Name: Ocena funkcji mitochondriów i żywotności komórek w izoenzymach kinazy białkowej C z nadekspresją komórek nerkowych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 43 s
Description: Poznaj metodę oceny funkcji mitochondriów i żywotności komórek w izoenzymach kinazy białkowej C z nadekspresją w komórkach nerkowych. Technika ta wykorzystuje wektory adenowirusowe do badania oddychania mitochondrialnego.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Praca ta była wspierana przez grant z National Institutes of Health, National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases, 2R01DK59558 (dla G.N.). UAMS Translational Research Institute, wspierany przez grant UL1 RR029884 z National Institutes of Health National Center for Research Resources, zapewnił częściowe finansowanie dla Flow Cytometry Core w UAMS. Dziękujemy dr Peipei Ping (University of California at Los Angeles; Los Angeles, CA) za udostępnienie aliquoty adenowirusa niosącego cDNA kodujące dominujący negatywny (nieaktywny) mutant PKC-ε oraz dr Allenowi Samarelowi (Loyola University Medical Center; Maywood, IL) za udostępnienie aliquoty wektora adenowirusowego kodującego konstytutywnie aktywny mutant PKC-ε. Dziękujemy również dr Peterowi Parkerowi i dr Peterowi Sugdenowi (Imperial College London, Londyn, UK) za udostępnienie cDNA kodującego konstytutywnie aktywną PKC-ε.

<ol><li>Nowak, G., Schnellmann, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+culture+conditions+stimulate+gluconeogenesis+in+primary+cultures+of+renal+proximal+tubule+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Improved culture conditions stimulate gluconeogenesis in primary cultures of renal proximal tubule cells.</a> Am. J. Physiol. 268, C1053-C1061 (1995).</li>
<li>Nowak, G., Schnellmann, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-ascorbic+acid+regulates+growth+and+metabolism+of+renal+cells%3A+improvements+in+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">L-ascorbic acid regulates growth and metabolism of renal cells: improvements in cell culture.</a> Am. J. Physiol. 271, 2072-2080 (1996).</li>
<li>Ping, P., Takano, H., Zhang, J., Tang, X. L., Qiu, Y., Li, R. C., Banerjee, S., Dawn, B., Balafonova, Z., Bolli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoform-selective+activation+of+protein+kinase+C+by+nitric+oxide+in+the+heart+of+conscious+rabbits%3A+a+signaling+mechanism+for+both+nitric+oxide-induced+and+ischemia-induced+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Isoform-selective activation of protein kinase C by nitric oxide in the heart of conscious rabbits: a signaling mechanism for both nitric oxide-induced and ischemia-induced preconditioning.</a> Circ. Res. 84, 587-604 (1999).</li>
<li>Wotton, D., Ways, D. K., Parker, P. J., Owen, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+both+Raf+and+Ras+is+necessary+for+activation+of+transcription+of+the+human+T+cell+receptor+beta+gene+by+protein+kinase+C%2C+Ras+plays+multiple+roles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Activity of both Raf and Ras is necessary for activation of transcription of the human T cell receptor beta gene by protein kinase C, Ras plays multiple roles.</a> J. Biol. Chem. 268, 17975-17982 (1993).</li>
<li>Nowak, G., Bakajsova, D., Samarel, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+kinase+C-%CE%B5+activation+induces+mitochondrial+dysfunction+and+fragmentation+in+renal+proximal+tubules%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Protein kinase C-ε activation induces mitochondrial dysfunction and fragmentation in renal proximal tubules.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 301, F197-F208 (2011).</li>
<li>Nowak, G., Clifton, G. L., Godwin, M. L., Bakajsova, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+ERK1%2F2+pathway+mediates+oxidant-induced+decreases+in+mitochondrial+function+in+renal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Activation of ERK1/2 pathway mediates oxidant-induced decreases in mitochondrial function in renal cells.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 291, 840-855 (2006).</li>
<li>Shaik, Z. P., Fifer, E. K., Nowak, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Akt+activation+improves+oxidative+phosphorylation+in+renal+proximal+tubular+cells+following+nephrotoxicant+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Akt activation improves oxidative phosphorylation in renal proximal tubular cells following nephrotoxicant injury.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 294, F423-F432 (2008).</li>
<li>Nowak, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+kinase+C-%CE%B1+and+ERK1%2F2+mediate+mitochondrial+dysfunction%2C+decreases+in+active+Na%2B+transport%2C+and+cisplatin-induced+apoptosis+in+renal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Protein kinase C-α and ERK1/2 mediate mitochondrial dysfunction, decreases in active Na+ transport, and cisplatin-induced apoptosis in renal cells.</a> J. Biol. Chem. 277, 43377-43388 (2002).</li>
<li>Liu, X., Godwin, M. L., Nowak, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+kinase+C-+a+inhibits+the+repair+of+oxidative+phosphorylation+after+S-%281%2C2-dichlorovinyl%29-L-cysteine+injury+in+renal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Protein kinase C- a inhibits the repair of oxidative phosphorylation after S-(1,2-dichlorovinyl)-L-cysteine injury in renal cells.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 287, F64-F73 (2004).</li>
<li>Nowak, G., Price, P. M., Schnellmann, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lack+of+a+functional+p21WAF1%2FCIP1+gene+accelerates+caspase-independent+apoptosis+induced+by+cisplatin+in+renal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Lack of a functional p21WAF1/CIP1 gene accelerates caspase-independent apoptosis induced by cisplatin in renal cells.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 285, F440-F450 (2003).</li>
<li>Cummings, B. S., Schnellmann, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cisplatin-induced+renal+cell+apoptosis%3A+caspase+3-dependent+and+-independent+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Cisplatin-induced renal cell apoptosis: caspase 3-dependent and -independent pathways.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 302, 8-17 (2002).</li>
</ol>

