Name: Ortotopowy przeszczep wątroby u szczurów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 25 s
Description: Poznaj zmodyfikowaną technikę ortotopowego przeszczepu wątroby u szczurów, obejmującą izolację naczyń i anastomozę żył wrotnej oraz górnej. Metoda poprawia efektywność implantacji i służy jako narzędzie szkoleniowe w mikrochirurgii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

CT otrzymał wsparcie od Szwajcarskiej Narodowej Fundacji Nauki (grant SCORE 3232230-126233). Badanie zostało wsparte przez Fundację Artères, Fundację Astellas Europe oraz Fundację Boninchi.

1. Operacja dawcy
<ol>
 <li>Zanestezjować samce szczurów o masie 200±20 g przy użyciu izofluranu przez maskę stożkową (3% do indukcji, 2% w trakcie operacji, przepływ powietrza 1 l/min, FiO2 70%). </li>
 <li>Wyonać szeroką laparotomię pośrodkową i poprzeczną, a następnie przyżegać naczynia nabrzuszne po obu stronach. </li>
 <li>Przeciąć więzadło okrągłe wątroby i oddzielić lewą żyłę przeponową od żyły głównej górnej w odcinku nadwątrobowym. Na koniec przeciąć żyłę przeponową pomiędzy dwiema ligaturami z jedwabiu 7-0. </li>
 <li>Przeciąć więzadło trójkątne lewe oraz więzadło wątrobowo-żołądkowe. </li>
 <li>Przeciąć więzadło i tętnicę wątrobowo-przełykową pomiędzy ligaturami 7-0 (alternatywnie można zastosować koagulację). </li>
 <li>Wypreparować żyłę główną dolną w odcinku podwątrobowym aż do lewej żyły nerkowej. Oddzielić prawą żyłę nerkową od tkanek otaczających i przeciąć ją pomiędzy ligaturą 10-0 a 7-0, odpowiednio na jej końcu proksymalnym i dystalnym. </li>
 <li>Przeciąć prawą żyłę nadnerczową pomiędzy ligaturami 7-0 i uwolnić wątrobę z więzadeł tylnych poprzez cięcie przy delikatnej trakcji. </li>
 <li>Wypreparować żyłę żołądkowo-śledzionową i przeciąć ją pomiędzy ligaturą 10-0 a 7-0, odpowiednio na jej końcu proksymalnym i dystalnym. </li>
 <li>Przeciąć właściwą tętnicę wątrobową pomiędzy wiązaniami 7-0. </li>
 <li>Wypreparować żyłę dwunastniczo-trzustkową i przeciąć ją pomiędzy ligaturą 10-0 a 7-0, odpowiednio na jej końcu proksymalnym i dystalnym. </li>
 <li>Wprowadzić stent 22G o długości 3,5 mm do wspólnego przewodu żółciowego, wykonując niewielkie nacięcie w odległości 1 cm od wnęki wątroby. Zabezpieczyć stent w pozycji za pomocą ligatury 7-0. </li>
 <li>Wstrzyknąć 10 UI heparyny, rozcieńczonej w 1 ml soli fizjologicznej, przez grzbietową żyłę prącia. </li>
 <li>Kaniulować żyłę wrotną (jak najdalej od wnęki) igłą 21G i delikatnie przepłukać wątrobę 20 ml zimnego mleczka Ringera z mleczanami (lub innych roztworów konserwujących). Jednocześnie przeciąć żyłę główną dolną poniżej żył nerkowych, aby zapewnić odpowiedni odpływ. Zimna perfuzja wątroby powinna trwać od jednej do dwóch minut. </li>
 <li>Przeciąć żyłę wrotną poniżej żyły dwunastniczo-trzustkowej. </li>
 <li>Przeciąć wspólny przewód żółciowy poniżej ligatury wokół stentu. </li>
 <li>Dokończyć nacięcie żyły głównej dolnej w odcinku podwątrobowym. </li>
 <li>Przeciąć żyłę główną górną w odcinku nadwątrobowym aż do przepony i usunąć wątrobę. </li>
 <li>Umieścić wątrobę w naczyniu wypełnionym zimnym mleczkiem Ringera z mleczanami i postawić naczynie na podkładce z lodu. </li>
</ol>
2. Przygotowanie przeszczepu
<ol>
 <li>Wprowadź vena porta do mankietu, a następnie wywiń naczynie wokół krawędzi, aby odsłonić błonę wewnętrzną (intima). Zabezpiecz wywinięty segment na mankiecie ligaturą 7-0. </li>
 <li>Powtórz tę samą operację na infrahepatycznej vena cava. </li>
 <li>Umieść mikroklamrę (o długości 4-6 mm) na proksymalnej części infrahepatycznej vena cava. Zabieg ten zapobiega utracie krwi po reperfuzji wrotnej. </li>
 <li>Odwróć wątrobę i wprowadź dwa szwy z prolenu 8-0 w przeciwległych krawędziach bocznych suprahepatycznej vena cava, od zewnątrz do wewnątrz. </li>
 <li>Przechowuj przeszczep (zanurzony w roztworze mleczanu Ringera) w lodówce w temperaturze 0-4 °C. </li>
</ol>
3. Operacja biorcy
<ol>
 <li>Zanurzyć samce szczurów o masie 200±20 g w narkozie izofluranem za pomocą maski stożkowej (3% podczas indukcji, 2% w trakcie operacji, przepływ powietrza 1 l/min, FiO2 70%) i utrzymać na ogrzewanej podkładce. Należy pamiętać, aby masy ciała biorcy i dawcy były zbliżone (±40 g).</li>
 <li>Przed laparotomią wstrzyknąć podskórnie 10 ml soli fizjologicznej oraz domięśniowo 0,03 g piperacyliny/tazobaktamu.</li>
