Name: Pomiar dotykowej allodynii w mysim modelu bakteryjnego zapalenia gruczołu krokowego (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: Poznaj metodę pomiaru dotykowej allodynii w modelu bakteryjnego zapalenia gruczołu krokowego u myszy. Protokół obejmuje infekcję UPEC przez cewnikowanie cewki moczowej oraz behawioralne testy bólu filamentami von Frey.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie było wspierane przez grant 1K01DK079019A2 (P.T.) od NIH/NIDDK.

1. Przygotowanie bakterii do inokulacji myszy
Następujące czynności muszą być wykonane w warunkach aseptycznych.
<ol>
	<li>Weź jedną probówkę polipropylenową o wymiarach 17 x 100 mm z nakrętkami i dodaj 3 ml świeżego bulionu Luria (LB). Używając autoklawowanych końcówek, weź trochę zamrożonego zapasu glicerolu bakteryjnego szczepu CP12 i przenieś niewielką ilość kultury do probówki zawierającej pożywkę LB. Załóż nasadkę probówki, aby tlen nadal mógł dostać się do probówki - kultura musi rosnąć w warunkach tlenowych. Umieścić probówkę w temperaturze 37 °C w inkubatorze z wytrząsaniem z prędkością 220 obr./min na noc.</li>
	<li>Następnego dnia przenieść 5 μl kultury przez noc do świeżej probówki z 3 ml pożywki LB i hodować w warunkach statycznych w inkubatorze przez noc w temperaturze 37 °C.</li>
	<li>W dniu 3 przenieść 40 μl kultury do probówki o pojemności 50 ml zawierającej po 40 ml pożywki LB. Umieścić na noc w inkubatorze statycznym o temperaturze 37 °C.</li>
	<li>Włączyć i ustawić wirówkę na 4 °C. Gdy wirówka osiągnie temperaturę końcową, przenieś każdą 40 ml kultury do probówki wirówkowej Nalgene o pojemności 40 ml.</li>
	<li>Zważ probówki, aby zrównoważyć wirówkę - w razie potrzeby dostosuj objętość za pomocą pożywki LB. Wirować rurki z prędkością 6 000 obr./min przez 20 min.</li>
	<li>Ostrożnie usunąć supernatant i delikatnie zawiesić osad bakteryjny w 40 ml sterylnego PBS.</li>
	<li>Powtórz krok 1.5 z PBS.</li>
	<li>Odessać supernatant i zawiesić bakterie w 500 μl sterylnego PBS. Przenieść roztwór do probówki do mikrofuge o pojemności 1,5 ml. Pobrać 10 μl zawiesiny i rozcieńczyć w 990 μl lodowatego PBS. Użyj spektrofotometru, aby odczytać OD420 nm, aby określić objętość potrzebną do inokulacji. Aby określić odpowiednią objętość lodowatego PBS do zawieszenia osadu: Weź liczbę OD420 nm (w ml) i odejmij szacowaną objętość osadu bakteryjnego [np. OD420 nm = 0,545, osad około 0,075 ml. 0,545 - 0,075 = 0,470].</li>
	<li>Usunąć 10 μl zawiesiny bakteryjnej i rozcieńczyć w 990 μl lodowatego PBS. Odczytać OD420 nm. Celem jest osiągnięcie wartości OD420 nm dla rozcieńczonej zawiesiny 1.000 ± .010. Jeśli liczba rozcieńczenia jest wyższa od tego celu, dodać więcej objętości do zawiesiny i wykonać kolejny odczyt. Jeśli liczba jest poniżej .990, odkręć zawieszenie i powtarzaj odczyt OD420 nm, aż do uzyskania żądanego odczytu.</li>
</ol>
2. Zakażenie zwierząt
Myszy (5 do 7 tygodni, dziesięć na grupę) zostały zakupione w Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME).