Nie zadeklarowano żadnych konfliktów interesów.

Przedstawione tutaj podejście pozwala na nadekspresję poszczególnych izozymów PKC w hodowli pierwotnej komórek cewek bliższych nerek. Metoda ta posiada kilka istotnych zalet: 1. Pozwala na badanie mechanizmów regulacyjnych w homogennej populacji komórek (komórek cewek bliższych nerek), które są głównym celem dla różnych czynników uszkadzających (niedokrwienia, hipoksji, stresu oksydacyjnego), leków oraz substancji nefrotoksycznych w obrębie nerki. 2. Funkcje mitochondriów w tej in vitro model RPTC hodowanych w k...

<table><tbody><tr><td>Dygestorium z laminarnym przepływem powietrza</td><td>Thermo Electron Corporation</td><td>FORMA 1104</td><td></td></tr><tr><td>Homogenizator tkanek Dounce 2 ml i 15 ml</td><td>WHEATON</td><td>989-24607, 357544</td><td></td></tr><tr><td>Sito nylonowe 85 i 235 mikronów</td><td>Small Parts</td><td>CMN - 0085 - 10YD CMN - 0250 - 10YD</td><td></td></tr><tr><td>Sterylna probówka wirówkowa 50 ml</td><td>BIOLOGIX</td><td>BCT-P 50BS</td><td></td></tr><tr><td>Mikroprobówka 1,5 ml</td><td>Sarstedt</td><td>72.690.001</td><td></td></tr><tr><td>Sterylne szalki hodowlane 35 x 10 mm</td><td>Corning</td><td>430165</td><td></td></tr><tr><td>Wirówka Jouan</td><td>Jouan</td><td>Jouan CR3 11175704 Rotory: Jouan T40</td><td></td></tr><tr><td>Regulowana mikrowirówka</td><td>SIGMA</td><td>Model 1 - 15</td><td></td></tr><tr><td>Monitor biologicznego zużycia tlenu</td><td>YSI Incorporated</td><td>YSI Model 5300A</td><td></td></tr><tr><td>Jednokomorowy mikro system pomiaru tlenu</td><td>YSI Incorporated</td><td>5356S</td><td></td></tr><tr><td>Sonda tlenowa</td><td>YSI Incorporated</td><td>5331A</td><td></td></tr><tr><td>Łaźnia cyrkulacyjna</td><td>YSI Incorporated</td><td>5310</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw membran standardowych i KCl</td><td>YSI Incorporated</td><td>5775</td><td></td></tr><tr><td>Mieszadło magnetyczne</td><td>YSI Incorporated</td><td>5222</td><td></td></tr><tr><td>Rejestrator płaski</td><td>Kipp Zonen</td><td>BD 11E</td><td></td></tr><tr><td>Przezroczyste płytki 48- i 96-dołkowe</td><td>Costar</td><td>3548, 3679</td><td></td></tr><tr><td>Thermomixer R</td><td>Eppendorf</td><td>5355 21919</td><td></td></tr><tr><td>Wstrząsarka orbitalna MAXQ 2000</td><td>Thermo Scientific</td><td>SHKA 2000</td><td></td></tr><tr><td>Spectra FLUOR Plus (czytnik absorbancji/fluorescencji/luminescencji)</td><td>Tecan</td><td>F129005</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator automatyczny do CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; z płaszczem wodnym US Autoflow</td><td>NUAIRE</td><td>NU 4850</td><td></td></tr><tr><td>Polistyrenowe probówki hodowlane 12x75 mm do cytometrii przepływowej</td><td>Fisher Brand</td><td>14-961-20</td><td></td></tr><tr><td>Axioskop&lt;br/&gt; Obiektyw immersyjny wodny 63x / 0,90W</td><td>Carl Zeiss</td><td>114846&lt;br/&gt; ACHROPLAN 44 00 67</td><td></td></tr><tr><td>DMEM / F12</td><td>Cellgro</td><td>99 - 830 - PB</td><td></td></tr><tr><td>DMEM / F12 Ham</td><td>Sigma</td><td>D 2906 - 1L</td><td></td></tr><tr><td>Mezylan deferoksaminy</td><td>Hospira</td><td>D110</td><td></td></tr><tr><td>Kolagenaza typu I</td><td>Worthington</td><td>4196</td><td></td></tr><tr><td>Inhibitor trypsyny</td><td>Sigma</td><td>T 6522 - 500mg</td><td></td></tr><tr><td>jodek 5,5',6,6'-tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethylbenzimidazolylkarbocyjaniny (JC-1)</td><td>Invitrogen</td><td>T3168</td><td></td></tr><tr><td>Mitotracker Red</td><td>Invitrogen</td><td>M22425</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do bioluminescencyjnego oznaczania ATP HS II</td><td>Roche</td><td>11 699 709 001</td><td></td></tr><tr><td>Roztwór Aneksyny V - FITC</td><td>BioVision</td><td>1001 - 200</td><td></td></tr><tr><td>Cytometr przepływowy</td><td>BD Biosciences</td><td>BD FACSCalibur</td><td></td></tr></tbody></table>

