Name: Konfokalna endomikroskopia laserowa dróg moczowych oparta na sondzie: technika (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-10T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 31 s
Description: Poznaj technikę konfokalnej endomikroskopii laserowej opartej na sondzie do obrazowania dróg moczowych u pacjentów z nowotworami pęcherza. Metoda umożliwia wizualizację komórkową w czasie rzeczywistym, poprawiając diagnostykę i precyzję resekcji chirurgicznej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy chcieliby podziękować firmie Mauna Kea Technologies za wsparcie techniczne. Autorzy dziękują również Shelly Hsiao za pomoc techniczną oraz Kathleen E. Mach za krytyczną recenzję. Praca ta była częściowo finansowana z grantu NIH R01CA160986 przyznanego J.C.L.

1. Przygotowanie pacjenta
<ol>
	<li>Uzyskać zgodę pacjenta zaplanowanego na cystoskopię diagnostyczną oraz inne zabiegi endourologiczne, takie jak przezcewkowa resekcja guza pęcherza moczowego (TURBT), w celu wykonania CLE. W formularzu zgody należy zawrzeć opis zastosowania wewnątrz pęcherzowego i/lub dożylnego podania fluoresceiny jako środka kontrastowego. Należy przeprowadzić wywiad w kierunku nadwrażliwości na fluoresceinę.</li>
	<li>Pacjent zostaje ułożony do cystoskopii (zazwyczaj w pozycji litotomijnej) i przygotowany w warunkach sterylnych.</li>
	<li>Przeprowadzić standardową cystoskopię w białym świetle (WLC) za pomocą sztywnego lub giętkiego cystoskopu wprowadzonego przez cewkę moczową.</li>
	<li>Zbadać wszystkie obszary pęcherza moczowego w białym świetle (Rysunek 1) i oznaczyć obszary zainteresowania do badania CLE.</li>
	<li>Oprócz WLC pęcherz można obrazować za pomocą innych makroskopowych metod obrazowania optycznego, w tym cystoskopii fluorescencyjnej (Rysunek 2A) lub obrazowania wąskopasmowego (Rysunek 2B), aby zidentyfikować dodatkowe podejrzane obszary, a następnie scharakteryzować je za pomocą CLE.</li>
	<li>Za pomocą elektrody kauteryzacyjnej lub pętli resekcyjnej wykonać niewielki wypalony znak obok obszarów zainteresowania, które zostaną poddane obrazowaniu i biopsji w celu potwierdzenia patomorfologicznego. Znak kauteryzacyjny ułatwia ponowną lokalizację podczas kolejnego obrazowania CLE i pobierania biopsji.</li>
</ol>
2. Środek kontrastowy
<ol>
	<li>Wlewanie środka kontrastowego do pęcherza
	<ol>
		<li>Przygotować roztwór poprzez rozcieńczenie fluoresceiny sodowej klasy klinicznej o stężeniu 10% w sterylnym roztworze soli fizjologicznej (0,9% NaCl) do pożądanego stężenia. Na przykład, aby przygotować 400 ml 0,1% fluoresceiny, należy rozcieńczyć 4 ml 10% fluoresceiny w 396 ml soli fizjologicznej.</li>
		<li>Wprowadzić sterylną cewkę moczową do pęcherza i wlać rozcieńczony środek kontrastowy grawitacyjnie, używając strzykawki z końcówką do cewnika o pojemności 60 ml.</li>
		<li>Zaciśnąć cewkę moczową, aby środek kontrastowy pozostał w pęcherzu przez 5 min.</li>
		<li>Odprowadzić środek kontrastowy z pęcherza. Używając strzykawki z końcówką do cewnika o pojemności 60 ml, wypłukać pozostałości kontrastu z pęcherza za pomocą soli fizjologicznej, około 240-300 ml.</li>