 <li>Wykonać laparotomię w linii pośrodkowej od wyrostka miecza do łonu.</li>
 <li>Odchylić wyrostek miecza za pomocą kleszczyków autostatycznych, aby lepiej odsłonić wątrobę.</li>
 <li>Przeciąć więzadła przednie i przeciąć lewą żyłę przeponową między dwiema podwiązkami 7-0.</li>
 <li>Przeciąć więzadło wątrobowo-przełykowe oraz tętnicę między podwiązkami 7-0 (alternatywnie można zastosować koagulację). Nie pokazano tego na filmie (procedura identyczna z operacją dawcy).</li>
 <li>Wyizolować żyłę główną dolną poniżej wątroby aż do prawej żyły nerkowej.</li>
 <li>Przeciąć prawą żyłę nadnerczową między podwiązkami 7-0 i uwolnić wątrobę od jej tylnych więzadeł, przecinając je pod delikatnym naciągiem (nie pokazano na filmie (procedura identyczna z operacją dawcy)).</li>
 <li>Założyć podwiązkę 7-0 wokół wspólnego przewodu żółciowego, tuż poniżej miejsca jego podziału. Założyć kolejną podwiązkę jeden milimetr niżej i przeciąć w międzyczasie.</li>
 <li>Wyizolować tętnicę wątrobową w obrębie wnęki i przeciąć ją między podwiązkami 7-0.</li>
 <li>Delikatnie rozdzielić lewą i prawą gałąź wrotna. Należy uważać, aby nie uszkodzić wspólnej tętnicy wątrobowej ani żyły żołądkowo-śledzionowej.</li>
 <li>Umieścić pierścień kawalny wokół żyły głównej dolnej, szyjnie w stosunku do prawej żyły nerkowej. Następnie przymocować ścianę naczynia do pierścienia, zakładając cztery główne szwy 9-0.</li>
 <li>Powtórzyć tę samą operację z pierścieniem wrotnym na żyle wrotnej.</li>
 <li>Wstrzyknąć 10 UI heparyny, rozcieńczonej w 1 ml soli fizjologicznej, przez żyłę grzbietową prącia.</li>
 <li>Ustawić narkozę na poziomie 0,25% oraz FiO2 na 100%.</li>
 <li>Zacisnąć klemą żyłę główną dolną poniżej wątroby, tuż nad prawą żyłą nerkową, następnie zacisnąć żyłę wrotną tuż nad żyłą żołądkowo-śledzionową. Na koniec zacisnąć żyłę główną nad wątrobą, upewniając się, że objęto co najmniej 2 mm przepony.</li>
 <li>Przeciąć żyłę główną nad wątrobą blisko miąższu.</li>
 <li>Przeciąć lewą i prawą gałąź wrotną i rozdzielić znajdującą się między nimi przegrodę.</li>
 <li>Przeciąć żyłę główną dolną poniżej wątroby blisko miąższu, uważając, aby nie przeciąć żadnego z wcześniej założonych szwów. Usunąć wątrobę i umieścić przeszczep w jamie brzusznej.</li>
 <li>Wykonać anastomozę koniec-do-końca między żyłą główną nad wątrobą przeszczepu a biorcy. Rozpocząć od szwu ciągłego tylnej ściany od lewej do prawej, a następnie przejść do ściany przedniej od prawej do lewej. Pozostawić szew przedni luźny aż do końca, aby umożliwić dokładne przepłukanie wnętrza światła przed ściągnięciem końców.</li>
 <li>Wsunąć gałąź szyjną aproksymatora do uchwytu pierścienia wrotnego; następnie wsunąć żyłę wrotną przeszczepu w szczelinę gałęzi głowicowej aproksymatora, tak aby mankiet wrotny znalazł się w gnieździe.</li>
 <li>Zamknąć aproksymator, jednocześnie przepłukując żyłę wrotną biorcy solą fizjologiczną i pozwalając mankietowi wsunąć się do naczynia. Zabezpieczyć żyłę wrotną biorcy wokół mankietu okrężną podwiązką 7-0.</li>
 <li>Usunąć aproksymator. Otworzyć klemę na żyle głównej nad wątrobą i na żyle wrotnej w tej kolejności: przepływ wrotny zostaje przywrócony.</li>
 <li>Usunąć pierścień wrotny, przecinając podwiązki 9-0 za pomocą mikronożyczek.</li>
 <li>Wsunąć gałąź szyjną aproksymatora do uchwytu pierścienia kawalnego; następnie wsunąć żyłę główną dolną poniżej wątroby przeszczepu w szczelinę gałęzi głowicowej aproksymatora, tak aby mankiet kawalny znalazł się w gnieździe.</li>
 <li>Zamknąć aproksymator, jednocześnie przepłukując żyłę główną dolną biorcy solą fizjologiczną i pozwalając mankietowi wsunąć się do naczynia. Zabezpieczyć żyłę główną biorcy wokół mankietu okrężną podwiązką 7-0.</li>
 <li>Usunąć aproksymator. Otworzyć mikroklemami żyłę główną dolną poniżej wątroby przeszczepu i biorcy w tej kolejności: przepływ żylny zostaje przywrócony.</li>
 <li>Wykonać częściowe nacięcie wspólnego przewodu żółciowego biorcy, zastosować delikatny naciąg w stronę głowy i wsunąć wolny koniec stentu wcześniej wprowadzonego do przewodu żółciowego przeszczepu. Zabezpieczyć stent okrężną podwiązką 7-0.</li>
 <li>Zamknąć zwierzę warstwowo szwami 5-0. Po przebudzeniu zapewnić swobodny dostęp do wody i pożywienia.</li>
