> Exp Cell Res. 91, 389-389 (2004).</li>
<li>Flaherty, P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFlaherty%2C+P+%22Tips+and+Techniques+for+enhancing+your+cell+culture%22">Tips and Techniques for enhancing your cell culture</a>. , http://www.bdbiosciences.com/hotlines/webinars/ondemand/index.jsp (2009).</li>
<li>Sanyal, S., Abraham, E. J., Slater, K., Cai, A., Lacey, B., Hartshorn, C., Flaherty, P., McHugh, B., Qian, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSanyal%2C+S+%22Scaling+up+cells+in+BD+Falcon+Cell+Culture+Multi-Flasks%22">Scaling up cells in BD Falcon Cell Culture Multi-Flasks</a>. , http://www.bdbiosciences.com/documents/multiflasks-SBSposter.pdf (2011).</li>
<li>DiPersio, C. M., Jackson, D. A., Zaret, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+extracellular+matrix+coordinately+modulates+liver+transcription+factors+and+hepatocyte+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">The extracellular matrix coordinately modulates liver transcription factors and hepatocyte morphology.</a> Mol. Cell. Biol. 11, 4405-4405 (1991).</li>
<li>Grose, R., Hutter, C., Bloch, W., Thorey, I., Watt, F. M., Fassler, R., Brakebusch, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+crucial+role+of+%CE%B21+integrins+for+keratinocyte+migration+in+vitro+and+during+cutaneous+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Dev%22%5BJournal%5D)">A crucial role of β1 integrins for keratinocyte migration in vitro and during cutaneous wound repair.</a> Dev. 129, 2303-2303 (2002).</li>
</ol>

Wszyscy autorzy są pracownikami firmy Becton Dickinson, segment Biosciences, jednostka Discovery Labware.

Niniejsze badanie wykazuje wzrost wydajności, jaki konstrukcja Multi-Flask oferuje badaczom. Choć dla uzyskania optymalnych wyników podczas korzystania z Multi-Flasków istotne jest przestrzeganie opisanych powyżej kroków, w niniejszym protokole istnieją krytyczne etapy uznane za najważniejsze. Należą do nich: (i) mieszanie komórek i odczynników za pomocą portu mieszającego wewnątrz naczynia, (ii) transportowanie Multi-Flask pod kątem 45° zgodnie z ruchem wskazówek zegara po rozdzieleniu cieczy do każdej z warstw, (iii) położenie Multi-Flask płasko w inkubatorze po rozdzieleniu cieczy.
Prawidłowe zastosowanie Multi-Flask prowadzi do uzyskania homogennej populacji komórek w każdym naczyniu, hodowanych w środowisku analogicznym do kolb T-175 (5). Naczynia te pozwalają na uzyskanie 3- i 5-krotnie większej liczby komórek przy podobnej powierzchni zajmowanej przez kolbę T-175. Naczynia 3- i 5-warstwowe zapewniają odpowiednio 525 i 875 cm2 powierzchni wzrostu, oferując użytkownikom oszczędność miejsca oraz pracy. Obróbka powierzchni do hodowli tkankowej jest porównywalna do standardowych kolb, co umożliwia skalowanie procesu bez konieczności ponownej optymalizacji istniejących warunków hodowli oraz bez obniżania jakości, homogeniczności lub wydajności komórek (6, 7). Zapewnia to również porównywalność z wcześniej zebranymi danymi. Naczynia te mogą być również powlekane odczynnikami takimi jak kolagen, fibronektyna czy poli-D-lizyna, aby zapewnić specjalistyczne podłoże do przywierania, wzrostu i różnicowania określonych typów komórek, takich jak hepatocyty8, keratynocyty9 czy komórki macierzyste hodowane w bezserumowych formulacjach pożywek. Roztwory powlekające można usuwać przy minimalnej retencji cieczy resztkowej, co redukuje marnotrawstwo cennych odczynników oraz umożliwia skuteczne usunięcie roztworu powlekającego przed hodowlą komórek. Rekomendowana optymalna objętość pożywki do hodowli komórek w Multi-flaskach mieści się w zakresie 0,142-0,287 ml/cm2, co przekłada się na 25-50 ml na warstwę. W przeciwieństwie do innych kolb wielowarstwowych, produkt ten posiada port do mieszania w naczyniu, który umożliwia szybkie mieszanie wewnątrz naczynia oraz jednorodne rozmieszczenie komórek i odczynników wewnątrz i pomiędzy warstwami każdego naczynia. Różne linie komórkowe, kultury pierwotne i komórki macierzyste były efektywnie skalowane przy użyciu Multi-Flasks. Naczynia te są szczególnie korzystne w zastosowaniach wymagających dużej liczby komórek, takich jak wysokoprzepustowe badania przesiewowe, produkcja szczepionek, transfekcje wektorów wirusowych i terapia komórkowa.
Oszczędność czasu, miejsca i pracy oraz ograniczenie ilości generowanych odpadów to kluczowe korzyści wynikające z zastosowania Multi-Flask w porównaniu do konwencjonalnych hodowli w naczyniach jednowarstwowych. W tej samej przestrzeni, wykorzystując 3 Multi-Flasky 5-warstwowe, możemy hodować około trzykrotnie większą liczbę komórek niż przy użyciu 5 kolb T-175. Ta zaleta w zakresie oszczędności miejsca nie ogranicza się tylko do kolb T-175, lecz może zostać rozciągnięta na inne naczynia: standardowa aparatura do butelek obrotowych, mieszcząca się w typowych inkubatorach laboratoryjnych, pomieści ˜4 butelki obrotowe (2200 ml), z których każda zapewnia 850cm2 powierzchni. Na tej samej powierzchni można umieścić ˜20 Multi-Flasków 5-warstwowych, zapewniając tym samym pięciokrotnie większą powierzchnię wzrostu do hodowli komórek. Ponadto, wraz ze wzrostem świadomości ekologicznej („Go-Green”), wysoce pożądane są rozwiązania ograniczające generowanie odpadów. W tym względzie zastosowanie Multi-Flasków w porównaniu do kolb T-175 prowadzi do 38-procentowego zmniejszenia ilości odpadów (5 kolb T-175 waży ˜640g, podczas gdy jeden Multi-Flask 5-warstwowy waży ˜ 400g), a zalety te przekładają się na obniżenie kosztów przechowywania i utylizacji odpadów, co skutkuje oszczędnościami ekonomicznymi dla użytkownika.