ocena funkcji mitochondriów i żywotności komórek w komórkach nerkowych z nadekspresją izoform kinazy białkowej c

Assessment of Mitochondrial Functions and Cell Viability in Renal Cells Overexpressing Protein Kinase C Isozymes

Rodzina izozymów kinazy białkowej C (PKC) bierze udział w licznych procesach fizjologicznych i patologicznych. Nasze ostatnie dane wykazują, że PKC reguluje funkcje mitochondriów oraz stan energetyczny komórek. Liczne doniesienia dowiodły, że aktywacja PKC-α i PKC-ε poprawia funkcje mitochondriów w niedokrwionym sercu i pośredniczy w kardioprotekcji. Z kolei wykazaliśmy, że PKC-α i PKC-ε uczestniczą w indukowanej nefrotoksynami dysfunkcji mitochondriów i śmierci komórek nerkowych. Celem niniejszego badania było zatem opracowanie modelu in vitro komórek nerek zachowujących aktywne funkcje mitochondriów, w którym izozymy PKC mogłyby być selektywnie aktywowane lub hamowane w celu określenia ich roli w regulacji fosforylacji oksydacyjnej i przeżywalności komórek. Pierwotne hodowle komórek cewnych kanalików proksymalnych nerek (RPTC) hodowano w usprawnionych warunkach, co pozwoliło uzyskać oddychanie mitochondrialne i aktywność enzymów mitochondrialnych zbliżoną do tej obserwowanej w RPTC in vivo. Ponieważ tradycyjne techniki transfekcji (Lipofectamine, elektroporacja) są mało wydajne w hodowlach pierwotnych i wywierają niekorzystny wpływ na funkcje mitochondriów, mutanty cDNA PKC-ε dostarczano do RPTC za pomocą wektorów adenowirusowych. Podejście to pozwala na transfekcję ponad 90% hodowanych komórek RPTC.
W niniejszej pracy przedstawiamy metody oceny roli PKC-ε w: 1. regulacji morfologii i funkcji mitochondriów związanych z syntezą ATP oraz 2. przeżywalności RPTC w hodowli pierwotnej. Aktywację PKC-ε osiąga się poprzez nadekspresję konstytutywnie aktywnego mutanta PKC-ε. Inhibicję PKC-ε uzyskuje się poprzez nadekspresję nieaktywnego mutanta PKC-ε. Funkcję mitochondriów ocenia się poprzez badanie oddychania, integralności łańcucha oddechowego, aktywności kompleksów oddechowych i F0F1-ATPase, szybkości produkcji ATP oraz zawartości ATP. Oddychanie ocenia się w RPTC przepuszczczonych za pomocą digitonininy jako stan 3 (maksymalne oddychanie w obecności nadmiaru substratów i ADP) oraz oddychanie rozprzęgane. Integralność łańcucha oddechowego ocenia się poprzez pomiar aktywności wszystkich czterech kompleksów łańcucha oddechowego w izolowanych mitochondriach. Zdolność do fosforylacji oksydacyjnej ocenia się poprzez pomiar potencjału błony mitochondrialnej, szybkości produkcji ATP oraz aktywności F0F1-ATPase. Stan energetyczny RPTC ocenia się poprzez oznaczenie wewnątrzkomórkowej zawartości ATP. Morfologię mitochondriów w żywych komórkach wizualizuje się przy użyciu MitoTracker Red 580, barwnika fluorescencyjnego specyficznie kumulującego się w mitochondriach, a żywe monowarstwy bada się pod mikroskopem fluorescencyjnym. Żywotność RPTC ocenia się za pomocą barwienia aneksyną V/jodkiem propidyny z następującą cytometrią przepływową w celu określenia poziomu apoptozy i onkozy.
Metody te umożliwiają selektywną aktywację lub inhibicję poszczególnych izoform PKC w celu oceny ich roli w funkcjach komórkowych w różnych warunkach fizjologicznych i patologicznych, które można odtworzyć in vitro.