		<li>Przejść do obrazowania CLE.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Dożylne wstrzyknięcie fluoresceiny
	<ol>
		<li>Nabrać 1,0 ml fluoresceiny do strzykawki. Podłączyć strzykawkę do dostępu dożylnego i wstrzyknąć 0,5 - 1,0 ml fluoresceiny dożylnie w formie bolusa. Przeplukać linię solą fizjologiczną. Czynność ta jest zazwyczaj wykonywana przez zespół anestezjologiczny w sali operacyjnej.</li>
		<li>Przejść do obrazowania CLE.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Obrazowanie CLE
<ol>
	<li>Wyjmij wysterylizowaną sondę obrazującą CLE (Cellvizio) z opakowania i podłącz ją do jednostki skanowania laserowego (Mauna Kea Technologies, Paryż, Francja)</li>
	<li>Rozgrzej i skalibruj sondę obrazującą zgodnie z instrukcjami producenta.</li>
	<li>Wprowadź ponownie cystoskop lub resektoskop do pęcherza moczowego. W przypadku sztywnego cystoskopu użyj soczewki 0 stopni.</li>
	<li>Wsuń sondę obrazującą CLE przez kanał roboczy cystoskopu tak, aby jej końcówka znajdowała się tuż za końcem cystoskopu.</li>
	<li>W świetle białym zlokalizuj wcześniej zaznaczone obszary zainteresowania. W razie potrzeby zastosuj dodatkowe płukanie roztworem soli fizjologicznej w celu wizualizacji błony śluzowej i utrzymuj umiarkowane rozszerzenie pęcherza.</li>
	<li>Manipuluj sondą obrazującą CLE ręką operatora, aby uzyskać bezpośredni kontakt en face z obszarami zainteresowania. W celu wykonania przekrojów optycznych obszarów zainteresowania, delikatnie zwiększaj i zmniejszaj nacisk sondy obrazującej, utrzymując bezpośredni kontakt.
	<ol>
		<li>Aby dotrzeć do guzów zlokalizowanych w przedniej części pęcherza, standardowy mostek Albarrana może ułatwić odchylenie sondy obrazującej w celu bezpośredniego kontaktu z obszarem zainteresowania (Rysunek 2C).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Typowe obszary zainteresowania obejmują guz brodawkowaty, guz niebrodawkowaty, przejście między prawidłowo wyglądającą błoną śluzową a guzem oraz obszary rumieniowe; wszystkie one mogą być obrazowane po podaniu fluoresceiny drogą wewnątrz pęcherza lub dożylnie. Podanie dożylne fluoresceiny jest wymagane do obrazowania loży po resekcji, cewki moczowej w obrębie prostaty oraz cewki moczowej prącia.</li>
	<li>Podczas skanowania obszaru zainteresowania przez sondę obrazującą, rejestruj obrazy do późniejszej analizy. Zwróć uwagę na ogólną morfologię komórkową, granice, organizację oraz obecność neoangiogenezy.</li>
	<li>Po zakończeniu obrazowania wyjmij sondę obrazującą CLE z kanału roboczego.</li>
	<li>W razie potrzeby pobierz biopsje metodą „cold-cup” z odpowiadających obszarów zainteresowania, które zostały zeskanowane za pomocą CLE. Użyj oznaczeń kauteryzacyjnych jako punktów orientacyjnych do korejestracji obrazowanych obszarów poddanych biopsji.</li>
	<li>Zakończ zabieg TURBT zgodnie z rutyną. U pacjentów, którzy otrzymali fluoresceinę dożylnie, rozważ użycie resektoskopów z przepływem ciągłym w celu poprawy wizualizacji podczas resekcji, ponieważ fluoresceina jest wydalana przez nerki do pęcherza moczowego około 5 min po podaniu dożylnym.</li>
	<li>Pobierz zapisane nagrania obrazów z procesora konfokalnego i przeprowadź analizę obrazu.</li>
</ol>

