Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent <em>In situ</em> Hybridization

Leslie Smith; Mathew Thayer

doi:10.3791/4400

Czas replikacji chromosomów w połączeniu z fluorescencyjną hybrydyzacją in situ

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Chromosome Replicating Timing Combined with Fluorescent In situ Hybridization

Czas replikacji chromosomów w połączeniu z fluorescencyjną hybrydyzacją in situ

Full Text

14,640 Views

17:14 min

December 10, 2012

DOI: 10.3791/4400-v

Leslie Smith¹, Mathew Thayer¹

¹Department of Biochemistry and Molecular Biology, Knight Cancer Institute,Oregon Health & Science University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Opisana jest ilościowa metoda analizy czasu replikacji chromosomów. Metoda wykorzystuje inkorporację BrdU w połączeniu z fluorescencyjną hybrydyzacją in situ (FISH) w celu oceny czasu replikacji chromosomów ssaków. Technika ta pozwala na bezpośrednie porównanie przegrupowanych i nieprzegrupowanych chromosomów w tej samej komórce.

To eksperymentalne podejście łączy inkorporację BRDU z fluorescencyjną hybrydyzacją C-dwoje. Ilościowa analiza czasu replikacji chromosomów ssaków. Najpierw włącz BRDU do żywych komórek i zbierz chromosomy metafazy.

Następnie wykonaj badanie DNA ryb w połączeniu z sekwencyjnym barwieniem przeciwciałami BRDU, aby zidentyfikować poszczególne replikujące się chromosomy. Następnie użyj mikroskopii fotograficznej, aby uchwycić obrazy sygnałów ryb i włączenia BRDU do poszczególnych figur mitotycznych. Korzystając z oprogramowania cyto vision, oblicz obszar i intensywność pikseli reprezentowanych przez sygnały BRDU lub DPI na każdym izolowanym chromosomie.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

Explore More Videos

Czas replikacji chromosomów fluorescencyjna hybrydyzacja in situ replikacja DNA faza S czasowy program replikacji wskazówki specyficzne dla tkanki wskazówki rozwojowe modyfikacje epigenetyczne inaktywacja chromosomów X wyciszanie transkrypcji centrum inaktywacji chromosomów komórki rakowe promieniowanie jonizujące