 <li>Zastosować skuteczne leki przeciwbólowe zgodnie z lokalnymi protokołami instytucjonalnymi. Zalecany minimalny czas podawania to 24 h.</li>
</ol>
Należy zauważyć, że w przypadku gdy wymaga tego projekt eksperymentalny, można przeprowadzić zespolenie tętnicy wątrobowej koniec do końca (tętnica ta nie jest niezbędna do przeżycia szczura w długim okresie po transplantacji wątroby).
4. Reprezentatywne wyniki
Opisana technika została z sukcesem opanowana przez nasz zespół po około 10 zabiegach treningowych. Pozwoliło to na 100% długoterminową (&gt;21 dni) przeżywalność w 36 kolejnych transplantacjach od szczurów Lewis do Lewis oraz od szczurów Dark Agouti do Lewis po krótkim okresie treningowym (liczba biorców syngeneicznych przeszczepów wątroby pozostaje żywa od ponad 12 miesięcy). Testy funkcji wątroby w 1. dobie po transplantacji syngeneicznej wykazały medianę aminotransferazy asparaginianowej (AST): 84 U/l (51,7 - 92,7) oraz medianę aminotransferazy alaninowej (ALT): 172,5 U/l (127,5 - 240,2). Średni czas fazy anhepatycznej (od zaklemowania vena porta do reperfuzji przeszczepu) wynosił 14 ±2 min, a najdłuższym etapem był czas wykonania anastomozy żyły głównej dolnej nad wątrobą (szew ciągły), który wynosił 9±2 min.
System szybkich łączników (quick-linker) umożliwił zastosowanie mankietów o średnicy 1,55 mm na żyle wrotnej (vena porta) oraz mankietów o średnicy 2,40 mm na żyle głównej (vena cava) (odbiorcy o masie 200 ±20 g). W przeciwieństwie do tego, podczas prób przeszczepiania przy użyciu techniki Kamady, wartości te nie mogły przekroczyć odpowiednio 1,40 mm i 2,16 mm (szczury o tej samej linii i masie). Jak pokazano na Rysunku 7, pierścienie szybkich łączników są zaprojektowane tak, aby utrzymać naczynia odbiorcy w optymalnym rozciągnięciu, co pozwala zminimalizować straty w kalibrze i długości, a w konsekwencji prowadzi do uzyskania wyników hemodynamicznych bardziej zbliżonych do fizjologicznych.
<img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig1.jpg" alt="Miniaturowe zaciski naczyniowe z wymiarami, porównanie wielkości z monetą, stosowane w procedurach chirurgicznych." data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1. Wymiary pierścieni.
<img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig2.jpg" alt="Mikroklempy i narzędzie aplikacyjne do precyzyjnego zaciskania w procedurach chirurgicznych lub laboratoryjnych." data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2. Wymiary mikroklemp.
<img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig3.jpg" alt="Schemat instrumentów chirurgicznych; kleszczyki hemostatyczne i małe metalowe sprężyny do badania sprzętu medycznego." data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rycina 3"> 
Rycina 3. Zestaw szybkozłączek.
<img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig4.jpg" alt="Narzędzie chirurgiczne z widocznym instrumentem do szycia, konfiguracja sprzętu medycznego, widok z bliska." data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rycina 4"> 
Rycina 4. Uzbrojony szybki łącznik (quick-linker).
<img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig5.jpg" alt="Narzędzie chirurgiczne, kleszczyki hemostatyczne na teksturowanej powierzchni; używane do zaciskania w procedurach medycznych." data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rysunek 5"> 
Rysunek 5. Zamknięty szybki łącznik (quick-linker).
<img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig6.jpg" alt="Schemat równowagi statycznej z zestawem zacisku na platformie z pianki, zacisk SHVC." data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rycina 6"> 
Rycina 6. Zacisk SHVC.
<img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig7.jpg" alt="Schemat porównujący techniki mankietowe; przepływ turbulentny, przestrzeń martwa w anastomozie naczyniowej." data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rysunek 7"> 
Rysunek 7. Hemodynamika anastomozy mankietowej wykonanej metodą klasyczną oraz przy użyciu łącznika szybkosprzęgalnego (quick-linker).
<img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig8.jpg" alt="Procedura przeszczepu skóry szczura; zaznaczony dawca i biorca; eksperyment nad techniką szczepienia." data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Rysunek 8"> 
Rysunek 8. Przygotowanie skóry dawcy i biorcy oraz nacięcie.