<ol><li>Thiberville, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+in+vivo+fluorescence+microimaging+of+the+alveolar+ducts+and+sacs+during+bronchoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir.+J%22%5BJournal%5D)">Human in vivo fluorescence microimaging of the alveolar ducts and sacs during bronchoscopy.</a> Eur. Respir. J. 33, 974-985 (2009).</li>
<li>Dunbar, K. B., Okolo, P. 3rd, Montgomery, E., Canto, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confocal+laser+endomicroscopy+in+Barrett%27s+esophagus+and+endoscopically+inapparent+Barrett%27s+neoplasia%3A+a+prospective%2C+randomized%2C+double-blind%2C+controlled%2C+crossover+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointest.+Endosc%22%5BJournal%5D)">Confocal laser endomicroscopy in Barrett's esophagus and endoscopically inapparent Barrett's neoplasia: a prospective, randomized, double-blind, controlled, crossover trial.</a> Gastrointest. Endosc. 70, 645-654 (2009).</li>
<li>Buchner, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+probe-based+confocal+laser+endomicroscopy+with+virtual+chromoendoscopy+for+classification+of+colon+polyps%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Comparison of probe-based confocal laser endomicroscopy with virtual chromoendoscopy for classification of colon polyps.</a> Gastroenterology. 138, 834-842 (2010).</li>
<li>Pech, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confocal+laser+endomicroscopy+for+in+vivo+diagnosis+of+early+squamous+cell+carcinoma+in+the+esophagus%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Gastroenterol.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Confocal laser endomicroscopy for in vivo diagnosis of early squamous cell carcinoma in the esophagus.</a> Clin. Gastroenterol. Hepatol. 6, 89-94 (2008).</li>
<li>Goetz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+confocal+laser+endo+microscopy+of+the+human+liver%3A+a+novel+method+for+assessing+liver+microarchitecture+in+real+time%5BTitle%5D)+AND+%22Endoscopy%22%5BJournal%5D)">In vivo confocal laser endo microscopy of the human liver: a novel method for assessing liver microarchitecture in real time.</a> Endoscopy. 40, 554-562 (2008).</li>
<li>Meining, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+cholangiocarcinoma+in+vivo+using+miniprobe-based+confocal+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Gastroenterol.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Detection of cholangiocarcinoma in vivo using miniprobe-based confocal fluorescence microscopy.</a> Clin. Gastroenterol. Hepatol. 6, 1057-1060 (2008).</li>
<li>Wu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+real-time+microscopy+of+the+urinary+tract+using+confocal+laser+endomicroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Dynamic real-time microscopy of the urinary tract using confocal laser endomicroscopy.</a> Urology. 78, 225-231 (2011).</li>
<li>Sonn, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+biopsy+of+human+bladder+neoplasia+with+in+vivo+confocal+laser+endomicroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Optical biopsy of human bladder neoplasia with in vivo confocal laser endomicroscopy.</a> J. Urol. 182, 1299-1305 (2009).</li>
<li>Sonn, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibered+confocal+microscopy+of+bladder+tumors%3A+an+ex+vivo+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Endourol%22%5BJournal%5D)">Fibered confocal microscopy of bladder tumors: an ex vivo study.</a> J. Endourol. 23, 197-201 (2009).</li>
<li>Adams, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+2.6-+and+1.4-mm+imaging+probes+for+confocal+laser+endomicroscopy+of+the+urinary+tract%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Endourol%22%5BJournal%5D)">Comparison of 2.6- and 1.4-mm imaging probes for confocal laser endomicroscopy of the urinary tract.</a> J. Endourol. 25, 917-921 (2011).</li>
<li>Wiesner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confocal+laser+endomicroscopy+for+the+diagnosis+of+urothelial+bladder+neoplasia%3A+a+technology+of+the+future%3F%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">Confocal laser endomicroscopy for the diagnosis of urothelial bladder neoplasia: a technology of the future?</a> BJU Int. 107, 399-403 (2011).</li>
<li>Wallace, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+safety+of+intravenous+fluorescein+for+confocal+laser+endomicroscopy+in+the+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Aliment.+Pharmacol.+Ther%22%5BJournal%5D)">The safety of intravenous fluorescein for confocal laser endomicroscopy in the gastrointestinal tract.</a> Aliment. Pharmacol. Ther. 31, 548-552 (2010).</li>
<li>Konda, V. J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+assessment+of+needle-based+confocal+laser+endomicroscopy+during+EUS-FNA+procedures+of+the+pancreas+%28with+videos%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointest.+Endosc%22%5BJournal%5D)">First assessment of needle-based confocal laser endomicroscopy during EUS-FNA procedures of the pancreas (with videos.</a> Gastrointest. Endosc. 74, 1049-1060 (2011).</li>
<li>Liu, J. -J., Droller, M., Liao, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Optical+Imaging+Technologies+in+Bladder+Cancer%3A+Considerations+and+Perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">New Optical Imaging Technologies in Bladder Cancer: Considerations and Perspectives.</a> J. Urol. 188, 361-368 (2012).</li>
<li>Hsiung, P. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+colonic+dysplasia+in+vivo+using+a+targeted+heptapeptide+and+confocal+microendoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Detection of colonic dysplasia in vivo using a targeted heptapeptide and confocal microendoscopy.</a> Nat. Med. 14, 454-458 (2008).</li>
</ol>