Rycina 1 pokazuje, że adenowirusowa dostawa cDNA kodującego mutanty konstytutywnie aktywne (caPKC-ε) i nieaktywne (dnPKC-ε) PKC-ε prowadzi do znaczącego wzrostu poziomu białka PKC-ε w RPTC oraz w mitochondriach. Komórki zainfekowane cDNA zawierającym wektor caPKC-ε wykazywały nadekspresję fosforylowanej (aktywnej) formy PKC-ε, natomiast komórki zainfekowane cDNA kodującym dnPKC-ε wykazywały nadekspresję nieaktywnej (niefosforylowanej) PKC-ε (Rycina 1). Obecność aktywnej PKC-ε zmniejszała...

Opisano wpływ aktywacji izoformy kinazy białkowej C (PKC) na funkcje mitochondrialne związane z oddychaniem i fosforylacją oksydacyjną oraz na żywotność komórek. Podejście to adaptuje technikę adenowirusową w celu selektywnej nadekspresji izoform PKC w pierwotnych hodowlach komórkowych oraz szereg analiz służących do określenia funkcji mitochondriów i stanu energetycznego komórki.

Ocena funkcji mitochondriów i żywotności komórek w komórkach nerkowych z nadekspresją izoform kinazy białkowej C

Rodzina izoenzymów kinazy białkowej C (PKC) bierze udział w licznych procesach fizjologicznych i patologicznych. Nasze ostatnie dane wykazują, że PKC...

W niniejszym eksperymencie wykorzystano selektywną modulację izoform kinazy białkowej C w celu określenia ich funkcji mitochondrialnych i komórkowych w komórkach cewek proksymalnych nerek w różnych warunkach fizjologicznych i patologpecznych. Najpierw należy wyizolować pierwotne komórki cewek proksymalnych nerek z kory nerkowej lub RPC, które charakteryzują się metabolizmem oksydacyjnym przypominającym metabolizm cewek proksymalnych nerek.Zakaźmy RPC wektorami adenowirusowymi wykazującymi ekspresję aktywnych i nieaktywnych form białka kinazy C. Następnie przeanalizujmy różne funkcje mitochondrialne oraz żywotność komórek, aby określić wpływ izoenzymu na zdolność mitochondriów do syntezy ATP i zapobiegania śmierci komórkowej. Przeprowadźmy również analizę immunoblottingu dla fosforylowanej kinazy C epsilon w połączonych lizatach komórkowych.Wyniki wskazują, że aktywacja kinazy białkowej epsilon negatywnie reguluje zdolność mitochondriów do generowania ATP, obniżając komórkowe poziomy ATP oraz żywotność komórek kanalików bliższych nerek. Główną zaletą tej techniki w porównaniu z naszymi obecnymi metodami, takimi jak linie komórkowe, jest to, że pierwotne hodowle komórek kanalików bli

assessment-mitochondrial-functions-cell-viability-renal-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Ocena funkcji mitochondrialnych i żywotności komórek nerkowych z nadmierną ekspresją izozymów kinazy białkowej C

Ten film demonstruje ocenę funkcjonowania mitochondriów komórek śródbłonka naczyń mózgowych (CVE) za pomocą testu strumienia zewnątrzkomórkowego. Komórki CVE są siane na płytce do hodowli komórek strumienia zewnątrzkomórkowego. Czujniki strumienia zewnątrzkomórkowego są nawilżane przed załadowaniem i kalibracją do bioanalizatora. Płytka zawierająca komórki jest następnie ładowana do analizy.