<ol><li>Starzl, T. E., Marchioro, T. L., Porter, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+and+clinical+observation+after+homotransplantation+of+the+whole+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Revue+internationale+d%27hepatologie%22%5BJournal%5D)">Experimental and clinical observation after homotransplantation of the whole liver.</a> Revue internationale d'hepatologie. 15, 1447(1965).</li>
<li>Starzl, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Evolution of liver transplantation.</a> Hepatology. 2, 614S-636S (1982).</li>
<li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Technique+using+cuff+for+portal+vein+anastomosis+and+biliary+drainage%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage.</a> Transplantation. 28, 47(1979).</li>
<li>Kashfi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+various+techniques+of+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+proceedings%22%5BJournal%5D)">A review of various techniques of orthotopic liver transplantation in the rat.</a> Transplantation proceedings. 37, 185-188 (2005).</li>
<li>Hori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+and+innovative+techniques+for+liver+transplantation+in+rats%3A+A+surgical+guide%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%3A+WJG%22%5BJournal%5D)">Comprehensive and innovative techniques for liver transplantation in rats: A surgical guide.</a> World Journal of Gastroenterology: WJG. 16, 3120(2010).</li>
<li>Oldani, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+rat+liver+transplantation+using+Quick+Linker+system%3A+a+preliminary+result%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">A novel technique for rat liver transplantation using Quick Linker system: a preliminary result.</a> Journal of Surgical Research. 149, 303-309 (2008).</li>
<li>Nosaka, T., Bowers, J. L., Cay, O., Clouse, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biliary+complications+after+orthotopic+liver+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Surg.+Today%22%5BJournal%5D)">Biliary complications after orthotopic liver transplantation in rats.</a> Surg. Today. 29, 963-965 (1999).</li>
<li>Li, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+incidence+of+biliary+complications+in+rat+liver+transplantation%3A+can+we+avoid+it%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">High incidence of biliary complications in rat liver transplantation: can we avoid it.</a> World J. Gastroenterol. 17, 3140-3144 (2011).</li>
<li>Peng, Y., Gong, J. P., Yan, L. N., Li, S. B., Li, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+two-cuff+technique+for+orthotopic+liver+transplantation+in+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatobiliary+Pancreat.+Dis.+Int%22%5BJournal%5D)">Improved two-cuff technique for orthotopic liver transplantation in rat.</a> Hepatobiliary Pancreat. Dis. Int. 3, 33-37 (2004).</li>
<li>Urata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+survival+in+rat+liver+transplantation+with+extended+cold+preservation%3A+role+of+portal+vein+clamping+time%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Decreased survival in rat liver transplantation with extended cold preservation: role of portal vein clamping time.</a> Hepatology. 28, 366-373 (1998).</li>
</ol>

