Name: Izolowany preparat mikronaczyń szkieletowych ex vivo do badania reaktywności naczyniowej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Poznaj metodę izolacji i podwójnej kanulacji mikronaczyń oporowych z mięśnia gracilis w preparacie ex vivo. Technika umożliwia ocenę reaktywności naczyniowej i właściwości strukturalnych naczyń krwionośnych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Niniejsza praca była finansowana przez American Heart Association (EIA 0740129N) oraz NIH T32 HL90610.

<ol><li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li>
<li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth-dependent+changes+in+endothelial+factors+regulating+arteriolar+tone%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li>
<li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+rat+intracerebral+arterioles%3A+methods%2C+morphology%2C+and+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li>
<li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li>
<li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin-%281-7%29+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li>
<li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Toxicol.+Environ.+Health+A%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li>
<li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li>
<li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li>
<li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li>
<li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li>
<li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li>
<li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. solated Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDavis%2C+MJ+%22Isolated%2C+perfused+microvessels.+In%3A+Clinically+Applied+Microcirculation+Research%22">Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research</a>. Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. 32, CRC Press, Inc. 435-456 (1995).</li>
<li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li>
</ol>

Nie zadeklarowano żadnych konfliktów interesów.

Przedstawiony protokół opisuje izolację, wycięcie i podwójną kanulację mikrońaczynki mięśnia szkieletowego, choć tę ogólną technikę można z łatwością zastosować do większości tkanek. W niniejszym manuskrypcie autorzy użyli terminu „tętniczka” w odniesieniu do naczynia oporowego o średnicy od 70-120 μm w spoczynkowym napięciu aktywnym, które jest również głównym czynnikiem regulującym opór perfuzyjny narządu lub tkanki.
Po wprowadzeniu pewnych modyfikacji system ten może zostać dostosowany do w...

ex vivo preparacja izolowanych szkieletowych mikronaczyń do badania reaktywności naczyniowej

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

Preparat izolowanego mikonaczynia jest preparatem ex vivo, który umożliwia badanie różnych czynników kontrolujących średnicę naczynia, a tym samym opór perfuzyjny1-5. Jest to klasyczny preparat eksperymentalny, który w dużej mierze został pierwotnie opisany przez Uchidę et al.15 kilka dziesięcioleci temu. Ten pierwotny opis stał się podstawą technik, które zostały w znacznym stopniu zmodyfikowane i ulepszone, głównie w laboratorium dr. Briana Dulinga na Uniwersytecie Wirgińskim6-8, a w następnych stronach przedstawiamy aktualne podejście. W tym preparacie jako wybrany mikonaczynie będzie występować tętniczka mięśnia smukłego szczura, jednak podstawową metodę przygotowania można z łatwością zastosować do naczyń izolowanych z niemal każdej innej tkanki lub narządu u różnych gatunków9-13. Zmiany mechaniczne (tj. wymiarowe) w izolowanych mikonaczyniach można łatwo oceniać w odpowiedzi na szeroki wachlarz bodźców fizjologicznych (np. hipoksja, ciśnienie wewnątrznaczyniowe lub siły ścinające) lub farmakologicznych, co pozwala na zrozumienie elementów mechanistycznych składających się na zintegrowane odpowiedzi w nienaruszonej, choć ex vivo, tkance. Istotność tej metody polega na tym, że umożliwia ona łatwe manipulowanie czynnikami wpływającymi na zintegrowaną regulację średnicy mikonaczynia, pozwalając jednocześnie na kontrolę wielu oddziaływań z innych źródeł, w tym m.in. ciśnienia wewnątrznaczyniowego (miogennego), unerwienia autonomicznego, czynników hemodynamicznych (np. naprężenia ścinającego), bodźców zależnych lub niezależnych od śródbłonka, wpływów hormonalnych i miąższowych. W odpowiednich warunkach eksperymentalnych i przy założeniu właściwych celów, może to stanowić przewagę nad preparatami tkanek/narządów in vivo lub in situ, które nie pozwalają na tak łatwą kontrolę szerszych zmiennych systemowych.
Głównym ograniczeniem tej preparacji jest w zasadzie konsekwencja jej zalet. Z definicji zachowanie tych naczyń jest badane w warunkach, w których usunięto wiele z najistotniejszych czynników regulujących opór naczyniowy, w tym czynniki neuronalne, humoralne, metaboliczne itp. W związku z tym badaczowi zaleca się unikanie nadinterpretacji i ekstrapolacji danych zebranych przy użyciu tej preparacji. Innym istotnym problemem w odniesieniu do tej preparacji jest fakt, że bardzo łatwo można uszkodzić komponenty komórkowe, takie jak wyściółka śródbłonkowa lub naczyniowa mięśnie gładkie, co może wprowadzić zmienne źródła błędów. Wysoce zaleca się, aby poszczególni badacze stosowali odpowiednie pomiary w celu zapewnienia jakości preparacji, zarówno na początku eksperymentu, jak i okresowo w trakcie trwania protokołu.