<table><tbody><tr><td>3-warstwowa hodowla tkankowa modyfikowana powierzchniowo 525cm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;</td><td>BD Biosciences</td><td>353143</td><td></td></tr><tr><td>5-warstwowa hodowla tkankowa modyfikowana powierzchniowo 875cm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;</td><td>BD Biosciences</td><td>353144</td><td></td></tr><tr><td>pipeta 100ml</td><td>BD Biosciences</td><td>357600</td><td></td></tr><tr><td>pipeta 10 ml</td><td>BD Biosciences</td><td>357551</td><td></td></tr><tr><td>pipeta aspiracyjna 5 ml</td><td>BD Biosciences</td><td>357501</td><td></td></tr><tr><td>stożkowa probówka z polipropylenu 50 ml</td><td>BD Biosciences</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>kolba T-175 do hodowli tkankowych modyfikowana powierzchniowo</td><td>BD Biosciences</td><td>353028</td><td></td></tr><tr><td>fiolet krystaliczny do barwienia metodą Grama</td><td>BD Biosciences</td><td>212525</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>11885</td><td></td></tr><tr><td>GMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5154</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>ATCC</td><td>30-2001</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>ATCC</td><td>30-2003</td><td></td></tr><tr><td>Trypsyna-EDTA</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-5012</td><td></td></tr><tr><td>płodowa surowica bydlęca</td><td>Invitrogen</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>bulion tryptonowo-fosforanowy</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8159</td><td></td></tr><tr><td>komórki BHK-21</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>85011433</td><td></td></tr><tr><td>Hep-G2, LnCAP</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ecopack 2-293</td><td>Clontech Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Kuleczki polistyrenowe</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>24628-20</td><td></td></tr><tr><td>Analizator Bio-Profile Flex</td><td>Nova BioMedical</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

