Name: Inżynieria tkankowa jelita w modelu mysim (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 45 s
Description: Naucz się techniki inżynierii tkankowej jelita cienkiego u myszy z wykorzystaniem podejścia jednostek organoidów na rusztowaniu. Ta metoda umożliwia generowanie funkcjonalnych tkanek jelitowych do zastosowań w medycynie regeneracyjnej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Tracy C. Grikscheit, Erik R. Barthel i Frédéric G. Sala otrzymali wsparcie z California Institute for Regenerative Medicine (CIRM), granty numery RN2-00946-1 (TCG) oraz TG2-01168 (ERB, FGS). Allison L. Speer jest stypendystką Society of University Surgeons Ethicon. Yashuhiro Torashima jest finansowany z Children's Hospital Los Angeles Saban Institute Research Career Development Fellowship.

1. Przygotowanie jednostek organoidalnych
<ol>
 <li>Narzędzia odpowiednie do sekcji myszy (nożyczki i pęsety) należy wysterylizować w autoklawie.</li>
 <li>Przeprowadź humanitarną eutanazję myszy dawcy zgodnie z lokalnymi protokołami IACUC. Przed kontynuowaniem upewnij się, że zwierzę nie żyje.</li>
 <li>Wykonaj nacięcie w linii środkowej, aby uzyskać dostęp do jamy otrzewnej. W razie potrzeby można odchylić płaty skóry, aby poprawić widoczność.</li>
 <li>Wyciśnij jelito cienkie i przetnij je tuż za więzadłem Treitza. Oddziel jelito cienkie od jego krezki, stosując ostrą i delikatną rozdzielczą technikę tępego rozdzielania. Zidentyfikuj połączenie kątniczo-jądrzowe i przetnij jelito cienkie 5 mm proksymalnie od tego miejsca.</li>
 <li>Za pomocą nożyczek otwórz jelito wzdłuż krawędzi antykrezkowej w szalce Petriego zawierającej 10 ml sterylnego, schłodzonego do 4 °C roztworu soli Hanksa (HBSS, Invitrogen, Carlsbad CA) / 1X roztworu antybiotyków i przeciwgrzybicznych (Anti-Anti, Invitrogen). Usuń masę kałową z otwartego jelita poprzez delikatne wstrząsanie, a następnie przenieś otwarte jelito do probówki wirówkowej o pojemności 15 ml z 10 ml sterylnego HBSS / 1X anti-anti w temperaturze 4 °C.</li>
 <li>Umyj otwarte jelito trzykrotnie w 10 ml sterylnego HBSS / 1X anti-anti w temperaturze 4 °C w probówce. Każde płukanie można przeprowadzić, delikatnie wstrząsając probówką 15 ml przez 30 s. Po wstrząsaniu tkanka jelitowa opada na dno probówki. Usuń pływający materiał, który stanowi resztki mezenchymy. Ostrożnie odessij roztwór płuczący za pomocą pipety.</li>
 <li>Posiekaj wypłukane jelito w szalce Petriego z 10 ml sterylnego HBSS / 1X anti-anti w temperaturze 4 °C na kawałki o wielkości mniejszej niż 1 mm² za pomocą nożyczek. Zbierz posiekany materiał automatyczną pipetą i umieść go w probówce.</li>