Nie zadeklarowano żadnych konfliktów interesów.

Przedstawiony model transplantacji wątroby szczura można łatwo wprowadzić. Z naszego doświadczenia wynika, że kilka kluczowych punktów pomaga zminimalizować ryzyko śmierci (≤20%). Wczesne zgony, następujące w ciągu pierwszych trzech godzin od reperfuzji, najczęściej wynikają z zawału jelit będącego następstwem długotrwałego zaklemowania żyły wrotnej. Zaleca się zatem utrzymanie fazy anhepatycznej w optymalnym limicie 15 minut (do 20 minut jest wciąż dopuszczalne). Przyczyną nagłej śmierci może być również centralna zatorowość powietrzna, dlatego obowiązkowe jest przepłukanie wszystkich żył przed wykonaniem anastomozy.
Zgony występujące między pierwszym a trzecim dniem po operacji są często wynikiem niewydolności wątroby lub zakrzepicy żyły głównej. Należy zatem unikać agresywnego płukania przeszczepu przed eksplantacją u dawcy (płuczemy 20 ml przez około 60 sekund) i zapewnić odpowiednią konserwację w niskiej temperaturze (pełne zanurzenie w roztworze mleczanu Ringera o temperaturze 0-4 °C). Ryzyko zakrzepicy można zmniejszyć poprzez ograniczenie manipulacji w obrębie wewnętrznej błony naczyń i zachowanie jej nienaruszonej struktury. Nie zalecamy stosowania leków przeciwkrzepliwych po operacji.
Zgony między czwartym a dziewiątym dniem po operacji często są związane z bakteryjnym zapaleniem dróg żółciowych7. W oparciu o nasze doświadczenie, pojedyncza dawka piperacyliny z tazobaktamem (0,03 g) podana przed laparotomią jest wystarczająca, aby zminimalizować ryzyko zakażenia przewodu żółciowego wspólnego.
Zgon jest rzadkim zdarzeniem po 10. dniu. Jednakże, ze względu na brak przepływu tętniczego, mogą wystąpić problemy z drogami żółciowymi z cholestazą8. W zależności od potrzeb badacza można rozważyć tętnicową rekonstrukcję9. Warto zauważyć, że czas zimnego niedokrwienia do 24 godzin można uznać za dopuszczalny10.
System quick-linker został pierwotnie zaprojektowany do przeprowadzania przeszczepienia wątroby z trzema anastomosami mankietowymi (bardzo krótka faza anhepatyczna). Jednak technika trzech mankietów wymaga użycia bardzo małych zacisków dla mankietu żyły głównej górnej (SHVC) i nie zyskała szerokiego uznania ze względu na ryzyko problemów z odpływem krwi z wątroby11-14. Dlatego preferujemy technikę trzech mankietów wspomaganą systemem quick-linker tylko wtedy, gdy wymagany jest czas ciepłego niedokrwienia krótszy niż dziesięć minut. W większości badań jednak dopuszczalne są fazy implantacji trwające do 15-18 minut, co pozwala na zastosowanie techniki dwóch mankietów i bardziej fizjologiczny drenaż SHVC. Jak pokazano w tym filmie, rutynowo stosujemy system quick-linker tylko w drugiej części implantacji. Chociaż pozycjonowanie uchwytów quick-linkera wymaga dodatkowego czasu chirurgicznego, ta część procedury wiąże się z minimalnym ryzykiem i pozwala na skrócenie krytycznej fazy anhepatycznej dzięki łatwiejszemu wprowadzaniu mankietów. Innymi zaletami systemu quick-linker są lepsze dopasowanie naczyń przeszczepu i biorcy oraz możliwość zastosowania szerszych mankietów z lepszymi efektami hemodynamicznymi w porównaniu do wcześniej opisanych technik (w tym techniki opisanej przez Kamada et al.)6(Rys. 7).

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt; Narzędzie / Odczynnik&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt; Firma&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt; Nr katalogowy&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt; Komentarz&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Mankiet wrotny</td><td> &lt;a href=&quot;http://altecweb.com&quot; target=&quot;_blank">altecweb.com&lt;/a&gt; lub &lt;a href=&quot;http://smiths-medical.com&quot; target=&quot;_blank">smiths-medical.com&lt;/a&gt;</td><td> Coil 01-96-1729 800/100/420</td><td> Śwred: 1.55mm &lt;br/&gt; Ścianka: 0.30mm &lt;br/&gt; Długość: 3.5 mm</td></tr><tr><td>Mankiet żyły głównej dolnej w odcinku podwątrobowym</td><td> &lt;a href=&quot;http://altecweb.com&quot; target=&quot;_blank">altecweb.com&lt;/a&gt; lub &lt;a href=&quot;http://smiths-medical.com&quot; target=&quot;_blank">smiths-medical.com&lt;/a&gt;</td><td> Coil 01-96-1733 800/100/540</td><td> Śwred: 2.40mm &lt;br/&gt; Ścianka: 0.30mm &lt;br/&gt; Długość: 3.5 mm</td></tr><tr><td>Stent przewodu żółciowego wspólnego</td><td>standardowy kaniule Venflon 22G</td><td>&amp;nbsp;</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>nici jedwabne 7-0</td><td>&lt;a href=&quot;http://georgetiemann.com&quot; target=&quot;_blank">georgetiemann.com&lt;/a&gt;</td><td>160-1226-7/0</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>prolene 10-0</td><td>&lt;a href=&quot;http://ethicon.com&quot; target=&quot;_blank">ethicon.com&lt;/a&gt;</td><td>&amp;nbsp;</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>prolene 9-0</td><td>&lt;a href=&quot;http://ethicon.com&quot; target=&quot;_blank">ethicon.com&lt;/a&gt;</td><td>&amp;nbsp;</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>prolene 8-0</td><td>&lt;a href=&quot;http://ethicon.com&quot; target=&quot;_blank">ethicon.com&lt;/a&gt;</td><td>&amp;nbsp;</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Prosta mikropinceta</td><td>s-and-t.net</td><td>FRC-15RM-8 </td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Zakrzywiona mikropinceta</td><td>s-and-t.net</td><td>FRS-15-RM-8 </td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Portiklica do preparowania tkanek</td><td>s-and-t.net</td><td>B-15-8.2 </td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Portiklica do anastomoz</td><td>rumex.net</td><td>8-021T</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Mikrokleszcze</td><td>&lt;a href=&quot;http://finescience.com&quot; target=&quot;_blank">finescience.com&lt;/a&gt;</td><td>18055-03</td><td>6 x 1mm</td></tr><tr><td>Aplikator do mikrokleszczy</td><td>&lt;a href=&quot;http://finescience.com&quot; target=&quot;_blank">finescience.com&lt;/a&gt;</td><td>18057-14</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Kleszcze do żyły głównej dolnej w odcinku nadwątrobowym</td><td>&lt;a href=&quot;http://pharmap.ch&quot; target=&quot;_blank">pharmap.ch&lt;/a&gt;</td><td>13.349.14</td><td>&amp;nbsp;</td></tr><tr><td> Pierścienie Quick-Linker</td><td> &lt;a href=&quot;http://dltchiropody.co.uk&quot; target=&quot;_blank">dltchiropody.co.uk&lt;/a&gt;</td><td> PAR 10</td><td> zmodyfikowane ostrza skalpela</td></tr><tr><td> Aproksymator Quick-Linker</td><td>pharmap.ch</td><td> UD-04-275</td><td> zmodyfikowana kleszczyka Kochera&amp;rsquo;</td></tr></tbody></table>

