Określanie statusu zakażenia helmintozami przenoszonymi przez glebę oraz sprawności fizycznej dzieci w wieku szkolnym

Celem poniższych metodologii jest ułatwienie i standaryzacja prób oceny statusu zakażeń helminthami przenoszonymi w ten sposób oraz ustalenie, czy zakażenia te wpływają na sprawność fizyczną dzieci w wieku szkolnym. Osiąga się to poprzez zastosowanie techniki Cato Katz w celu zdiagnozowania zakażeń pospolitymi helminthami przenoszonymi przez glebę, mianowicie Ascaris Lumoid TUS Tria, a także nicniami haczykowatymi i CLIs stoma Duo Denali oraz NTO ERUs. W drugim kroku przeprowadza się technikę Ermana, która jest najszerzej stosowaną metodą diagnostyki Strully Stir Corrales.

Następnie, w celu oceny sprawności fizycznej dzieci, przeprowadza się test biegów wahadłowych na dystansie 20 metrów. Uzyskane wyniki wykazują różnice w poziomach sprawności fizycznej między dziećmi zakażonymi i niezakażonymi Helminthes, w oparciu o wyżej wspomniane metodologie. Połączenie tych metod może pomóc w udzieleniu odpowiedzi na kluczowe pytania, takie jak: czy infekcje przenoszone przez Helminthes mają wpływ na sprawność fizyczną zakażonych osób oraz jakie jest rzeczywiste obciążenie wynikające z takich zakażeń.

Technika Cato-Catz jest stosowana w celu ułatwienia wykrywania jaj pasożytów wydalanych z kałem przez zakażone osobniki. W pierwszej kolejności należy umieścić standardowy szablon Cato-CATT na środku szkiełka przedmiotowego. Szablon posiada otwór w centrum, w którym, przy założonych rękawiczkach, należy umieścić 41,7 mg kału.

Nłożyć od dwóch do trzech gramów świeżej próbki kału na kawałek gazety lub folii aluminiowej. Następnie docisnąć kawałek drucianej lub plastikowej siatki do kału w celu przesiania próbki. Za pomocą małej plastikowej szpatułki zebrać przesiany materiał z siatki i całkowicie wypełnić nim otwór w szablonie Cato Kat.

Wyrównaj zawartość otworu za pomocą szpatułki, aby usunąć nadmiar materiału kałowego. Następnie wyjmij szablon pionowo, nie naruszając materiału kałowego, który przylega teraz do szkiełka przedmiotowego. Szablon i szpatułkę można ponownie wykorzystać po umyciu detergentem i wodą.

Następnie na próbkę kału umieszczoną na szkiełku przedmiotowym należy nałożyć kawałek celofanu, który był moczony w roztworze malachitu zielonego z gliceryną przez co najmniej 24 godziny. Aby rozprowadzić kał w postaci grubego rozmazu, należy delikatnie docisnąć czyste szkiełko przedmiotowe do szkiełka z próbką i równomiernie rozprowadzić materiał w obrębie okręgu o średnicy nieco mniejszej niż szerokość szkiełka przedmiotowego. Następnie należy odłożyć szkiełko w miejsce osłonięte od bezpośredniego światła słonecznego i pozostawić do przejaśnienia na 30 do 60 minut.

Po 30 do 60 minutach wyjmij preparat i systematycznie zbadaj grubą warstwę rozmazu pod mikroskopem świetlnym przy powiększeniu od 40 do 100 razy. Policz liczbę jaj i podziel je według gatunków. Następnie pomnóż liczbę jaj przez 24, aby uzyskać standaryzowany szacunek stopnia zakażenia, który konwencjonalnie wyraża się jako liczba jaj na gram kału lub EPG.

Aby przeprowadzić technikę Ermana, należy najpierw przygotować statyw zdolny utrzymać lejek szklany. Do trzpienia lejka szklanego przyczepić odcinek rurki gumowej. Rurkę należy zamknąć zaciskiem lub żabką, a następnie umieścić lejek na statywie.

Następnie wlej do lejka sito lub kawałek siatki drucianej uformowanej w stożek. Przykryj siatkę kawałkiem gazy medycznej. Następnie napełnij lejek wodą z kranu, upewniając się w rękawicach, że zestaw nie przecieka.

Przenieś 20 do 30 gramów świeżego kału na środek gazy medycznej i upewnij się, że próbka jest całkowicie zanurzona w wodzie, dodając w razie potrzeby więcej wody. Następnie złóż gazę medyczną nad próbką. W kolejnym kroku naświetlaj lejek sztucznym światłem od dołu przez dwie godziny.

Dzieje się tak ponieważ technika Ermana opiera się na zasadzie, że larwy *Strongyloides stercoralis* są fototaktyczne i w związku z tym migrują poza oświetloną próbkę kału. Po dwóch godzinach delikatnie zwolnij zacisk w gumowej rurce i zlej 50 ml wody z najniższej części lejka do probówki do wirowania. Następnie odwiruj zebraną wodę przy 600 ×g przez pięć minut.

