Donosowe podawanie leków OUN obudzonym myszom

Ogólnym celem tej procedury jest ukierunkowanie leków na ośrodkowy układ nerwowy za pomocą podawania donosowego u myszy bez znieczulenia. Osiąga się to poprzez uprzednie przyzwyczajenie myszy do obsługi. Drugim krokiem jest użycie zmodyfikowanego chwytu karku w celu unieruchomienia głowy zwierzęcia.

Kolejne kropelki leku podaje się donosowo za pomocą pipety. W ostatnim kroku mysz wraca do klatki z nagrodą. Głównymi zaletami tej techniki jest to, że podawanie donosowe jest ukierunkowane na leki do ośrodkowego układu nerwowego bez ekspozycji ogólnoustrojowej, a wybudzenie donosowe dostarczanie leków pozwala na przewlekłe leczenie u myszy bez znieczulenia.

Metoda ta może być wykorzystana do udzielenia odpowiedzi na kluczowe pytania w opracowywaniu leków stosowanych w leczeniu chorób neurologicznych. Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które dopiero zaczynają korzystać z tej metody, będą miały trudności, ponieważ trudno jest bezpiecznie trzymać usta, aby zapobiec ruchom głowy. Wizualna demonstracja tej metody ma kluczowe znaczenie, ponieważ ułożenie palców w celu prawidłowego chwytu jest kluczowe i trudne do wyjaśnienia za pomocą tekstu i zdjęć Dwa do czterech tygodni przed podaniem donosowym należy przyzwyczaić myszy do obsługi, wykonując następujące kroki przez dwa do trzech dni, z których każdy potwierdza, że mysz nie wykazuje oznak stresu przed przejściem do następnego kroku.

W pierwszym kroku aklamacji umieść mysz w dłoni na okres od dwóch do trzech minut. Nie więcej niż jedną stopę nad klatką. Następnie umieść mysz w dłoni na trzy minuty i delikatnie głaszcz zwierzę od głowy do ogona, pozwalając zwierzęciu swobodnie się poruszać.

Gdy zwierzę zacznie tolerować pieszczoty, umieść mysz w dłoni na trzy minuty, a następnie użyj kciuka i palca wskazującego, aby delikatnie ścisnąć skórę z tyłu szyi zwierzęcia. Aby wykonać następny krok aklimatyzacji, podnieś mysz za kark na 30 sekund. Następnie pozwól zwierzęciu odpocząć na górze klatki przez kolejne 30 sekund, zanim ponownie powtórzysz trzymanie.

Teraz poćwicz chwyt donosowy, najpierw używając kciuka i palca wskazującego dominującej ręki, aby przytrzymać mysz za ogon. Następnie użyj środkowego palca serdecznego i małego palca, aby delikatnie przypiąć dolną część ciała zwierzęcia do klatki. Niech mysz chwyci się prętów, lekko rozciągając zwierzę, aby lepiej chwycić kark.

Używając kciuka i środkowego palca na niedominującej ręce, przystąp do mocnego ściskania myszy w kark za szyją i ramionami, podciągając luźną skórę górnej części pleców, aby utworzyć namiot w poprzek łopatek. Następnie szybko połóż palec wskazujący ręki niedominującej na głowie myszy jak najbliżej nosa i pociągnij do tyłu. W tym samym czasie przesuń kciuk i środkowe palce w kierunku głowy, aby uzyskać optymalną pozycję.

Idealnie byłoby, gdyby mysz nie była w stanie poruszać głową w pionie ani w poziomie. Podczas następnej sesji wykonaj chwyt donosowy, jak właśnie pokazano. Tym razem odwracamy zwierzę tak, aby jego brzuszna strona była skierowana w stronę sufitu, a szyja była równoległa do podłogi.

Gdy mysz poczuje się komfortowo z odwróconym uchwytem donosowym, poćwicz krótkie umieszczanie mikropipety z pustą końcówką w pobliżu każdego nozdrza. Na koniec podaj sześć mikrolitrów soli fizjologicznej, najpierw tylko do jednego nozdrza, a następnie w następnej sesji do obu, korzystając z procedury donosowego podawania leku, która została w pełni zademonstrowana w następnej sekcji przed rozpoczęciem donosowego podawania leku. Najpierw ustaw klatki i przyrządy dozujące tak, aby były łatwo dostępne.

Następnie wyjmij pierwszą mysz z klatki i użyj właśnie zademonstrowanego chwytu donosowego, aby podnieść zwierzę. Następnie, używając dominującej ręki, załaduj do mikropipety sześć mikrolitrów leku. Umieść końcówkę napełnionej pipety w pobliżu lewego nozdrza myszy pod kątem 45 stopni.

Następnie powoli wyrzuć lek, aby utworzyć małą kropelkę o około połowie objętości w końcówce, umieść kroplę na tyle blisko nozdrza myszy, aby mysz mogła ją wdychać natychmiast po wdychaniu kropli przez mysz, wyrzuć resztę leku w końcówce pipety, aby utworzyć kolejną małą kropelkę, którą mysz może wdychać przez to samo nozdrze około dwie do trzech sekund później, Przytrzymaj mysz w tej pozycji przez 15 sekund, a następnie podaj lek do prawego nozdrza w ten sam sposób. Teraz umieść mysz z powrotem na klatce na dwie minuty, a następnie ponownie podaj lek do obu nozdrzy, jak właśnie wykazano, dokładnie dwie minuty po podaniu do pierwszego nozdrza, aby podać dawkę jednej lub dwóm myszom jednocześnie. Ten przykładowy schemat można postępować po otrzymaniu przez mysz pełnej dawki leku.

Umieść zwierzę z powrotem w klatce. Po każdej sesji aklimatyzacji lub dozowania donosowego myszom należy podać smakołyk, taki jak cheerio, jako pozytywne wzmocnienie w celu zmniejszenia stresu, zawsze przywracaj gniazda do ich pierwotnego stanu przed powrotem zwierząt do klatek, zmieniaj rękawiczki między klatkami podczas dawkowania zwierzętom trzymanym w grupie, aby nie przenosić zapachu z kolonii klatki do kolonii klatki, co wywołałoby agresywne zachowanie partnera w klatce. Po opanowaniu jedna osoba może podać donosowo lek 15 do 20 myszy w ciągu jednej godziny, próbując tej procedury z więcej niż jedną myszą na raz.

Ważne jest, aby podjąć środki ostrożności, aby zapobiec przypadkowej zmianie klatek przez myszy. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak stosować podawanie donosowe u myszy bez znieczulenia. Do kierowania leków do ośrodkowego układu nerwowego.

Pamiętaj, aby zawsze zachowywać środki ostrożności podczas pracy z myszami, takie jak noszenie maski i rękawiczek N95, aby zapobiec narażeniu na alergeny.