skalowanie hodowli komórek ssaków przy użyciu nowej kolby wielowarstwowej

Scale-Up of Mammalian Cell Culture using a New Multilayered Flask

Coraz więcej aplikacji opartych na komórkach wymaga ich dużej liczby. Stosowanie jednowarstwowych kolb T, które są odpowiednie podczas ekspansji na małą skalę, może stać się uciążliwe, pracochłonne i czasochłonne w sytuacjach wymagających uzyskania ogromnej liczby komórek. Aby odpowiedzieć na tę potrzebę, omówiono wydajność nowego wielowarstwowego naczynia do hodowli komórkowej, które ułatwia łatwe skalowanie liczby komórek z jednowarstwowych kolb T. Testowane kolby są dostępne w formacie 3- i 5-warstwowym i umożliwiają hodowlę oraz pełny odzysk odpowiednio trzykrotnej i pięciokrotnej liczby komórek w porównaniu z kolbami T-175. Kluczową cechą BD Multi-Flask jest port do mieszania/wyrównywania, który pozwala na szybkie mieszanie wewnątrz naczynia, a także równomierny rozkład komórek i odczynników wewnątrz i pomiędzy warstwami każdego naczynia, co pozwala na spójne otrzymywanie komórek hodowanych w środowisku analogicznym do kolb T-175.
Konstrukcja tych Multi-Flasków umożliwia również wygodny dostęp pipety w celu dodawania odczynników i komórek bezpośrednio do kolb, a także efektywne odzyskiwanie cennych komórek i odczynników, ograniczając ryzyko kontaminacji związane z przelewaniem. W zastosowaniach, w których przelewanie jest preferowane nad pipetowanie, konstrukcja ta minimalizuje retencję pozostałości cieczy, aby zmniejszyć straty cennych komórek i odczynników.

Komórki odgrywają kluczową i coraz większą rolę w badaniach oraz w odkrywaniu i opracowywaniu nowych terapii. W związku z rosnącym zapotrzebowaniem na większą liczbę komórek niezbędne są bardziej wydajne i skuteczne metody hodowli i pozyskiwania komórek adherentnych. W tym celu można zastosować kolbę wielowarstwową o odpowiednich parametrach.