Ocena funkcji mitochondriów w komórkach śródbłonka naczyń mózgowych

Porównanie potencjału błony mitochondrialnej między próbkami dostarcza cennych informacji o stanie komórek. Opisano szczegółowe etapy izolacji mitochondriów i oceny odpowiedzi na inhibitory i rozprzęgacze za pomocą fluorescencji. Metoda i użyteczność tego protokołu są zilustrowane przez zastosowanie hodowli komórkowej i zwierzęcego modelu stresu komórkowego.

Izolacja i analiza funkcjonalna mitochondriów z hodowanych komórek i tkanek myszy

Tutaj opisujemy, jak badać mitochondrialną lokalizację kinazy (cyklu komórkowego) i jak określić jej submitochondrialne położenie, a także potencjalne substraty/cele mitochondrialne. Wymuszona ekspresja białek w mitochondriach stanowi użyteczne narzędzie do badania funkcjonalnych konsekwencji mitochondrialnej lokalizacji białka będącego przedmiotem zainteresowania.

Eksperymentalne podejścia do badania lokalizacji mitochondrialnej i funkcji kinazy jądrowego cyklu komórkowego, Cdk1

Mitochondria komórek śródbłonka są niezbędne do utrzymania integralności bariery krew-mózg. Wprowadzamy protokół pomiaru funkcji bioenergetycznych w komórkach śródbłonka naczyń mózgowych.

Ocena funkcji bioenergetycznych w komórkach śródbłonka naczyń mózgowych

Zrozumienie wpływu środowiskowych pestycydów chloroorganicznych (OCP) na funkcję mitochondriów w hepatocytach jest ważne dla zbadania mechanizmu OCP powodującego zaburzenia metaboliczne. W pracy przedstawiono szczegółowe metody wykrywania funkcji mitochondriów wątroby.

Eksperymentalny protokół wykrywania funkcji mitochondriów w hepatocytach narażonych na pestycydy chloroorganiczne

Ten protokół zapewnia efektywne kosztowo podejście do izolowania i charakteryzowania pierwotnych komórek kanalików nerkowych myszy, które następnie mogą być subhodowane w celu oceny funkcji biologicznych nerek ex vivo, w tym bioenergetyki mitochondrialnej.

Izolacja, charakterystyka i wysokoprzepustowa analiza strumienia zewnątrzkomórkowego pierwotnych komórek nabłonka kanalików nerkowych myszy

Ta metoda wykorzystuje udział porów przejściowych przepuszczalności mitochondriów do wycieku protonów o niskiej przewodności, aby określić próg napięcia dla otwarcia porów u noworodków z zespołem łamliwego chromosomu X o zwiększonej zawartości kardiomiocytów mitochondrialnego koenzymu Q w porównaniu do kontroli typu dzikiego.

Ocena otwartego prawdopodobieństwa porów przejściowych przepuszczalności mitochondriów w warunkach nadmiaru koenzymu q

Ta technika opisuje efektywny przepływ pracy do wizualizacji i ilościowego pomiaru potencjału błony mitochondrialnej i poziomów ponadtlenkowych w komórkach HeLa za pomocą obrazowania na żywo opartego na fluorescencji.

Kwantyfikacja potencjału błony mitochondrialnej i poziomów ponadtlenkowych na podstawie fluorescencji przy użyciu obrazowania na żywo w komórkach HeLa

Tutaj opisujemy protokół in vitro modelujący niedotlenienie/uszkodzenia reoxygenacji w wysokometabolicznych komórkach nabłonka rurkowo-rurkowego. Model ten został zaprojektowany tak, aby wywołać uszkodzenia wywołane stresem metabolicznym, które można zmierzyć poprzez ekspresję markerów uszkodzenia kanałów bliższych oraz ocenę funkcji oddechowej mitochondriów.

Modelowanie niedotlenienia/uszkodzeń reoxygenacji w bliższych komórkach nabłonka rurkowego

Artykuł ten opisuje wykorzystanie mikroskopii konfokalnej oraz ImageJ do oceny dynamiki rozszczepienia i fuzji mitochondriów za pomocą fluorescencji przełączającej się foto Dendra2.

Ocena dynamiki rozszczepienia/fuzji mitochondrialnej w komórkach rurkowatych nerek bliższych

Poznaj metodę oceny funkcji mitochondriów i żywotności komórek w izoenzymach kinazy białkowej C z nadekspresją w komórkach nerkowych. Technika ta wykorzystuje wektory adenowirusowe do badania oddychania mitochondrialnego.

Ocena funkcji mitochondriów i żywotności komórek w komórkach nerkowych z nadekspresją izoform kinazy białkowej C

Przeglądaj więcej filmów