 <li>Wirować probówkę przy 500 rpm przez 8 min. Odlej nadsącz, który zawiera tłuszcz i mezenchymę.</li>
 <li>Przetraw posiekany i wypłukany materiał w 10 ml sterylnego HBSS / 1X anti-anti z dodatkiem 0,125 mg/ml dyspazy (Invitrogen) i 800 jednostek/ml kolagenazy typu 1 (Worthington, Lakewood NJ). Aby przygotować 40 ml roztworu trawiennego, odważ 5 mg dyspazy, 142 mg kolagenazy i dodaj sterylny HBSS do uzyskania objętości 40 ml. Roztwór ten należy przygotowywać świeżo przy każdym przygotowywaniu jednostek organoidów i przechowywać w temperaturze 4 °C do momentu użycia. Dodaj roztwór trawienny bezpośrednio do osadu z kroku 1.8.</li>
 <li>Inkubuj probówkę zawierającą posiekany i wypłukany materiał z roztworem trawiennym w temperaturze 37 °C przez 20 min.</li>
 <li>Wyjmij probówkę i dalej rozdrabniaj przetrawioną tkankę poprzez tryturację pipetą 10 ml. Powtarzaj czynność od 20 do 50 razy, aż do uzyskania jednorodnego wyglądu.</li>
 <li>Wirować probówkę przez 5 min przy 800 rpm. Odlej nadsącz, który zawiera pojedyncze komórki.</li>
 <li>Zatrzymaj reakcję trawienia, dodając 10 ml sterylnego, schłodzonego do 4 °C podłoża DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium, Invitrogen) z dodatkiem 10% v/v inaktywowanej termicznie płodowej surowicy bydlęcej (HI-FBS, Invitrogen). Resuspenduj osad i wstrząśnij probówką.</li>
 <li>Wirować probówkę przez 5 min przy 800 rpm. Ostrożnie usuń nadsącz automatyczną pipetą, aż do ostatnich kilku kropli. Do usunięcia ostatnich kilku kropli użyj jednorazowej plastikowej pipety, aby uniknąć ponownego zawieszenia osadu.</li>
</ol>
2. Obciążanie rusztowania z kwasu poliglikolowego
<ol>
 <li>Przygotować cylindryczne rusztowania o długości 2 mm i średnicy zewnętrznej 5 mm z niewiązanego kwasu poliglikolowego (grubość arkusza 2 mm, gęstość objętościowa 60 mg cm-3; porowatość &gt; 95%, Concordia Fibers, Coventry RI) zgodnie z opisem w Ref. 4. </li>
 <li>Odciąć nożyczkami, zdezynfekowanymi 70% etanolem w wodzie destylowanej, końcowe 2 mm jednorazowego końcówki do pipety o pojemności 1000 microliter. </li>
 <li>Umieścić rusztowanie w 4-dołkowej płytce hodowlanej. Za pomocą pipety o pojemności 1000 microliter nanieść jednostki organoidów na rusztowanie, najpierw do światła, a następnie na powierzchnię zewnętrzną. Użyć pęsety, aby zapewnić pokrycie światła. Nie naruszać ani nie rozrywać cylindrycznego kształtu polimeru. </li>
</ol>
3. Implantacja do myszy biorcy
<ol>