Skalowanie hodowli komórek ssaków przy użyciu nowej kolby wielowarstwowej

Coraz więcej aplikacji opartych na komórkach wymaga dużych ich ilości. Stosowanie jednowarstwowych kolb T, które są wystarczające w małej skali...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest zaprezentowanie sposobu hodowli jednorodnych komórek o zwiększonej wydajności przy użyciu trzech- lub pięciowarstwowych kolb BD Falcon Multi. Cel ten osiąga się poprzez najpierw dodanie pożywki do kolby i zaszczepienie jej zawiesiną komórkową. Drugim krokiem jest wymieszanie i wyrównanie zawartości w celu ich równomiernego rozprzestrzenienia.Trzecim krokiem jest transport i umieszczenie naczynia płasko w inkubatorze. Ostatnim krokiem jest zebrać komórki wyhodowane w kolbie wielowarstwowej. Ostatecznie można zebrać trzykrotność lub pięciokrotność uzysku komórek w porównaniu do kolb T 1 75, przy jednoczesnym jednorodnym wzroście komórek we wszystkich warstwach kolby wielowarstwowej, ponieważ wykorzystuje ona nowe urządzenie do hodowli komórkowej.Zdecydowanie zaleca się obejrzenie demonstracji wizualnej tej metody, ponieważ kroki manipulacyjne są trudne do przeobrazania w koncepcje. Wielowarstwowe naczynia do hodowli komórkowej w formie kolb są dostępne w formacie trzech lub pięciu warstw składalnych w celu skalowania hodowli komórek, zapewniając odpowiednio 525 i 875 cm² powierzchni wzrostu; dostęp dla pipety ułatwia dodawanie i usuwanie komórek oraz odczynników z naczynia i do naczynia. Obecność mieszanego portu umożliwia szybkie mieszanie i wyrównywanie poziomu pożywki wewnątrz naczyń we wszystkich warstwach wielowarstwowej kolby.Aby użyć kolby wielokomorowej do hodowli komórkowej, należy rozpocząć od ustawienia naczynia pionowo na boku w sterylnej komorze z laminarnym przepływem powietrza. Mając koniec z zakrętką skierowany do góry, należy opisać kolbę w tej pozycji, zanim zostaną dodane jakiekolwiek treści, a następnie poluzować i zdjąć zakrętkę. Następnie należy wprowadzić pipetę o pojemności od 50 do 100 ml.Następnie dodaj 35 ml uprzednio ogrzanej pożywki do wzrostu komórek na każdą warstwę bezpośrednio do kolby wielowarstwowej. Aby zapobiec powstawaniu pęcherzyków powietrza w pożywce, pozwól, aby strumień cieczy spływał po wewnętrznej ścianie bocznej kolby. Na koniec użyj pipety o objętości mniejszej niż lub równej 10 ml.Dodaj eksperymentalną zawiesinę komórkową z skoncentrowanego zapasu komórek do pożywki wzrostowej przez górną warstwę, a następnie zakręć kolbę, aby umożliwić wymieszanie komórek z pożywką poprzez odwracanie i wyeliminować konieczność przygotowywania dużych objętości zawiesin komórkowych zewnętrznie. Podnieś i trzymaj kolbę wielokomorową w pozycji pionowej logo skierowane w Twoją stronę i obróć naczynie przeciwnie do ruchu wskazówek zegara pod kątem 45 stopni. Następnie trzymaj naczynie pod tym samym kątem.Delikatnie przechyl kolbę wielokomorową z przodu do tyłu, kierując szyjką na zewnątrz, aż ciecz z górnej warstwy całkowicie spłynie w dół przez otwór do mieszania. Obróć naczynie na osi otworu do mieszania i powtórz tę czynność, aby zapewnić odpowiednie wymieszanie komórek z medium. Następnie przywróć kolbę wielokomorową do pozycji zmieszanej.Po wymieszaniu zawiesiny komórkowej należy ustawić wielokomorową kolbę pionowo na płaskiej powierzchni roboczej, aby wyrównać objętość cieczy we wszystkich warstwach. Na koniec, w celu podzielenia cieczy na poszczególne warstwy, należy trzymać kolbę logo skierowanym w stronę użytkownika, tak jak wcześniej, i obrócić naczynie zgodnie z ruchem wskazówek zegara pod kątem 45 stopni.Należy uważać, aby ciecz nie dostała się do otworu mieszającego. Po rozdzieleniu zawiesiny komórkowej przenieść kolbę wielopowierzchniową do inkubatora, utrzymując ją pod kątem 45 stopni zgodnie z ruchem wskazówek zegara, tak aby pożywka była oddalona od otworu mieszającego. Trzymając naczynie pod tym kątem, delikatnie obrócić kolbę wielopowierzchniową w poziomie, kładąc ją na powierzchni inkubatora logo skierowanym do góry, wykorzystując róg oddalony od otworu mieszającego jako punkt obrotu. Następnie delikatnie kołysać naczyniem w przód i w tył oraz na boki, aby równomiernie rozłożyć komórki na powierzchniach hodowlanych.Należy uważać, aby nie rozlać cieczy z poszczególnych warstw podczas układania naczyń jedno na drugim. Po umieszczeniu ich w inkubatorze należy upewnić się, że podłoża pozostają oddzielone i nie dostają się do portu mieszającego podczas płaskiego układania na innym naczyniu. Najpierw należy trzymać kolbę wielokomorową pionowo, tak aby logo było skierowane do wewnątrz.Następnie włóż końcówkę aspiracyjną o objętości pięciu mililitrów i odessij zużyte medium, aby zakończyć aspirację. Trzymając naczynie wielokomorowe pod kątem 45 stopni w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara, odwróć je do wewnątrz i kontynuuj aspirację w celu maksymalnego odzysku. Gdy naczynie jest odwrócone do wewnątrz, przechyl je zgodnie z ruchem wskazówek zegara i odessij pozostałą objętość w narożniku przeciwległym do portu mieszającego przed przystąpieniem do dysocjacji.W razie potrzeby monowarstwy komórek można przepłukać PBS i odessać do pojemnika na odpady. Następnie należy dodać odczyn dysocjujący tripsyna EDTA i ponownie ustawić naczynie w pozycji mieszania. Po wyrównaniu i rozprowadzeniu odczynnika we wszystkich warstwach, zgodnie z wcześniejszą demonstracją, inkubować kolbę w temperaturze 37 °C przez wymagany czas.Po zneutralizowaniu roztworu w odczynniku inaktywującym i powtórzeniu etapów mieszania, równoważenia i rozdziału, przelać zawiesinę komórkową do probówki odbiorczej. Na koniec przechylić wieloflakon w prawo pod kątem 45 stopni, od strony portu mieszającego, utrzymując naczynie w pozycji odwróconej.Użyj pipety, aby zebrać pozostałe odczynniki. Pobierz alikwot komórek w celu ich policzenia, aby określić stężenie komórek. W przypadku stosowania pożywki wzrostowej w wielowarstwowej kolbie trzechwarstwowej zaleca się użycie od 75 do 150 ml pożywki do hodowli komórkowej.Przy użyciu pięciowarstwowej kolby wielowarstwowej możliwe jest inkubowanie od 125 do 250 mililitrów na naczynie. W przypadku czynników dysocjujących, do trójwarstwowej kolby wielowarstwowej można dodać 15 mililitrów lub więcej, a do naczyń pięciowarstwowych 25 mililitrów lub więcej, stosując kolby wielowarstwowe trój- i pięciowarstwowe. Jak przedstawiono na tym wykresie słupkowym, w kolbach wielowarstwowych wyhodowano i odzyskano od trzech do pięciu razy więcej komórek nerek malucha chomika niż w kolbach T 175.Na tej rycinie widać, że wydajność komórek z jednostki powierzchni jest taka sama w kolbach wielowarstwowych trój- i pięciowarstwowych oraz w kolbach T 1 75 dla komórek nerek chomika syryjskiego. Linia komórkowa gruczolakoraka prostaty człowieka, linia komórkowa raka wątroby człowieka oraz linia komórkowa nerek człowieka eco pack 2 2 9 3, wszystkie hodowane w odpowiednich pożywkach wzrostowych dla tych danych. Hodowla komórkowa.Połżywkę dodano do pięciowarstwowych kolb wielowarstwowych i podzielono na warstwy. Zgodnie z zaprezentowanym protokołem, w poszczególnych warstwach wykonano otwory, a następnie wypompowano i zmierzono objętość pożywki z każdej z nich. Masa odzyskanej cieczy z każdej warstwy była względnie jednorodna, co potwierdziło równomierny rozkład pożywki w całym naczyniu.Po dokonaniu podziału przedstawionego na tej rysunku, przeprowadzono symulację rozkładu komórek pomiędzy warstwami wielowarstwowego kolby przy użyciu kulek o rozmiarach zbliżonych do komórek, co potwierdzają przedstawione tutaj dane dotyczące liczby kulek na warstwę. Port mieszający umożliwił jednorodne rozprzestrzenienie kulek i odczynników pomiędzy warstwami wielowarstwowej kolby. Poniżej znajdują się reprezentatywne obrazy wzorców barwienia komórek hodowanych do stopnia zrostu powyżej 80% w trójwarstwowych kolbach.Na uzupełnionych pożywkach wzrostowych przedstawiono monowarstwy komórkowe, które zostały utrwalone i zabarwione fioletem krystalicznym. Warstwy z wielowarstwowego kolby zostały wycięte, a następnie obrazy zostały zeskanowane. Zwróć uwagę na jednorodny wzór rozmieszczenia komórek na wszystkich warstwach wielowarstwowej kolby.Ta ostatnia rycina przedstawia dane z analizy zużytej pożywki wyizolowanej z kultur ludzkich komórek embrionalnych nerek po 96 godzinach, przeprowadzonej przy użyciu analizatora Bio Profile Flex. Nie stwierdzono różnic w nasyceniu powietrzem w pożywce wyizolowanej z poszczególnych warstw pięciowarstwowych kolb wielowarstwowych w porównaniu z kolbami T 175. Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać dokładną wiedzę na temat wykorzystania kolb wielowarstwowych w celu zwiększenia wydajności.

