Test wymuszonego pływania myszy

Test wymuszonego pływania na myszy jest powszechnym testem stosowanym do przewidywania skuteczności leków przeciwdepresyjnych. Ten film demonstruje procedury mysiej wersji testu wymuszonego pływania. Wersja myszy różni się od wersji wrap i nie powinna być używana zamiennie.

W teście wymuszonego pływania myszy umieszcza się w zbiorniku wypełnionym wodą. Mysz pozostaje w zbiorniku przez sześć minut. W tym czasie zachowania podmiotu są rejestrowane.

Pod koniec sześciominutowego okresu testowego tester jest wyjmowany z wody. Po zakończeniu badania nagrania wizualne są przesyłane do komputera lub monitora wideo. Do analizy w obserwatorze mierzy czas, jaki mysz spędza na zmaganiach w ciągu ostatnich czterech minut sześciominutowej sesji.

Leki przeciwdepresyjne wydłużają czas spędzony na zmaganiu się. Znajduje to odzwierciedlenie w krótszych okresach bezruchu. Cześć, nazywam się Sean i pracuję w laboratorium doktora Todda Goulda w Szkole Medycznej Uniwersytetu Maryland.

Cześć, jestem Chantelle z tego samego laboratorium. W tym filmie pokażemy, jak wykonać i ocenić myszą wersję testu wymuszonego pływania. Test wymuszonego pływania na myszach służy do oceny potencjalnej skuteczności leczenia przeciwdepresyjnego.

Więc zanurzmy się, dobrze? Używamy przezroczystych cylindrycznych zbiorników wykonanych z wytrzymałego materiału, takiego jak pleksi, wymiary zbiornika są dobrane tak, aby myszy nie uciekały i nie dotykały dna stopami lub ogonem. Napełnij zbiornik wodą z kranu do ustalonego i oznaczonego poziomu, wyreguluj temperaturę wody.

Powinna wynosić od 23 do 25 stopni Celsjusza. Zbiorniki na wodę powinny być przystosowane do filmowania. W naszym laboratorium przeprowadzamy test wymuszonego pływania z czterema do pięciu osobami na raz między zbiornikami.

Umieszczamy przegrody, aby obiekty nie mogły się nawzajem obserwować. Te przegrody zapewniają również kontrast tła z myszami. W przypadku myszy albinosów czerń zapewnia dobry kontrast dla nagrań wideo.

W przypadku ciemniejszych odmian myszy odpowiednie jest białe lub kremowe tło. Przed rozpoczęciem eksperymentu uruchom maszynę do białego szumu. Upewnij się, że nie jest zbyt głośno.

Powinien maskować tylko wszelkie przerywane dźwięki. Zaproś badanych do pokoju eksperymentów. Okres ten trwa zazwyczaj co najmniej godzinę.

Warunki w pomieszczeniu doświadczalnym powinny być stałe i wolne od hałasów, zmian poziomu światła i innych możliwych zakłóceń. Po zakończeniu okresu przyzwyczajenia można rozpocząć badanie. Ważne jest, aby zapisać nazwę sesji Najpierw chwyć myszy za ogony i delikatnie umieść je w zbiorniku.

Ważne jest, aby robić to powoli, aby zwierzęta mogły się zorientować, gdy dotkną powierzchni wody. Pod koniec sześciominutowego okresu badania nagrywa się na wideo identyfikację zwierząt i zatrzymuje nagrywanie. Usuń myszy w tej samej kolejności, w jakiej zostały uruchomione i delikatnie osusz je ręcznikami papierowymi przed ponownym włożeniem do klatki.

Woda w zbiornikach nie powinna być ponownie wykorzystywana. Teraz, gdy zakończyliśmy testy, przejdźmy do oceniania zachowań w teście Mass Force Swim. Główną zmienną, która jest oceniana, jest czas, przez jaki zwierzęta pozostają nieruchome podczas badania.

Ogólnie rzecz biorąc, w teście wymuszonego pływania myszą oceniane są ostatnie cztery minuty z całkowitej sześciominutowej sesji. Powodem tego jest fakt, że większość myszy, niezależnie od leczenia, jest stale mobilna we wczesnych stadiach testu. Działanie to przyćmiewa wszelkie potencjalne efekty leczenia.

Jak widać na tym filmie, myszy są bardzo aktywne podczas początkowych etapów testu. Ta aktywność zmniejszy się po pierwszych dwóch minutach na każdy czas spędzony za myszą. Telefon komórkowy jest mierzony za pomocą stopera ekranowego sterowanego za pomocą pada do gier.

Drugi stoper odlicza 240 sekund. Mobilność w czasie próby definiuje się jako wszelkie ruchy inne niż te, które są niezbędne do zrównoważenia ciała i utrzymania głowy powyżej granicy wody. Zobaczmy teraz przykładową punktację badania.

Najpierw zajmiemy się innymi myszami, które nie są oceniane, aby zapobiec nieporozumieniom. Myszy na ogół łatwo unoszą się w wodzie. Jednak nadal wykazują niewielkie ruchy, aby zrównoważyć swoje ciała i utrzymać głowy nad wodą.

Te zachowania nie są próbą ucieczki i nie powinny być oceniane jako mobilność. Ponadto, po pojedynczym ataku myszy o dużej ruchliwości, mimo że zasadniczo nieruchome nadal mogą dryfować w wodzie w wyniku uzyskanego wcześniej pędu, ruchy te również nie powinny być oceniane jako mobilność. Przejdźmy teraz do innego filmu.

Mysz w tym filmie wyświetla okresy zarówno mobilności, jak i bezruchu, jak oznaczono na ekranie, obserwacja zarejestruje czas mobilności. Chociaż teoretycznie możliwe jest bezpośrednie zmierzenie czasu bezruchu, łatwiej jest wykryć i zmierzyć aktywne ruchy niż ich brak. Tradycyjnie podaje się czas bezruchu.

Czas bezruchu jest określany przez odjęcie czasu ruchu od 240 sekund. Zdobycie czwartego testu pływackiego wymaga dużo treningu i praktyki. Aby osiągnąć wysoki poziom niezawodności, ważne jest stworzenie wewnętrznego standardu życia i szkolenie każdego nowego obserwatora, aż osiągnie wysoki poziom niezawodności.

W tym filmie wyjaśniamy, jak wygląda mysza wersja testu wymuszonego pływania. Powodzenia w przyszłych eksperymentach.