 <li>W razie możliwości należy użyć syngenicznego myszego gospodarza o tym samym tle genetycznym co dawca. W przeciwnym razie należy zastosować zwierzę z niedoborem odporności typu NOD/SCID (nonobese diabetic / severe combined immunodeficient) (Jackson Laboratories, Sacramento CA).</li>
 <li>Zastosować znieczulenie ogólne izofluranem. Ogolić, przygotować i obłożyć sterylną ściereczką brzuch myszy.</li>
 <li>Wyonać nacięcie w linii środkowej o długości 5 mm, aby uzyskać dostęp do jamy otrzewnej. Zlokalizować i ostrożnie wyciągnąć sieciówkę większą. Umieścić załadowany polimer na sieciówce i owinąć go tkanką. Należy unikać przerwania ciągłości sieciówki.</li>
 <li>Przymocować polimer do sieciówki szwem monocryl 5-0. Delikatnie umieścić sieciówkę z owiniętym polimerem w jej anatomicznej pozycji.</li>
 <li>Zamknąć nacięcie brzuszne warstwowo, używając szwów vicryl 4-0. Przeszyć mięśnie, dbając o to, aby nie uszkodzić narządów jamy brzusznej poniżej nacięcia. Do zamknięcia skóry należy użyć szwów przerywanych.</li>
 <li>Podać przeciwbólowo po operacji 2 mg/kg ketoprofenu (Ketofen, Fort Dodge Animal Health) w wodzie sterylnej w formie podskórnej guli w sąsiedztwie nacięcia. Stan zwierząt należy oceniać codziennie; jeśli zwierzę wykazuje objawy bólu lub stresu, w 2. dobie pooperacyjnej można podać dodatkową dawkę ketoprofenu. Do trzeciej doby po operacji zwierzę powinno całkowicie dojść do siebie, bez oznak bólu lub stresu. Jeśli ból lub stres utrzymują się w 3. dobie pooperacyjnej, uznaje się to za stan nieprawidłowy i należy podjąć działania zgodnie z protokołami IACUC oraz placówki opieki nad zwierzętami.</li>
 <li>Pozostawić mysz do rekonwalescencji i pozwolić na wzrost inżynieryjnie wytworzonemu jelitu przez cztery tygodnie. Zapewnić zwierzęciu dostęp ad libitum do karmy dla gryzoni (Lab Diet 5001, PMI Nutrition, St. Louis MO) oraz wody z dodatkiem Septry (200 mg / 40 mg na 5 ml, Hi-Tech Pharmacal, Amityville NY) w rozcieńczeniu 1:100.</li>
</ol>
4. Zbiór
<ol>
 <li>Humanitarnie uśmierć zwierzę gospodarza cztery tygodnie po implantacji.</li>
 <li>Ponownie otwórz pierwotne cięcie i odsunąłem skórę w kierunku głowowym, aby ułatwić dostęp do jamy otrzewnej.</li>
 <li>Rozetnij warstwę mięśniową i zidentyfikuj konstrukt inżynierii tkankowej w postaci kuli tkanki.</li>
 <li>Usuń zrosty konstruktu z narządów wewnątrzbrzusznych za pomocą dyssekcji ostrej.</li>
 <li>Utrwal konstrukt w formalinie do późniejszego z embeddingu w parafinie lub wykorzystaj świeżą tkankę do analiz biochemicznych, takich jak real-time PCR lub izolacja białek.</li>
</ol>