scale-up-of-mammalian-cell-culture-using-a-new-multilayered-flask

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Zwiększenie skali hodowli komórek ssaków przy użyciu nowej wielowarstwowej kolby

Opracowaliśmy zautomatyzowaną platformę do hodowli komórek i przesłuchań do eksperymentów stymulacji komórek na mikroskalę.  Platforma oferuje prostą, wszechstronną i precyzyjną kontrolę w hodowli i stymulacji małych populacji komórek oraz odzyskiwaniu lizatów do analiz molekularnych.  Platforma doskonale nadaje się do badań, w których wykorzystuje się cenne komórki i/lub odczynniki.

Wszechstronna, zautomatyzowana platforma do eksperymentów ze stymulacją komórek w mikroskali

Korzystając z bioreaktora pneumatycznego, demonstrujemy montaż, działanie i wydajność tego jednorazowego systemu bioreaktorów do wzrostu komórek ssaków.

Hodowla komórek ssaków przy użyciu systemu jednorazowego bioreaktora pneumatycznego

Regulacja składników odżywczych za pomocą ciągłego karmienia dostosowanego do wzrostu poprawia tempo wzrostu sferoid komórek ssaków w porównaniu do przerywanego karmienia partiami dla kultur w bioreaktorach z mieszaną zawiesiną.  Niniejsze badanie demonstruje metody wymagane do ustalenia prostych kultur karmionych o skorygowanej dawce.