Nie zgłoszono konfliktów interesów.

Osiągnięcie i utrzymanie stabilnego kontaktu en face między sondą obrazującą a błoną śluzową pęcherza moczowego jest najważniejszym krokiem w uzyskaniu optymalnej jakości obrazu. W celu wypracowania zręczności niezbędnej do manipulowania sondą obrazującą i utrzymywania jej w bezruchu podczas akwizycji obrazu, wymagana jest krzywa uczenia się obejmująca około 3–5 pacjentów. Dodatkowo, ponieważ procedura ta jest przeprowadzana in vivo, ruchy pacjenta (np. oddechowe) oraz pulsacje naczyniowe mogą ...

<table><tbody><tr><td>Seria Cellvizio 100</td><td>Mauna Kea Technologies</td><td>Seria 100</td><td>Obejmuje procesor konfokalny i LSU: F400-v2 przy 488 nm</td></tr><tr><td>Konfokalna minisonda Cellvizio</td><td>Mauna Kea Technologies</td><td>Gastroflex UHD</td><td></td></tr><tr><td>AK-FLUOR 10%</td><td>Akorn, Inc.</td><td>NDC 17478-253-10</td><td></td></tr></tbody></table>

sondowa konfokalna laserowa endomikroskopia dróg moczowych: technika

Probe-based Confocal Laser Endomicroscopy of the Urinary Tract: The Technique

Sondowa konfokalna endomikroskopia laserowa (CLE) to rozwijająca się technologia obrazowania optycznego, która umożliwia mikroskopię powierzchni błon śluzowych in vivo w czasie rzeczywistym podczas standardowej endoskopii. Znajdując obecnie zastosowanie w drogach oddechowych1 i przewodzie pokarmowym,2-6 CLE była również badana w obrębie układu moczowego w celu diagnostyki raka pęcherza moczowego.7-10 Dzięki niej, oprócz dynamicznego obrazowania prawidłowych i patologicznych naczyń krwionośnych,7 możliwe jest w czasie rzeczywistym rozróżnienie morfologii komórkowej i mikroarchitektury tkanek z rozdzielczością w skali mikronowej.
System CLE oparty na sondzie (Cellvizio, Mauna Kea Technologies, Francja) składa się z wielorazowej światłowodowej sondy obrazującej połączonej z jednostką skanującą laserem 488 nm. Sonda obrazująca jest wprowadzana do kanałów roboczych standardowych endoskopów giętkich i sztywnych. W przewodzie pokarmowym stosowany jest również system CLE oparty na endoskopie (Optiscan, Australia), w którym funkcjonalność konfokalnej endomikroskopii jest zintegrowana z endoskopem. Ze względu na większą średnicę urządzenia, jego zastosowanie w drogach moczowych jest obecnie ograniczone do użytkowania ex vivo.11 Akwizycja obrazów konfokalnych odbywa się poprzez bezpośredni kontakt sondy obrazującej z docelową tkanką i jest rejestrowana w formie sekwencji wideo. Podobnie jak w przewodzie pokarmowym, endomikroskopia dróg moczowych wymaga egzogennego środka kontrastowego — najczęściej fluoresceiny, którą można podać dożylnie lub do pęcherza moczowego. Podanie do pęcherza moczowego jest uznaną metodą miejscowego wprowadzania środków farmakologicznych przy minimalnej toksyczności ogólnoustrojowej, co jest charakterystyczne dla dróg moczowych. Fluoresceina szybko barwi macierz pozakomórkową i posiada ustalony profil bezpieczeństwa.12 Sondy obrazujące o różnych średnicach zapewniają kompatybilność z endoskopami o różnych kalibrach. Do tej pory w cystoskopii giętkiej i sztywnej oceniano sondy o średnicach 1,4 i 2,6 mm.10 Niedawna dostępność sondy obrazującej o średnicy &lt; 1 mm13 otwiera możliwość zastosowania CLE w górnych drogach moczowych podczas ureteroskopii. Cystoskopia fluorescencyjna (t.j. diagnostyka fotodynamiczna) oraz obrazowanie wąskopasmowe to dodatkowe modalities obrazowania optycznego oparte na endoskopach14, które można łączyć z CLE w celu uzyskania multimodalnego obrazowania dróg moczowych. W przyszłości CLE może zostać połączone z cząsteczkowymi środkami kontrastowymi, takimi jak znakowane fluorescencyjnie peptydy15 i przeciwciała, w celu endoskopowego obrazowania procesów chorobowych ze specyficznością molekularną.