ortotopowa transplantacja wątroby u szczurów

Orthotopic Liver Transplantation in Rats

Postępy kliniczne w dziedzinie transplantacji wątroby były w dużej mierze wspierane przez modele zwierzęce1,2. Od czasu publikacji pierwszej ortotopowej transplantacji wątroby szczura w 1979 roku przez Kamadę et al.3, model ten pozostaje złotym standardem, pomimo różnych proponowanych technik alternatywnych4. Niemniej jednak jego szersze zastosowanie jest ograniczone przez trudny proces nauki tej metody5.
W niniejszym artykule wideo przedstawiamy prostą i łatwą do wdrożenia modyfikację techniki dwóch mankietów Kamady. Anastomoza żyły głównej górnej nadwątrobowej jest wykonywana ręcznie za pomocą szwu ciągłego, natomiast anastomozy żyły wrotnej oraz żyły głównej dolnej podwątrobowej są realizowane przy użyciu systemu mankietów typu quick-linker6. Sposób wykonania zestawu quick-linker został zaprezentowany w oddzielnym artykule wideo.

Przedstawiamy łatwą do wdrożenia modyfikację klasycznej techniki dwóch mankietów stosowanej w ortotopowym przeszczepieniu wątroby u szczura.

Ortotopowa transplantacja wątroby u szczurów

Postępy kliniczne w dziedzinie transplantacji wątroby były w dużej mierze wspierane przez modele zwierzęce1,2. Od czasu publikacji pierwszego ortotopowego przeszczepu u szczura...