Opisano preparację ex vivo do izolacji największych tętniczek oporowych mięśnia smukłego w celu badania zarówno reakcji naczyniowych na bodźce naczyniokurczące, jak i oceny podstawowych właściwości strukturalnych za pomocą pasywnej mechaniki ścian.

ex vivo Preparacja izolowanych szkieletowych mikronaczyń do badania reaktywności naczyniowej

Preparat izolowanych mikronaczyń jest preparatem ex vivo, który umożliwia badanie różnych czynników wpływających na kontrolę naczyń...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest chirurgiczne wyizolowanie, usunięcie i podwójna kanulacja poszczególnych tętniczek oporowych. W celu przeprowadzenia badań ex vivo realizuje się to poprzez uprzednią identyfikację i chirurgiczne wyizolowanie mikro naczyń u znieczulonego zwierzęcia. Po przeniesieniu mikro naczyń do komory naczyniowej, kanulowane są zarówno ich końce proksymalne, jak i dystalne.W przeciwieństwie do poprzednich etapów, mikro naczynia są poddawane wyzwaniom farmakologicznym lub fizjologicznym oraz interwencjom eksperymentalnym w celu oceny mechanizmów leżących u podstaw funkcji lub dysfunkcji właściwych dla samego naczynia. Ostatecznie wyniki ukazują wzorce i mechanizmy przyczyniające się do reaktywności naczyniowej w warunkach izolacji, poprzez odpowiednio ukierunkowane bodźce i interwencje. Zazwyczaj osoby początkujące w tej metodzie napotykają trudności, ponieważ preparatyka ta wymaga nie tylko wypracowania doskonałych umiejętności chirurgicznych do pracy pod mikroskopem, ale także cierpliwości i precyzyjnej kontroli motorycznej niezbędnej do podwójnej kanulacji izolowanych mikro naczyń o średnicy, która często wynosi znacznie mniej niż sto mikronów.Należy to wykonać przy absolutnym minimum urazów naczynia, w przeciwnym razie cała procedura doprowadzi jedynie do uzyskania naczynia nieodpowiadającego na bodźce. Procedurę zademonstruje Joshua Butcher, doktorant z mojego laboratorium. Przed przystąpieniem do pracy z izolowanymi mikronaczyniami należy przygotować sprzęt. Rozpocznij od wygięcia wcześniej przygotowanych szklanych mikropipet do odpowiedniej konfiguracji, podgrzewając je nad płomieniem butanowym. Następnie za pomocą precyzyjnej pęsety odłam końcówki, aby uzyskać odpowiednią średnicę.Umieść dwie mikropipety naprzeciw siebie w uchwytach do pipet dla komory naczyń mikrokrwionośnych, orientując je tak, aby końcówki znajdowały się w tej samej płaszczyźnie pionowej i poziomej wewnątrz komory naczyń. Następnie przygotuj fizjologiczny roztwór soli (PSS) i sprawdź, czy pH zostało ustawione na poziomy odpowiednie dla konkretnych warunków eksperymentalnych. Używając hemocytometru lub mikrometru przedmiotowego mikroskopu, skalibruj cyfrowe suwmiarki wideo, które będą wykorzystywane do pomiaru średnicy naczyń.Do przygotowania pętli z pojedynczym końcem, służących do mocowania mikronaczyń do pipet, należy użyć nici chirurgicznej do okulistyki o rozmiarze 8-0 lub mniejszym. Pętle należy przechowywać w szalce Petriego na małym pasku taśmy owiniętym wokół szkiełka przedmiotowego w dniu przeprowadzenia eksperymentu. Należy włączyć gazy do równowagowania w komorze naczyniowej oraz w zbiornikach PERFUSE 8 i SUSE 8.Wypełnij wszystkie zbiorniki, probówki i komory roztworem PSS. W razie potrzeby użyj strzykawki, aby delikatnie przepchnąć PSS przez całą pipetę, upewniając się, że nie jest ona zablokowana i została całkowicie wypełniona. Utrzymuj ciśnienie dopływu w rozsądnych granicach, aby uniknąć uszkodzenia przetworników ciśnienia.Po znieczuleniu zwierzęcia i odsłonięciu mikronaczyń, usuń mikronaczynia, chwytając ich zewnętrzną stronę za pomocą precyzyjnej pęsety i przecinając wzdłuż długości naczynia. Zachowaj szczególną ostrożność, aby