<ol><li>Grikscheit, T. C., Siddique, A., Ochoa, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+small+intestine+improves+recovery+after+massive+small+bowel+resection%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered small intestine improves recovery after massive small bowel resection.</a> Ann. Surg. 240, 748-754 (2004).</li>
<li>Wales, P. W., Christison-Lagay, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+bowel+syndrome%3A+epidemiology+and+etiology%5BTitle%5D)+AND+%22Sem.+Ped.+Surg%22%5BJournal%5D)">Short bowel syndrome: epidemiology and etiology.</a> Sem. Ped. Surg. 19, 3-9 (2010).</li>
<li>Evans, G. S., Flint, N., Somers, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+a+method+for+the+preparation+of+rat+intestinal+epithelial+cell+primary+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The development of a method for the preparation of rat intestinal epithelial cell primary cultures.</a> J. Cell Sci. 101, 219-231 (1992).</li>
<li>Sala, F. G., Matthews, J. A., Speer, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multicellular+approach+forms+a+significant+amount+of+tissue-engineered+small+intestine+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Tiss.+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">A multicellular approach forms a significant amount of tissue-engineered small intestine in the mouse.</a> Tiss. Eng. Part A. 17, 1841-1850 (2011).</li>
<li>Speer, A. L., Sala, F. G., Matthews, J. A., Grikscheit, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+tissue-engineered+stomach+demonstrates+epithelial+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Murine tissue-engineered stomach demonstrates epithelial differentiation.</a> J. Surg. Res. 171, 6-14 (2011).</li>
<li>Haxhija, E. Q., Yang, H., Spencer, A. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+epithelial+cell+proliferation+is+dependent+on+the+site+of+massive+small+bowel+resection%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Surg.+Int%22%5BJournal%5D)">Intestinal epithelial cell proliferation is dependent on the site of massive small bowel resection.</a> Pediatr. Surg. Int. 23, 379-390 (2007).</li>
<li>Zhao, L., Cheng, Z., Dhall, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+corrective+pullthrough+surgery+in+a+mouse+model+of+Hirschsprung%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pediatr.+Surg%22%5BJournal%5D)">A novel corrective pullthrough surgery in a mouse model of Hirschsprung's disease.</a> J. Pediatr. Surg. 44, 759-766 (2009).</li>
<li>Petrosyan, M., Guner, Y. S., Williams, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+concepts+regarding+the+pathogenesis+of+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Ped.+Surg.+Int%22%5BJournal%5D)">Current concepts regarding the pathogenesis of necrotizing enterocolitis.</a> Ped. Surg. Int. 25, 309-318 (2009).</li>
<li>Shew, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+concerns+in+malrotation+and+midgut+volvulus%5BTitle%5D)+AND+%22Ped.+Radiol%22%5BJournal%5D)">Surgical concerns in malrotation and midgut volvulus.</a> Ped. Radiol. 39, S167-S171 (2009).</li>
<li>Sampietro, G. M., Corsi, F., Maconi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+study+of+long-term+results+and+prognostic+factors+after+conservative+surgery+for+small+bowel+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Gastroenterol.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Prospective study of long-term results and prognostic factors after conservative surgery for small bowel Crohn's disease.</a> Clin. Gastroenterol. Hepatol. 7, 183-191 (2009).</li>
<li>Klempnauer, J., Grothues, F., Bektas, H., Pichlmayr, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+results+after+surgery+for+acute+mesenteric+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Long-term results after surgery for acute mesenteric ischemia.</a> Surgery. , 121-239 (1997).</li>
<li>Fitzgibbons, S. C., Jones, B. A., Hull, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+biopsy-proven+parenteral+nutrition-associated+liver+fibrosis+and+biochemical+cholestasis+in+children+with+short+bowel+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ped.+Surg%22%5BJournal%5D)">Relationship between biopsy-proven parenteral nutrition-associated liver fibrosis and biochemical cholestasis in children with short bowel syndrome.</a> J. Ped. Surg. 45, 95-99 (2010).</li>
<li>Spencer, A. U., Kovacevich, D., McKinney-Barnett, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+short+bowel+syndrome%3A+the+cost+of+comprehensive+care%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Clin.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Pediatric short bowel syndrome: the cost of comprehensive care.</a> Am. J. Clin. Nutr. 88, 1552-1559 (2008).</li>
<li>Kato, T., Tzakis, A. G., Selvaggi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+and+multivisceral+transplantation+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Intestinal and multivisceral transplantation in children.</a> Ann. Surg. 243, 756-766 (2006).</li>
<li>Reyes, J., Bueno, J., Kocoshis, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+of+intestinal+transplantation+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ped.+Surg%22%5BJournal%5D)">Current status of intestinal transplantation in children.</a> J. Ped. Surg. 33, 243-254 (1998).</li>
</ol>

