Bioluminescencyjne obrazowanie bakterii in vivo

Ten film opisuje zastosowanie obrazowania bioluminescencyjnego całego ciała do badania transportu bakteryjnego u żywych myszy, z naciskiem na wykrywanie wzrostu bakterii w ksenoprzeszczepach nowotworowych Bakterie stanowią atrakcyjną klasę wektorów do terapii raka, posiadając naturalną zdolność do preferencyjnego wzrostu w obrębie guzów, po podaniu dożylnym rosnącym na zewnątrz lub wewnątrz komórek nowotworowych. Szczepy bakteryjne zaprojektowane do ekspresji kasety genu luksa ułatwiają wykrywanie bakterii i jednocześnie nowotworów. Wartość nieinwazyjnego monitorowania podłużnego szczepów bakteryjnych in vivo jest dobrze akceptowana, co pozwala ograniczyć wykorzystanie zwierząt i generować więcej statystycznie istotnych danych niż testy końcowe.

Procedura ta polega na indukcji guzów podskórnych u myszy. Guzy mogą się rozwijać i są monitorowane w czasie. Podaje się bakterie, a myszy poddaje się obrazowaniu bioluminescencyjnemu w dedykowanych punktach czasowych do opisanych tutaj eksperymentów.

Guzy podskórne są indukowane u myszy o podłożu immunologicznym lub grasicy. W zależności od wyboru ksenoprzeszczepu, bakterie typu Lux pożądanych gatunków, takich jak E coli, Są hodowane jako kultury nocne. Komórki bakteryjne są myte i ponownie zawieszane w żądanym stężeniu do podania dożylnego.

10 do sześciu. Rutynowo stosuje się komórki bakteryjne w objętości iniekcji 100 mikrolitrów. Myszy z guzami podskórnymi rutynowo o objętości kubańskiej 100 milimetrów są przygotowywane do leczenia.

Za pomocą igły strzykawkowej o rozmiarze 29 zawiesinę bakteryjną wstrzykuje się do bocznej żyły ogonowej. Bakterie preferencyjnie replikowały się w masie guza w czasie. Bakterie wewnątrznowotworowe kontynuują replikację przez kilka tygodni i są wykrywalne za pomocą obrazowania IVUS w ciągu trzech do sześciu dni.

Po podaniu W przypadku obrazowania bioluminescencyjnego żywe i znieczulone myszy umieszcza się w komorze 37 stopni ivus. W razie potrzeby można obrazować kilka myszy jednocześnie. Obrazy fotograficzne i luminescencyjne są zbierane za pomocą chłodzonej kamery CCD z żądanymi ustawieniami oprogramowania.

W zależności od urządzenia do obrazowania można przeprowadzić analizę dwu- lub trójwymiarową. Uzyskuje się solidną i liniową zależność między liczbą bakterii wewnątrz guza a poziomem wytwarzanego światła. Wiarygodne oszacowanie liczby bakterii in vivo wykazujących ekspresję LX Bakterie mogą być również wykrywane z głębi ciała.

Bakterie komensalne kolonizujące jelita wyrażające luksy są wizualizowane przez kilka tygodni. Podawanie po zgłębniku, co dodatkowo demonstruje użyteczność obrazowania bioluminescencyjnego do analizy bakterii wykazujących ekspresję luksów u zwierząt badawczych.