nie szarpać ani nie rozciągać naczynia. Następnie umieść naczynie w wypełnionej kąpieli wodnej i, używając pary precyzyjnych pęset przy niewielkim tempie perfuzji, przytrzymaj każdą stronę ściany światła proksymalnego odcinka naczynia i przeprowadź kanulację końca proksymalnego za pomocą pipety doprowadzającej.Następnie nasuń naczynie na końcówki kaniuli i przesunij je do punktu, w którym pętle w kształcie litery T będą mogły zabezpieczyć naczynie. Umieść pętlę T na dystalnym końcu naczynia i przeprowadź kaniulację na pipecie odpływowej, zabezpieczając ją pętlami T. Reguluj kaniulę tak długo, aż zniekształcenie naczynia będzie minimalne, a jego długość będzie zbliżona do długości in vivo.Umieść w kąpieli mały kamień napowietrzający, doprowadzający odpowiednią mieszaninę gazów, a następnie przykryj komorę folią plastikową lub szklaną osłoną, aby zapobiec rozpryskiwaniu cieczy na obiektyw mikroskopu. Okresowo zaciskaj rurkę odpływową, aby sprawdzić, czy w naczyniu wytwarza się odpowiednie ciśnienie.Sprawdź szczelność naczyń, zwiększając w nich ciśnienie i zaklempowując kolejno linie odpływu, a następnie dopływu. Jeśli ciśnienie wewnątrz światła naczynia jest stabilne, oznacza to brak widocznych wycieków. Jeśli naczynie posiada małą gałąź boczną, z której wycieka płyn, zwiąż ją pojedynczą pętlą szwy oftalmicznej 10-0. Po kaniulacji mikronaczyń, wyrównaniu ciśnienia i walidacji, rozpocznij eksperyment w celu ustalenia wstępnych odpowiedzi kontrolnych.Na przykład, w przypadku bodźca fizjologicznego, takiego jak aktywacja miogenna lub skurcz indukowany ciśnieniem, należy losowo zmieniać ciśnienie wewnątrz światła naczynia w pożądanym zakresie i dać naczyniu czas na reakcję, podając fenylefrynę w różnych stężeniach w losowej kolejności. Po odpowiednim czasie interwencji należy rozpocząć drugą rundę gromadzenia danych, wykonując dodatkowe interwencje, wypłukując początkowy roztwór lub usuwając bodziec fizjologiczny i weryfikując, czy naczynie powróciło do stanu równowagi. Po utracie aktywnego napięcia naczynia należy zakończyć eksperyment lub, jeśli jest to wymagane, zebrać dane dotyczące mechaniki ściany naczynia.Po zakończeniu eksperymentu należy przemyć wszystkie linie i komory roztworem PSS oraz obfitą ilością wody destylowanej lub dejonizowanej, a następnie pozostawić je do całkowitego wyschnięcia. Przedstawiono tutaj kaniulowane miknnaczynie z pipetami dopływowymi i odpływowymi oraz pętlami w dużym powiększeniu. Widoczna jest tutaj wewnętrzna średnica wynosząca 12 mikronów, zmierzona za pomocą suwmiarki cyfrowej.Przedstawiono kaniulowane mikonnaczynie po osiągnięciu stanu równowagi. Tutaj widoczne jest to samo naczynie po rozszerzeniu w odpowiedzi na podanie acetylocholiny. I wreszcie, jest to naczynie skurczone po podaniu fenylefryny.Wykresy te podsumowują reakcje izolowanych mikronaczyń na wyzwania w postaci hipoksji, zwiększających się stężeń acetylocholiny lub zmian ciśnienia wewnątrznaczyniowego w warunkach kontrolnych, a następnie w obecności PSS wolnego od wapnia. Po opanowaniu tej techniki można ją przeprowadzić w około godzinę, pod warunkiem właściwego wykonania, a naczynie może łatwo zachować żywotność przez wiele godzin w komorze przy zachowaniu odpowiedniej temperatury, gazów oraz warunków SUSE eight lub perfuse eight.

the-ex-vivo-isolated-skeletal-microvessel-preparation-for

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Ex vivo izolowany preparat mikronaczyń szkieletu do badania reaktywności naczyń

Przedstawiono nową, wszechstronną metodę obserwacji mikrokrążenia. Jest ona uważana za odpowiednią do długotrwałej obserwacji oraz do łączenia z interwencjami farmakofizjologicznymi lub biologii molekularnej.