Regulacja składników odżywczych poprzez ciągłe karmienie w celu ekspansji komórek ssaków w sferoidach na dużą skalę

Opisane protokoły pozwalają laboratoriom na przeprowadzanie skalowalnych, przylegających hodowli komórek macierzystych z dużą wydajnością przy minimalnym nakładzie pracy, doświadczenia i inwestycji w sprzęt przy użyciu programowalnego robota do obsługi cieczy i 96-dołkowych płytek.  iPSC pasażowane ponad 20 razy w tym systemie utrzymywały pluripotencję, prawidłowe kariotypy i różnicowały się w kardiomiocyty.

Skalowalna hodowla i produkcja iPSC na 96-dołkowych płytkach przy użyciu zrobotyzowanego systemu obsługi cieczy

Tutaj prezentujemy protokół izolacji i hodowli pojedynczych komórek za pomocą platformy mikroprzepływowej, który wykorzystuje nową koncepcję projektowania mikrostudzienek, aby umożliwić wysokowydajną izolację pojedynczych komórek i długoterminową hodowlę klonalną.

Platforma mikroprzepływowa do wysokowydajnej izolacji i hodowli pojedynczych komórek

Prezentujemy tutaj metodę, która łączy użycie chemicznego usuwania epigenetycznego z sygnałami związanymi z mechanosensoryką, aby efektywnie generować komórki pluripotencjalne ssaków, bez potrzeby transfekcji genów lub wektorów retrowirusowych. Strategia ta jest zatem obiecująca dla medycyny translacyjnej i stanowi znaczący postęp w technologii organoidów komórek macierzystych.

Dwuetapowa strategia, która łączy modyfikację epigenetyczną i wskazówki biomechaniczne w celu wygenerowania komórek pluripotencjalnych ssaków

Prezentowany protokół opisuje rozwój i wykorzystanie techniki barwienia aktyną na bazie falloidyny z konfokalną laserową mikroskopią skaningową (CLSM) do wizualizacji przylegającej struktury warstwy komórkowej w mikroprzepływowych kanałach hodowli dynamicznej i tradycyjnych komorach do hodowli statycznej ze stałą studnią. Takie podejście pomaga w ocenie zbiegu warstw komórkowych, tworzenia monowarstw i jednorodności grubości warstwy.

Przygotowanie i ocena strukturalna monowarstw komórek nabłonka w fizjologicznie dobranym urządzeniu do hodowli mikroprzepływowej

Tutaj prezentujemy protokół pobierania przylegających komórek z wielowarstwowych kolb w zamknięty półautomatyczny sposób za pomocą systemu wirowania przeciwprądowego. Protokół ten może być stosowany do zbierania zarówno komórek przylegających, jak i zawiesinowych z innych platform do rozbudowy komórek z niewielkimi modyfikacjami istniejących etapów.

Przetwarzanie ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych do zastosowań klinicznych przy użyciu zamkniętego, półautomatycznego przepływu pracy

Tutaj prezentujemy protokół umożliwiający produkcję na dużą skalę komórek przylegających za pomocą całkowicie zamkniętego systemu opartego na rozpuszczalnych mikronośnikach klasy GMP. Hodowla ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych, komórek HEK293T i komórek Vero została zwalidowana i spełniła zarówno wymagania ilościowe, jak i kryteria jakościowe dla branży terapii komórkowej i genowej.

Produkcja ogniw na dużą skalę w oparciu o rozpuszczalne porowate mikronośniki klasy GMP

Tutaj opisujemy różne metody tworzenia wielokomórkowych sferoidów, aby przeprowadzić następczą wieloparametrową mikroskopię żywych komórek. Wykorzystując mikroskopię obrazowania czasu życia fluorescencji (FLIM), autofluorescencję komórkową, barwniki barwiące i nanocząstki, przedstawiono podejście do analizy metabolizmu komórkowego, niedotlenienia i śmierci komórki w żywych trójwymiarowych (3D) nowotworach i sferoidach pochodzących z komórek macierzystych.

Produkcja i wieloparametrowa mikroskopia obrazowania czasu życia fluorescencji żywych komórek (FLIM) sferoid wielokomórkowych

Naucz się hodowli komórek ssaków zwiększającej produktywność przy użyciu wielowarstwowych kolb BD Falcon. Ta metoda pozwala uzyskać trzy do pięciokrotnie wyższy plon komórek w porównaniu do tradycyjnych kolb T175.

Skalowanie hodowli komórek ssaków przy użyciu nowej kolby wielowarstwowej

Przeglądaj więcej filmów