Obrazy CLE są zapisywane jako pliki sekwencji wideo w skali szarości z częstotliwością 12 klatek na sekundę. Interpretacja obrazu odbywa się w czasie rzeczywistym i może być wykorzystana do podejmowania decyzji klinicznych w ramach protokołu badawczego. Analiza offline, obejmująca przegląd sekwencji wideo, dodatkowe przetwarzanie obrazu, takie jak tworzenie mozaiki,7 oraz porównanie z patomorfologią standardową, jest istotna w fazie krzywej uczenia się związanej z tą technologią. Ryciny 1B i 1C przedstawiają r...

Sondowa konfokalna laserowa endomikroskopia umożliwia obrazowanie w czasie rzeczywistym dróg moczowych człowieka podczas cystoskopii, zapewniając dynamiczne obrazowanie intravitalne stanów patologicznych, takich jak rak pęcherza moczowego, z rozdzielczością komórkową. Endomikroskopia może zwiększyć dokładność diagnostyczną standardowej endoskopii w białym świetle oraz zapewnić śródoperacyjne prowadzenie obrazowe w celu usprawnienia resekcji chirurgicznej.

Sondowa konfokalna laserowa endomikroskopia dróg moczowych: Technika

Sondowa konfokalna laserowa endomikroskopia (CLE) to rozwijająca się technologia obrazowania optycznego, która umożliwia mikroskopię powierzchni błon śluzowych in vivo w czasie rzeczywistym...