Pomiar mikrokrążenia in vivo w mięśniach szkieletowych za pomocą mikroskopii intravitalnej

Prezentujemy preparat do wizualizacji i manipulowania sygnalizacją wapniową w natywnym, nienaruszonym śródbłonku mikronaczyniowym. Śródbłonek świeżo wyizolowany z tętnic oporowych myszy zaopatrujących mięśnie szkieletowe zachowują morfologię in vivo i dynamiczną sygnalizację w sąsiednich komórkach i między nimi. Rurki śródbłonka można przygotować z mikronaczyń innych tkanek i narządów.

Izolacja śródbłonka mikronaczyniowego z tętnic oporowych myszy

Jelito cienkie jest często narażone na działanie toksyn, które mogą wpływać na przepływ krwi i negatywnie wpływać na wchłanianie składników odżywczych. Za pomocą multimiografu i izolatów tętnic i żył krezkowych można badać pod kątem wazoaktywności związki lub toksyny.

Izolowanie i wykorzystanie odcinków tętnicy i żyły krezkowej bydła jako testu biologicznego do badania wazoaktywności w jelicie cienkim

Przedstawiamy protokół do badania interakcji między ludzkim śródbłonkiem a perycytami u myszy za pomocą wariantu testu angiogenezy z zatyczką żelową macierzy.

In vivo (in vivo) Badanie interakcji śródbłonka człowieka z perycytami za pomocą testu Matrix Gel Plug u myszy

Opisano procedurę przygotowania en face tętnicy szyjnej i aorty myszy. Takie preparaty, po immunofluorescencyjnym wybarwieniu specyficznymi przeciwciałami, umożliwiają badanie lokalizacji białek i identyfikację typów komórek w obrębie całej ściany naczyniowej za pomocą mikroskopii konfokalnej.

En Face Przygotowanie naczyń krwionośnych myszy

Systemy videomikroskopii służą do badania funkcjonalnych właściwości izolowanych tętniczek tkanki tłuszczowej w odpowiedzi na bodźce fizjologiczne i farmakologiczne. Technika ta może być stosowana do badania fenotypów mikronaczyniowych w różnych domenach tkanki tłuszczowej u otyłych ludzi.

Ocena funkcji mikrokrążenia tkanki tłuszczowej człowieka za pomocą wideomikroskopii

Ten manuskrypt opisuje protokoły mikroskopii wideo in vitro do oceny funkcji naczyniowej w tętnicach oporowych mózgu szczurów. W manuskrypcie opisano również techniki oceny gęstości mikronaczyń za pomocą znakowanej fluorescencyjnie lektyny i perfuzji tkanek za pomocą laserowej przepływometrii dopplerowskiej.

Ocena mechanizmów kontroli naczyniowej z wykorzystaniem wideomikroskopii izolowanych tętnic opornych szczurów

Ten manuskrypt opisuje prosty protokół izolacji tętniczek od siatkówki szczura, który może być wykorzystany w badaniach elektrofizjologicznych, obrazowania wapnia i miografii ciśnieniowej.

Izolacja tętniczek siatkówki do badań fizjologii komórek ex vivo

Tutaj prezentujemy protokół barwienia immunofluorescencyjnego, aby bezpośrednio obserwować komórki śródbłonka aorty myszy. Technika ta jest przydatna podczas badania fenotypu komórkowego i molekularnego komórek śródbłonka w różnych wzorcach przepływu oraz w rozwoju miażdżycy.

Stosowanie barwienia immunofluorescencyjnego en face do bezpośredniej obserwacji komórek śródbłonka naczyń krwionośnych

Celem tego protokołu jest odizolowanie mikronaczyń z wielu regionów ośrodkowego układu nerwowego kręgowców lizencefalicznych i gyrencefalicznych.

Niezawodna izolacja mikronaczyń ośrodkowego układu nerwowego w pięciu grupach kręgowców

Intensywne przygotowanie nienaruszonych "rurek" śródbłonka mózgu myszy z tętniczek miąższowych mózgu jest zilustrowane do badania regulacji przepływu krwi w mózgu. Ponadto pokazujemy eksperymentalne mocne strony tego modelu badania śródbłonka do obrazowania fluorescencyjnego i pomiaru elektrofizjologii kluczowych szlaków sygnalizacji komórkowej, w tym zmian wewnątrzkomórkowych [Ca2+] i potencjału błonowego.

Izolacja i analiza funkcjonalna śródbłonka tętniczego miąższu mózgu myszy

Poznaj metodę izolacji i podwójnej kanulacji mikronaczyń oporowych z mięśnia gracilis w preparacie ex vivo. Technika umożliwia ocenę reaktywności naczyniowej i właściwości strukturalnych naczyń krwionośnych.

ex vivo Preparacja izolowanych szkieletowych mikronaczyń do badania reaktywności naczyniowej

Przeglądaj więcej filmów