Ortotopowa transplantacja wątroby u szczura jest wymagającym zabiegiem i wymaga przeszkolenia z zakresu mikrochirurgii płuc, aby w pełni opanować tę technikę. Precyzja i szybkość, szczególnie w fazie implantacji, są kluczami do sukcesu. W następnych filmach przedstawimy każdy podstawowy krok prowadzący do udanej transplantacji oraz wyjaśnimy, w jaki sposób szybkie urządzenie kliniczne może ułatwić fazę implantacji.Zapraszamy do oglądania filmów. Darczyńca zostaje otwarty poprzez nacięcie poprzeczne. Przecięto więzadło sierpowate i odsłonięto dolną część żyły głównej dolnej.Lewą żyłę przeponową odseparowano od żyły głównej, a następnie przecięto pomiędzy podwiązkami z jedwabiu 7-0. Przecięto więzadło kostno-osteopatyczne, a następnie przecięto więzadło przełykowe pomiędzy podwiązkami. Żyła główna dolna została odsłonięta poprzez delikatne odsuniecie jelita cienkiego i grubego.Po lewej stronie otwiera się otrzewną i delikatnie uwalnia żyłę główną dolną z otaczających tkanek. Izoluje się prawą żyłę nadnerczową, a następnie przecina ją pomiędzy siedmioma podwiązkami. Wątrobę odsuwa się na lewą stronę i delikatnie utrzymuje w trakcji.Przecina się więzadła tylne wątroby oraz prawe więzadło trójkątne. Prawą żyłę nerkową podwiązuje się na końcu proksymalnym za pomocą nici nylonowej 10-0. Prawą żyłę i tętnicę nerkową podwiązuje się razem na ich końcach dystalnych, a następnie prawą żyłę nerkową przecina się.Przedstawiono przekrój całkowicie wyizolowanej żyły głównej dolnej. Przekrój regionalnej anatomii wnęki wątrobowej i żyły wrotnej, własnej tętnicy wątrobowej, wspólnego przewodu żółciowego i żyły żołądkowo-śledzionowej. Trzustka.Żyłę żołądkowo-śledzionową izoluje się i przecina pomiędzy wiązaniami 10-0 i 7-0. Górną tętnicę wątrobową przecina się pomiędzy wiązaniami 7-0. Na koniec przecina się żyłę trzustkową.Przedstawiono przekrój izolowanej żyły wrotnej. Przewód żółciowy wspólny jest częściowo otwarty w miejscu połączenia z tkanką trzustki. Wprowadzono i mocno zabezpieczono stent 22 G o średnicy 3,5 milimetra.Wstrzykuje się 10 jednostek heparyny. Następnie wątrobę płucze się przez żyłę wrotną 20 ml schłodzonego roztworu Ringer-lactate, podczas gdy nacięto dolną żyłę główną, aby zapewnić odpowiedni odpływ; żyłę wrotną przecina się na jej dystalnym końcu, a następnie przeprowadza sekcję wspólnego przewodu żółciowego. Następnie przecina się dolną żyłę główną w jej dystalnej części oraz żyłę główną powyżej wątroby, przecinając ją aż do przepony, która zostaje usunięta i zanurzona w roztworze Ringer-lactate o temperaturze 4°C.Żyłę główną wątrobową wprowadzono do jej końcowego odcinka, następnie odsunięto, aby odsłonić błonę wewnętrzną, a na koniec przymocowano do końcowego odcinka za pomocą nici 7-0. Analogicznie postąpiono z końcowym odcinkiem żyły głównej dolnej. Mikroklem colocado na najbardziej kranialnej części końcowego odcinka żyły głównej dolnej.Wątrobę odchylono i wykonano dwa szwy z prolenu ATO w przeciwległych krawędziach bocznych żyły głównej dolnej, przechodząc od zewnątrz do wewnątrz. Biorcę utrzymywano w znieczuleniu izofluranem na podgrzewanej macie. Podskórnie wstrzyknięto 10 mililitrów fizjologicznej soli przed laparotomią. Wykonano cięcie w linii środkowej nad spojkowiem, a macicę odgięto w celu lepszego odsłonięcia wątroby.Przewód wspólny jest zabezpieczony opaską zaciskową i przecinany tuż przed jego rozdziałem na lewy i prawy. Gałęzie wrotne są precyzyjnie oddzielane. Pierścień kawalny zostaje umieszczony wokół żyły głównej dolnej, kranialnie w stosunku do lewej żyły nerkowej.Pierwszy szew typu „nine-oh” przechodzi przez ścianę naczynia po jego prawej krawędzi, a następnie zostaje przymocowany do pierścienia kawalnego w wcześniej wyznaczonej pozycji. Drugi szew przechodzi przez przeciwległą krawędź i zostaje przymocowany. Trzeci szew zostaje przymocowany w pozycji brzusznej.Na koniec czwarty element zostaje zabezpieczony w pozycji grzbietowej. Po odwróceniu pierścienia po lewej stronie, pierwszy szew zostaje przeprowadzony przez ścianę tylną poprzez uniesienie naczynia. Następnie pozycjonuje się pierścień wrotny i zabezpiecza wiązanie do jego tylnej gałęzi.Drugi szew przeprowadzono przez krawędź lewej gałęzi wrotnej i zabezpieczono, a trzeci przymocowano do krawędzi prawej gałęzi. Następnie go zabezpieczono. Ostatni szew przebija przednią ścianę wroty i zostaje unieruchomiony w odpowiedniej pozycji przed założeniem zacisków.Przeprowadza się końcowe oczyszczenie żyły głównej dolnej w obrębie Vena cava, a następnie kolejno zakłada się zaciski na żyłę główną dolną i żyłę wrotną. Następnie żyłę główną dolną zaciska się i nacinając wzdłuż miąższu. Przecina się lewą i prawą gałąź wrotną, a przegrodę między nimi rozdziela; żyłę główną dolną przecina się wzdłuż miąższu. Następnie usuwa się wątrobę.Żyła główna dolna i żyła wrotna pozostają bezpiecznie otwarte dzięki dwóm pierścieniom. Przeszczep jest umieszczony w jamie brzusznej, a szew NATO zostaje przymocowany do lewej krawędzi żyły głównej dolnej. Drugi szew zostaje przymocowany do prawej krawędzi.Szycie ściany tylnej metodą irańską wykonuje się od lewej do prawej strony, aby nie włączyć miąższu wątroby w szew. Szycie ściany przedniej pozostawia się luźne, aby umożliwić dokładne przepłukanie przed całkowitym zamknięciem. Manewr ten zapobiega embolii powietrznej.Odnoże pomocnicze aproksymatora zostaje wprowadzone do uchwytu pierścienia portalnego, a łydka portalna zostaje wprowadzona przez szczelinę jego odnoża czaszkowego. Żyła główna odbiorcy jest płukana solą fizjologiczną podczas zamykania aproksymatora. Aby wspomóc wprowadzenie łydki, żyła Portera odbiorcy zostaje zabezpieczona do łydki za pomocą szwu 7-0.Aproksymator zostaje usunięty, a przepływ w kanale krtaniowym przywrócony poprzez kolejno usunięcie zacisku Atic VNA CVA oraz zacisku portalnego; pierścień portalny zostaje usunięty poprzez przecięcie. Nano-ligatury są jednak przywracane przy użyciu tej samej techniki odbiorczej. Przewód żółciowy wspólny jest utrzymywany w trakcji, a stent zostaje wprowadzony przez niewielkie nacięcie.Położenie jest stabilizowane za pomocą okrężnej ligatury. Przegląd zrośniętego przeszczepu przedstawiono na rys. a.