Celem następującego eksperymentu jest zademonstrowanie mikroskopii in vivo z wykorzystaniem sondowej konfokalnej endomikroskopii laserowej u pacjenta poddawanego przezcewkowej resekcji guza pęcherza moczowego. Osiąga się to poprzez zastosowanie w pierwszym kroku cystoskopii w świetle białym w celu wizualizacji całego urothelium pęcherza oraz odnotowania wszelkich nieprawidłowych lub podejrzanych zmian błony śluzowej. W drugim kroku podaje się do światła pęcherza środek kontrastowy, zapewniając kontrast fluorescencyjny niezbędny do wizualizacji przy użyciu konfokalnego endomikroskopu laserowego, a w trzecim kroku przeprowadza się mikroskopię in vivo każdego obszaru zainteresowania i odnotowuje mikroarchitekturę komórkową oraz cechy naczyniowe tkanki.Ostatecznie wyniki mikroskopii in vivo można porównać z analizą histopatologiczną biopsji obszarów zainteresowania. Procedurę zaprezentuje dr Joseph Leal, chirurg urologiczny, który opracował zastosowanie sondowej konfokalnej laserowej endomikroskopii dla dróg moczowych w warunkach sali operacyjnej. Po umieszczeniu pacjenta w pozycji litotomicznej należy rozpocząć od wprowadzenia sztywnego cystoskopu przez cewkę moczową, wykorzystując standardową cystoskopię w świetle białym do obserwacji obszarów pęcherza moczowego w świetle białym.Oznacz obszary zainteresowania do konfokalnej laserowej endomikroskopii za pomocą pętli resekcyjnej. Na tym etapie można zastosować inne makroskopowe metody obrazowania optycznego, takie jak cystoskopia fluorescencyjna i obrazowanie wąskopasmowe (NBI), aby zidentyfikować dodatkowe obszary podejrzane, a następnie wprowadź do pęcherza moczowego sterylny cewnik moczowy, używając strzykawki 60 ml do wprowadzenia cewnika. Wprowadź rozcieńczony środek kontrastowy metodą grawitacyjną.Następnie zaklemuj cewnik moczowy, aby zatrzymać środek kontrastowy w pęcherzu. Po pięciu minutach odprowadź środek z pęcherza. Następnie wlej od 240 do 300 ml soli fizjologicznej do strzykawki o pojemności 60 ml, aby wypłukać resztki kontrastu z pęcherza przed dożylnym wstrzyknięciem fluoresceiny.Naciągnij jeden mililitr fluoresceiny do strzykawki. Podłącz strzykawkę do punktu dostępu dożylnego i wstrzyknij 0,5 do jednego mililitra fluoresceiny dożylnie w formie bolusa, przepłukując linię solą fizjologiczną. Po podaniu środka kontrastowego wyjmij ze opakowania sterylną sondę do obrazowania konfokalną laserową endomikroskopią i podłącz ją do jednostki skanowania laserowego.Następnie rozgrzej i skalibruj sondę obrazującą zgodnie z instrukcjami producenta, a potem ponownie wprowadź sztywny cystoskop z soczewką zero-stopniową do pęcherza moczowego. Teraz przesuń sondę do konfokalnej endomikroskopii obrazującej wzdłuż kanału roboczego cystoskopu, tak aby jej końcówka znajdowała się tuż poza cystoskopem w świetle białym. Zlokalizuj wcześniej zaznaczone obszary zainteresowania podczas skanowania tych obszarów przez sondę obrazującą.Zarejestruj obrazy do późniejszej analizy. Następnie, za pomocą dłoni operatora, manipuluj obrazowaniem w konfokalnej endomikroskopii. Przeskanuj bezpośrednio obszary zainteresowania w szybkim kontakcie w celu wykonania sekcji optycznych tych obszarów.Delikatnie zwiększaj i zmniejszaj nacisk na sondę obrazującą, utrzymując bezpośredni kontakt, aby dotrzeć do guzów zlokalizowanych wewnątrz pęcherza. Użyj standardowego zgięcia i mostka AL, aby ułatwić odchylenie sondy obrazującej w celu zapewnienia bezpośredniego kontaktu z obszarem zainteresowania. W razie potrzeby pobierz biopsje mrożone z odpowiednich obszarów zainteresowania, które zostały przeskanowane za pomocą konfokalnej laserowej endomikroskopii.Po zakończeniu obrazowania wyjmij sondę do konfokalnej endomikroskopii z kanału roboczego. Podczas wykonywania tej procedury należy pamiętać o wypłukaniu nadmiaru fluoresceiny z pęcherza przed przystąpieniem do obrazowania oraz o utrzymaniu kąta kontaktu 90 stopni między sondą a powierzchnią błony śluzowej. Ten pierwszy obraz pochodzi z reprezentacyjnej cystoskopii w świetle białym z obrazem guza brodawkowatego z barwieniem wewnątrznaczyniowym.Należy zwrócić uwagę na widoczną na dole obrazu sondę obrazującą o średnicy 2,6 mm. Te dwa obrazy są reprezentatywnymi obrazami z konfokalnej laserowej endomikroskopii, uzyskanymi z dwóch różnych guzów pęcherza moczowego przy użyciu odpowiednio wewnątrz pęcherzowej i dożylnej fluoresceiny. Biorąc pod uwagę, że sondy obrazujące mogą być wymieniane między różnymi typami cystoskopów, konfokalna laserowa endomikroskopia może być łączona z innymi pojawiającymi się metodami obrazowania, co może poprawić dokładność diagnostyczną każdej z tych technologii stosowanych osobno, w tym cystoskopii fluorescencyjnej, jak pokazano tutaj, oraz obrazowania wąskopasmowego (NBI), jak pokazano tutaj.Taka metoda może dostarczyć cennych informacji na temat raka pęcherza moczowego. Może ona zostać zastosowana w odniesieniu do innych układów, takich jak raki urothelialne górnych dróg moczowych, których diagnoza na podstawie biopsji może być utrudniona.

probe-based-confocal-laser-endomicroscopy-urinary-tract

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Endomikroskopia konfokalna z sondą do oceniania przewodów moczowych: technika

Opisano pełną konstrukcję niestandardowego systemu obrazowania konfokalnego z przeskanowaniem w czasie rzeczywistym. System ten, który może być łatwo wykorzystany do mikroskopii i mikroendoskopii w tempie wideo, umożliwia zastosowanie szeregu geometrii obrazowania i aplikacji niedostępnych w standardowych komercyjnych systemach konfokalnych, przy ułamku ich kosztów.

Skaningowa mikroskopia konfokalna w czasie rzeczywistym i mikroendoskopia

Ten film pokazuje wizualizację bakterii w odparafinowanej tkance pęcherza moczowego od pacjenta zakażonego drogami moczowymi. Znakowana fluorescencyjnie sonda zhybrydyzowana z bakteryjnymi 16-sowymi rybosomalnymi RNA ujawnia bakterie związane z tkankami i ich rozmieszczenie, dostarczając cennych informacji przestrzennych na temat ich gęstości w próbce.