Następnie ostrożnie odlej supernatant, nie naruszając osadu. Pozostaw w probówce ostatnie kilka kropel, resuspenduj i nanieś pipetą dwie krople roztworu na szkiełko przedmiotowe. Zbadaj preparat pod mikroskopem świetlnym, najpierw przy powiększeniu 40x w celu wykrycia pasożytów, a następnie przy powiększeniu od 100x do 400x w celu potwierdzenia gatunku.

Larwy pierwszego stadium OID są żywe i będą aktywnie poruszać się pod mikroskopem w celu przygotowania testu biegów wahadłowych. Najpierw odmierz płaski, prosty tor biegowy o długości 20 metrów i wyznacz tę odległość za pomocą pachołków. Załóż monitor tętna na nadgarstek uczestnika testu, a odpowiadający mu nadajnik wokół klatki piersiowej uczestnika.

Urządzenie to służy do pomiaru tętna przed i po teście, co pozwala monitorować, czy uczestnik włożył w badanie maksymalny wysiłek. Po zamocowaniu monitorów poproś dziecko, aby biegło tam i z powrotem na torze, podążając za tempem nagranych sygnałów dźwiękowych odpowiadających pętlom o długości 20 metrów, zaczynając od prędkości biegu 8,5 kilometrów na godzinę. Częstotliwość sygnałów wskazujących 20-metrowe interwały automatycznie zwiększa się o równowartość 0,5 kilometra na godzinę w każdej minucie, zapewniając, że uczestnik rozpoczyna bieg w nowym 20-metrowym interwale.

Sygnał jest podawany za każdym razem i kończy się przed pojawieniem się kolejnego sygnału. Zatrzymaj dziecko, jeśli nie utrzyma tempa przez dwa kolejne 20 metrowe odcinki. Następnie zapisz prędkość biegu dla ostatniego odcinka.

Uczestnik ukończył badanie, a następnie odnotowano jego wiek, płeć oraz osiągniętą częstotliwość akcji serca. Na koniec testu należy upewnić się, że osiągnięta częstotliwość jest maksymalną częstotliwością akcji serca dziecka. Jeśli maksymalna częstotliwość akcji serca nie została osiągnięta, może to oznaczać, że dziecko nie podjęło maksymalnego wysiłku i test należy powtórzyć.

Następnie należy oszacować maksymalną zdolność tlenową lub VO2 max uczestnika, korzystając z następującego równania: VO2 max równa się 31,025 plus 3,238 razy prędkość w km/h minus 3,248 razy wiek w latach plus 0,1536 razy prędkość w km/h razy wiek w latach. Dwa poniższe obrazy przedstawiają jaja Ascaris lumbricoides, które mają około 45 do 74 µm długości i 35 do 50 µm szerokości oraz posiadają grube ściany skorupki, co przedstawiono tutaj jako zapłodnione jajo A. lumbricoides.

Zwróć uwagę na wygląd otoczki albuminowej, która nadaje jajeczku złocistobrązową barwę. Dla kontrastu przedstawiono tutaj niezapłodnione jajeczko alumoidowe. Zauważ brak zewnętrznej otoczki oraz fakt, że jajeczko jest nieco bardziej wydłużone i większe od jajeczka zapłodnionego.

Ogólnie rzecz biorąc, na tym obrazie widoczne są jaja *Trichuris evisceratus*. Mają one około 50 mikronów długości i 22 mikrony szerokości, są wydłużone i posiadają wyraźne korki biegunowe. W przeciwieństwie do nich, widoczne tutaj jaja glisty haczykowatej mają bardzo cienką ścianę, za którą następuje przejrzysty pierścień otaczający gęsty skup komórek w centrum jaja.

Na tym obrazie przedstawiono larwy S stir Corrales L one. Mają one długość około 180 do 380 mikronów i bardzo krótką jamę gębową. Można zaobserwować wyraźny prymordium narządu płciowego, który został zaznaczony niebieską strzałką.

Czerwona strzałka wskazuje ogon larw, który ma ostry koniec. Test biegowy wahadłowy na dystansie 20 metrów został przeprowadzony w celu pomiaru sprawności fizycznej. Interpretację wyników testu biegowego wahadłowego można przeprowadzić na różne sposoby.

Sprawność fizyczną dzieci można porównać pomiędzy osobnikami zainfekowanymi i niezainfekowanymi, które są podobne pod względem wieku i płci, innych potencjalnie istotnych stanów zdrowia, statusu socjoekonomicznego oraz nawyków kulturowych. Można ponadto spróbować zidentyfikować możliwą zależność dawka-odpowiedź pomiędzy intensywnością infekcji STH a sprawnością fizyczną oraz porównać różny stopień wieloparazytyzmu ze sprawnością fizyczną. Przykładowo, przedstawiony tutaj wykres pokazuje, że sprawność fizyczna była znacznie obniżona u dzieci zainfekowanych T Tri Coria w porównaniu z dziećmi, które nie były zainfekowane T Tri Coia.

Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać gruntowną wiedzę na temat przeprowadzania techniki cięcia (cut cuts), techniki montażu na goło (bare mount) oraz testu biegu z migawką na dystansie 20 metrów. Metody te pomogą ocenić, czy infekcje hełmowe przenoszone przez soję mają wpływ na sprawność fizyczną dzieci w wieku szkolnym.