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Przeszczepienie wątroby ortotopowe na szczurach

Ortotopowe przeszczepienie wątroby u szczurów jest niezbędnym modelem eksperymentalnym w badaniach biomedycznych. W niniejszym materiale przedstawiamy procedury chirurgiczne ortotopowego przeszczepienia wątroby szczura z rekonstrukcją tętnicy wątrobowej z wykorzystaniem 50% częściowego graftu.

Procedury chirurgiczne w szczurzym modelu częściowego ortotopowego przeszczepu wątroby z rekonstrukcją tętnicy wątrobowej

Opisujemy projekt urządzenia "quick-linker" dla łatwiejszego ortotopowego przeszczepu wątroby szczura.

Produkcja urządzeń i przyrządów ułatwiających przeszczep wątroby szczura

Pomocniczy przeszczep wątroby zapewnia tymczasowe wsparcie w ostrej niewydolności wątroby, aż do regeneracji niewydolnej wątroby. Heterotopowy pomocniczy przeszczep wątroby (HALT) z tętnicą żyły wrotnej (PVA) zapewnia wystarczającą czynność wątroby. Opracowaliśmy analogiczną technikę na szczurach, aby zbadać wpływ tętnicy żyły wrotnej na morfologię i funkcję przeszczepu.

Heterotopowe pomocnicze przeszczepienie wątroby szczura z tętnicą żyły wrotnej o regulowanym przepływie w ostrej niewydolności wątroby

Tutaj przedstawiono protokół polegający na ponownym przeszczepieniu wątroby szczurowi. W szczególności 70% wątroby wycięto in vivo przy użyciu zaktualizowanej techniki hepatektomii zorientowanej na naczynia. Tętnicę wątrobową zrekonstruowano w sposób end-to-side. Technika mankietu została zmodyfikowana w celu skrócenia czasu zespolenia żyły podwątrobowej głównej.

Ponownie zarteryalizowany częściowy przeszczep wątroby szczura z 70% hepatektomią in vivo zorientowaną na naczynia

Rekonstrukcja żyły głównej nadwątrobowej (SHVC) pozostaje trudnym krokiem w ortotopowym przeszczepie wątroby u szczurów. W tym artykule przedstawiamy krok po kroku protokół rekonstrukcji SHVC u szczurów przy użyciu nowatorskiej techniki zespolenia magnetycznego.

Szczurzy model ortotopowego przeszczepu wątroby z wykorzystaniem nowatorskiej techniki zespolenia magnetycznego do rekonstrukcji żyły głównej nadwątrobowej

Celem tego badania jest modyfikacja modelu ortotopowego przeszczepu wątroby u szczurów, aby lepiej reprezentowała przeszczep wątroby u człowieka i poprawiła przeżywalność biorców. Przedstawiona metoda przywraca dopływ tętniczy wątrobowej poprzez połączenie wspólnej tętnicy wątrobowej wątroby dawcy z właściwą tętnicą wątrobową biorcy.

Zmniejszone powikłania po ponownym połączeniu tętnic w szczurzym modelu ortotopowego przeszczepu wątroby

Ten artykuł zawiera szczegółowy opis, jak zbudować zwierzęcy model fazy anhepatycznej (niedokrwienie wątroby) u szczurów, aby ułatwić podstawowe badania nad uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym po przeszczepie wątroby.

Uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne narządów poprzez symulację zmian hemodynamicznych w modelu przeszczepu wątroby szczura

W tym protokole omawiamy implementację modelu udanego ortotopowego przeszczepu wątroby (OLT) u myszy. Dodatkowo omówiono adiuwanty do dalszej analizy drożności przeszczepu allogenicznego po udanym OLT u myszy, w szczególności z wykorzystaniem skanów tomografii mikrokomputerowej (microCT).

Udany ortotopowy przeszczep wątroby u myszy z wykorzystaniem angiografii tomografii mikrokomputerowej

Opisany tutaj protokół heterotopowego pomocniczego przeszczepu wątroby u szczurów stanowi praktyczne narzędzie badawcze do badania mechanizmów odrzucania alloprzeszczepu wątrobowego. Model ten pomaga złagodzić przeszkody chirurgiczne i stres zwierząt związany z ortotopowym przeszczepem wątroby u szczurów.

Heterotopowy pomocniczy model przeszczepu szczura całej wątroby z wykorzystaniem hepaticoureterostomii do badań odrzucenia przeszczepu allogenicznego

Protokół ten opisuje ulepszoną technikę ortotopowego przeszczepu lewego płuca u szczurów, koncentrując się na zmniejszeniu trudności operacyjnych i poprawie wskaźników przeżycia.

Ortotopowy przeszczep lewego płuca u szczurów

Poznaj zmodyfikowaną technikę ortotopowego przeszczepu wątroby u szczurów, obejmującą izolację naczyń i anastomozę żył wrotnej oraz górnej. Metoda poprawia efektywność implantacji i służy jako narzędzie szkoleniowe w mikrochirurgii.

Ortotopowa transplantacja wątroby u szczurów

Przeglądaj więcej filmów