Nie zadeklarowano żadnych konfliktów interesów.

Przedstawiamy protokół wytwarzania inżynieryjnej tkanki jelita u myszy z wykorzystaniem podejścia polegającego na rozmieszczeniu jednostek organoidowych na rusztowaniu. Najbardziej krytycznymi etapami są kroki przygotowania jednostek organoidowych. Należy zadbać o odpowiednie oczyszczenie i mechaniczne przetworzenie tkanki, ale równie ważna jest ostrożność, aby nie doprowadzić do nadmiernego trawienia lub zbyt silnej tryturacji jednostek organoidowych po zakończeniu trawienia (krok 1.11). W przeciwnym razie jednostki org...

<table><tbody><tr><td>HBSS</td><td>Gibco</td><td>114170-112</td><td></td></tr><tr><td>Antybiotyk-antymykotyk 100X</td><td>Invitrogen</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>Dyspaza</td><td>Gibco</td><td>17105-041</td><td></td></tr><tr><td>Kolagenaza typu 1</td><td>Worthington</td><td>LS004194</td><td></td></tr><tr><td>DMEM High Glucose 1X</td><td>Gibco</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>Inaktywowana termicznie FBS</td><td>Invitrogen</td><td>16140-071</td><td></td></tr><tr><td>Biofelt 100% PGA</td><td>Concordia Medical</td><td>FELT01-1005</td><td>Do przygotowania polimeru zgodnie z Ref. 4 </td></tr><tr><td>Kwas poli-&lt;em&gt;L&lt;/em&gt;-mlekowy</td><td>Durect</td><td>B6002-1</td><td>Do przygotowania polimeru zgodnie z Ref. 4 </td></tr><tr><td>Kolagen typu I, z ogona szczura</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3867-1VL</td><td>Do przygotowania polimeru zgodnie z Ref. 4 </td></tr><tr><td>Ketoprofen 100 mg/ml</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td>71-KETOI-100-50</td><td></td></tr><tr><td>Karma dla gryzoni LabDiet 5001</td><td>LabDiet</td><td>5001</td><td></td></tr><tr><td>Septra 200 mg / 40 mg na 5 ml, USP</td><td>Hi-Tech Pharmacal</td><td>50383-824-16</td><td></td></tr><tr><td>Izofluran, USP</td><td>Phoenix Pharmaceuticals</td><td>57319-507-06</td><td></td></tr></tbody></table>

inżynieria tkankowa jelita w modelu mysim

Tissue Engineering of the Intestine in a Murine Model

Sztucznie wyhodowane jelito cienkie (Tissue-engineered small intestine, TESI) zostało z powodzeniem wykorzystane do ratowania szczurów linii Lewis po rozległej resekcji jelita cienkiego, co doprowadziło do powrotu do masy ciała sprzed operacji w ciągu 40 dni.1 U ludzi rozległa resekcja jelita cienkiego może prowadzić do zespołu krótkiego jelita – funkcjonalnego stanu zaburzeń wchłaniania, który wiąże się ze znaczną zachorowalnością, śmiertelnością i kosztami opieki zdrowotnej, w tym z zależnością od żywienia pozajelitowego, niewydolnością i marskością wątroby oraz koniecznością wielonarządowego przeszczepu.2 W niniejszym artykule opisujemy i dokumentujemy nasz protokół tworzenia sztucznie wyhodowanego jelita w modelu mysim z zastosowaniem podejścia opartego na wielokomórkowych jednostkach organoidowych na rusztowaniu. Jednostki organoidowe są wielokomórkowymi agregatami pochodzącymi z jelita, które zawierają elementy zarówno śluzówkowe, jak i mezenchymalne,3 a relacja między nimi pozwala na zachowanie niszy komórek macierzystych jelita.4 W toczących się i przyszłych badaniach przeniesienie naszej techniki na model mysi pozwoli na zbadanie procesów zachodzących podczas formowania TESI z wykorzystaniem narzędzi transgenicznych dostępnych u tego gatunku.5 Dostępność szczepów myszy z niedoborem odporności pozwoli nam również zastosować tę technikę do ludzkiej tkanki jelitowej i zoptymalizować tworzenie ludzkiego TESI jako ksenoprzeszczepu mysiego przed jego wdrożeniem u ludzi. Nasza metoda wykorzystuje odczynniki i materiały zgodne z Dobrą Praktyką Wytwarzania (GMP), które zostały już zatwierdzone do stosowania u pacjentów, co stanowi znaczącą przewagę nad podejściami opartymi na decelularyzowanych tkankach zwierzęcych. Ostatecznym celem tej metody jest jej translacja na ludzi jako terapeutyczna strategia medycyny regeneracyjnej w leczeniu zespołu krótkiego jelita.

Rysunek 1 przedstawia ogólny schemat opisanego tutaj protokołu. Końcowym wynikiem tego protokołu jest kula lub sferyczna struktura inżynieryjnie wytworzonego jelita mysiego z lumenem, błoną śluzową, błoną podśluzową i otaczającą warstwą mięśniową. Rysunek 2A pokazuje typową kulę w porównaniu z początkowym rusztowaniem polimerowym. Rysunek 2B przedstawia tę samą konstrukcję przeciętą na pół w celu odsłonięcia lumenu. Rysunek 3 demonstruje barwiony hematok...