Wizualizacja bakterii w skrawkach biopsji pęcherza moczowego za pomocą fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ

Ta technika opisuje efektywny proces przesiewowy do oceny specyficznych dla bakterii środków obrazowania optycznego w tkance płuc ex vivo ludzkiej, za pomocą światłowodowej konfokalnej mikroskopii fluorescencyjnej w celu szybkiej identyfikacji kandydatów na sondy chemiczne o małym potencjale translacyjnym.

Optyczne badania przesiewowe nowych sond specyficznych dla bakterii na ludzkiej tkance płucnej ex vivo za pomocą konfokalnej endomikroskopii laserowej

Opisujemy użycie ultradźwięków o wysokiej częstotliwości z obrazowaniem kontrastowym jako metody pomiaru objętości pęcherza, grubości ściany pęcherza, prędkości moczu, objętości miki, czasu trwania miki i średnicy cewki moczowej. Strategia ta może być stosowana do oceny dysfunkcji mikcji i skuteczności leczenia w różnych mysich modelach dysfunkcji dolnych dróg moczowych (LUTD).

Ultrasonografia dróg moczowych dorosłego mężczyzny w celu badania czynnościowego moczu

Ten protokół służy do bezstronnego wykrywania bakterii związanych z tkankami w biopsjach pacjentów za pomocą hybrydyzacji in situ 16S rRNA i mikroskopii konfokalnej.

Wykrywanie bakterii rezydujących w tkankach w biopsjach pęcherza moczowego za pomocą fluorescencji 16S rRNA Hybrydyzacja in situ

Korzystając z mikroskopii przyżyciowej, przedstawiona tutaj metoda umożliwia wizualizację w czasie rzeczywistym wydalania komórek nabłonka jelitowego u żywych zwierząt. W związku z tym miejscowo wybarwiona błona śluzowa jelit (akryflawina i rodamina B-dekstran) znieczulonych myszy jest obrazowana do rozdzielczości pojedynczej komórki za pomocą mikroskopii konfokalnej.

Podejście oparte na mikroskopii przyżyciowej do oceny przepuszczalności jelit i wydajności wydalania komórek nabłonkowych

Pokazano mysi model przezcewkowej inokulacji uropatogennej E. coli (UPEC) w celu stworzenia utajonych wewnątrzkomórkowych zbiorników pęcherza moczowego, a następnie ekspozycji pęcherza moczowego na G. vaginalis w celu wywołania nawrotu UPEC UTI. Zademonstrowano również liczenie bakterii, cytologię moczu oraz utrwalanie i przetwarzanie pęcherza moczowego in situ w skaningowej mikroskopii elektronowej.

Nawracające zakażenie dróg moczowych Escherichia coli wywołane ekspozycją pęcherza moczowego Gardnerella vaginalis u myszy

Ten manuskrypt opisuje dopęcherzowe podawanie bakterii uropatogennych za pomocą operonu luksa w celu wywołania infekcji dróg moczowych u myszy i późniejszą podłużną analizę in vivo obciążenia bakteryjnego za pomocą obrazowania bioluminescencyjnego.

Podłużna obserwacja zakażeń dróg moczowych i ich leczenie u myszy za pomocą obrazowania bioluminescencyjnego

Ten protokół opisuje procedurę pomiaru stężenia ATP w świetle pęcherza moczowego u znieczulonego gryzonia.

In vivo (in vivo) Pomiar luminalny wywołanego rozdęciem urotelialnego uwalniania ATP u gryzoni

Ten protokół opisuje metodologię oceny funkcji mechanicznie aktywowanych kanałów jonowych w natywnych komórkach urotelialnych za pomocą fluorescencyjnego czujnika Ca2+ GCaMP5G.

Ex vivo Analiza mechanicznie aktywowanych stanów nieustalonychCa2+ w komórkach urotelialnych

Poznaj technikę konfokalnej endomikroskopii laserowej opartej na sondzie do obrazowania dróg moczowych u pacjentów z nowotworami pęcherza. Metoda umożliwia wizualizację komórkową w czasie rzeczywistym, poprawiając diagnostykę i precyzję resekcji chirurgicznej.

Sondowa konfokalna laserowa endomikroskopia dróg moczowych: Technika

Przeglądaj więcej filmów