Niniejszy artykuł oraz towarzyszący mu film przedstawiają nasz protokół generowania inżynierowanych tkankowo jelit u myszy, z wykorzystaniem podejścia polegającego na rozmieszczeniu jednostek organoidalnych na rusztowaniu.

Inżynieria tkankowa jelita w modelu mysim

Sztucznie wyhodowane jelito cienkie (TESI) zostało z sukcesem wykorzystane w celu ratowania szczurów linii Lewis po rozległej resekcji jelita cienkiego, co doprowadziło do powrotu do...

W niniejszym filmie zaprezentujemy naszą technikę generowania inżynieryjnie tkankowego jelita cienkiego u myszy z wykorzystaniem podejścia opartego na jednostkach organoidowych na rusztowaniu. W tym eksperymencie zwierzęta były traktowane zgodnie z wytycznymi instytucjonalnego komitetu ds. opieki i wykorzystania zwierząt oraz placówki opieki nad zwierzętami Savon Research Institute w Children's Hospital, Los Angeles. Pierwszym krokiem jest pozyskanie całego jelita myszy.Myszą poddaną humanitarnej eutanazji oraz narzędzia przygotowuje się za pomocą 70% etanolu w wodzie, a następnie wykonuje nacięcie w linii pośrodkowej, aby uzyskać dostęp do jamy otrzewnej. Jelito cienkie zostaje ewakuowane z jamy brzusznej i przekrojone tuż za więzadłem Treitza. Następnie oddziela się je od krezki i jej naczyń krwionośnych za pomocą preparacji ostrej i tępej.Na koniec jelito kręte zostało przecięte pięć milimetrów proksymalnie względem zastawki krętnio-kątniczej. Pobrane jelito cienkie przedstawiono w odpowiedniej skali. Następnie przystępujemy do otwarcia jelita wzdłużnie wzdłuż krawędzi przeciwmiędzybłonowej w buforze Hanksa z jednokrotnym (1X) roztworem antybiotyków i środków przeciwgrzybiczych.

tissue-engineering-of-the-intestine-in-a-murine-model

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioinżynieria

Inżynieria tkankowa jelita na modelu mysim

Ten film opisuje szczegółowy protokół resekcji jelita w modelu mysim. Technika ta zapewnia wgląd w zaburzenia wchłaniania żółci wywołane ileektomią, nadmierną akumulację i toksyczność w jelicie myszy.

Model resekcji jelita krętego u myszy: badanie metabolizmu żółci wywołanego ileektomią w modelu mysim

Ten film demonstruje generowanie modelu pętli jelita krętego do badania przepuszczalności jelit w modelu mysim. Metoda ta zapewnia żywy model do zrozumienia funkcji bariery nabłonkowej i wynikającej z niej odpowiedzi immunologicznej.

Model pętli jelita krętego myszy: model chirurgiczny do badania przepuszczalności jelit u myszy

Artykuł opisuje metodologię produkcji bezkomórkowej macierzy z jelita szczura. Wyprowadzenie rusztowań jelitowych jest ważne dla przyszłych zastosowań w inżynierii tkankowej, biologii komórek macierzystych i testowaniu leków.

Metodologia decelularyzacji do produkcji naturalnej bezkomórkowej macierzy jelitowej

Ulepszona technologia obrazowania pozwala na trójwymiarowe obrazowanie organów podczas rozwoju. W tym miejscu opisujemy cały system hodowli narządów, który umożliwia obrazowanie na żywo rozwijających się kosmków w jelicie płodu myszy.

System hodowli całego jelita moczowego u myszy płodu do manipulacji ex vivo szlakami sygnałowymi i trójwymiarowego obrazowania na żywo rozwoju kosmków

Techniki obrazowania małych zwierząt pozwalają na seryjne badania diagnostyczne i interwencje terapeutyczne in vivo. W ostatnim czasie zakres zastosowań znacznie się poszerzył i obecnie obejmuje ocenę rozwoju guza jelita grubego, gojenie się ran oraz monitorowanie stanu zapalnego. Protokół ten ilustruje te różnorodne potencjalne zastosowania endoskopii mysiej skóry.

Endoskopia mysia do multimodalnego obrazowania in vivo kancerogenezy i oceny gojenia się ran jelitowych i stanów zapalnych

Komórki macierzyste nabłonka jelitowego (ISC) są zmieszane z komórkami Panetha. Komórki te są zróżnicowanym potomstwem ISC, które wspiera ISC i zapewnia ochronę przeciwbakteryjną. Tutaj pokazujemy, w jaki sposób wykorzystaliśmy transgeniczne warunkowe modele myszy, aby ustalić, że komórki Panetha odgrywają kluczową rolę w utrzymaniu nabłonka jelitowego.

Protokoły analizy roli komórek Panetha w regeneracji jelita mysiego przy użyciu warunkowych modeli myszy Cre-lox

Tutaj opisujemy szczegółową procedurę niedokrwienia jelit u myszy, która prowadzi do powtarzalnego uszkodzenia bez śmiertelności, aby zachęcić do standaryzacji tej techniki w całej dziedzinie. Ten model uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego jelit może być wykorzystany do badania komórkowych i molekularnych mechanizmów uszkodzenia i regeneracji.

Mysi model uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego jelit

Rozregulowana funkcja bariery nabłonkowej jelit i reakcje immunologiczne są cechami charakterystycznymi nieswoistego zapalenia jelit, które pozostają słabo zbadane z powodu braku modeli fizjologicznych. W tym miejscu opisujemy model pętli jelitowej myszy, który wykorzystuje dobrze unaczyniony i zewnętrzny odcinek jelita do badania przepuszczalności błony śluzowej i rekrutacji leukocytów in vivo.

Funkcjonalna ocena przepuszczalności jelit i migracji przeznabłonkowej neutrofili u myszy przy użyciu standaryzowanego modelu pętli jelitowej

Ten protokół oferuje szczegółowe instrukcje dotyczące tworzenia mysich organoidów jelita cienkiego, izolowania wrodzonych komórek limfoidalnych typu 1 od mysiej blaszki jelita cienkiego oraz ustanawiania trójwymiarowych (3D) kokultur między oboma typami komórek w celu zbadania dwukierunkowych interakcji między komórkami nabłonka jelitowego a wrodzonymi komórkami limfoidalnymi typu 1.

Współhodowla organoidów nabłonkowych mysiego jelita cienkiego z wrodzonymi komórkami limfoidalnymi

Opisujemy protokół szczegółowo opisujący izolację mysich krypt okrężnicy w celu opracowania 3-wymiarowych kolonoidów. Ustalone okokrody mogą być następnie ostatecznie różnicowane, aby odzwierciedlić skład komórkowy nabłonka gospodarza przed otrzymaniem prowokacji zapalnej lub skierowaniem do utworzenia monowarstwy nabłonka.

Badanie nabłonkowego wpływu zapalenia jelit in vitro na ustalone mysie kolonoidy

Tutaj opisujemy konstrukcję podstawowego, trójwymiarowego (3D) modelu linii komórkowej jelitowej oraz protokołu osadzania parafiny do mikroskopowej oceny stałych jelitowych odpowiedników. Barwienie wybranych białek umożliwia analizę wielu parametrów wzrokowych z jednego eksperymentu do potencjalnego wykorzystania w przedklinicznych badaniach przesiewowych leków.

Podstawowy trójwymiarowy (3D) model jelitowy z komponentem odpornościowym

Naucz się techniki inżynierii tkankowej jelita cienkiego u myszy z wykorzystaniem podejścia jednostek organoidów na rusztowaniu. Ta metoda umożliwia generowanie funkcjonalnych tkanek jelitowych do zastosowań w medycynie regeneracyjnej.

Inżynieria tkankowa jelita w modelu mysim

Przeglądaj więcej filmów