<ol>
	<li>Myszy są znieczulane przez wdychanie 1-4% izofluranu w komorze z pleksiglasu i monitorowane do momentu leżenia.</li>
	<li>Jedna mysz na raz jest pobierana do wkraplania bakterii przez cewnikowanie cewnikiem polietylenowym (PE10) przymocowanym do zmodyfikowanej igły 30 G szklanej strzykawki Hamiltona (długość 1,5-2,0 cm). Cewnik wprowadza się do piasty igły. Mysz umieszcza się na jej grzbietowej powierzchni w znieczuleniu podtrzymywanym za pomocą stożka nosowego.</li>
	<li>Penis myszy jest wytłaczany przez delikatny nacisk, a duże ilości lubrykantu na wacikach są używane do smarowania wejścia do cewki moczowej prącia.</li>
	<li>10 μl buforowanej fosforanem soli fizjologicznej zawierającej 1 x 108 bakterii wprowadza się do cewki moczowej znieczulonych myszy po cewnikowaniu.</li>
	<li>Myszy są utrzymywane w stanie znieczulonym przez 15 minut w komorze z pleksiglasu po wprowadzeniu bakterii, aby umożliwić przyczepienie się bakterii i zapobiec natychmiastowemu oddawaniu moczu.</li>
	<li>Myszy są umieszczane z powrotem w klatkach i monitorowane przez następne 24 godziny.</li>
</ol>
3. Testowanie zachowania
Myszy były testowane przed zakażeniem (wartość wyjściowa) oraz w dniach 3, 7, 14, 21 i 28 po zakażeniu. Wspomniana hiperalgezja i allodynia dotykowa badano przy użyciu włókien von Freya nałożonych na brzuch11,12 i okolicę podeszwową tylnej łapy13. Testy przeprowadzano o ustalonej porze dnia, stosowano standardową metodologię i stosowano testy na wszystkich zwierzętach przeprowadzane przez jednego eksperymentatora. Zaślepione testy grup wykorzystano do zwalczania ograniczeń testów bólu opartych na zachowaniu w modelach zwierzęcych. Pięć pojedynczych włókien von Freya o siłach 0,04, 0,16, 0,4, 1,0 i 4,0 g (Stoelting, USA) przyłożono do brzucha i obliczono częstość reakcji odstawienia.
<ol>
	<li>Po 30-minutowym okresie aklimatyzacji myszy umieszcza się w indywidualnych komorach z pleksiglasu (6 x 10 x 12 cm) wykonanych we własnym zakresie z podłogą z siatki ze stali nierdzewnej.</li>
	<li>Hiperalgezja referowana i allodynia dotykowa zostały przetestowane przy użyciu pięciu włókien von Freya. Każde włókno przykładano przez 1-2 sekundy z odstępem między bodźcami wynoszącym 5 sekund, w sumie 10 razy, a włosy testowano w rosnącej kolejności siły.</li>
	<li>Każde włókno jest nakładane na dolną część brzucha w ogólnym sąsiedztwie prostaty i dołożono starań, aby stymulować różne obszary w tym regionie, aby uniknąć efektu odczulania lub "nakręcania". Filamenty przykładano w rosnącej kolejności siły przez 1-2 sekundy z co najmniej 5-sekundowymi przerwami między stymulacjami, w sumie 10 razy.</li>
	<li>Trzy rodzaje zachowań są uważane za pozytywną reakcję na stymulację włóknami: 1) ostre cofnięcie brzucha; 2) natychmiastowe lizanie lub drapanie obszaru stymulacji filamentu; 3) Skakanie.</li>
	<li>Częstość odpowiedzi obliczono jako odsetek odpowiedzi pozytywnych (na 10, np. 5 odpowiedzi na 10 = 50%), a dane podano jako średni odsetek częstości odpowiedzi ± SE</li>
	<li>Zwierzęta, u których uzyskano więcej niż 25 dodatnich całkowitych odpowiedzi wyjściowych, są wykluczone z badania.</li>
	<li>Dotykowa allodynia została przetestowana na okolicy podeszwowej tylnej łapy przy użyciu włókien von Freya o siłach 0,04, 0,16, 0,4, 1,0 i 4,0 g. Medianę progu wycofania wynoszącą 50% (5) oceniono przy użyciu metody góra-dół, w której badanie rozpoczęto od 0,04 g włókna nałożonego prostopadle do podeszwowej powierzchni tylnej łapy, aż włókno lekko się ugięło. Filamenty testowano w kolejności rosnącej, aż do momentu zaobserwowania pozytywnej odpowiedzi. Pozytywna reakcja na filament została zdefiniowana jako gwałtowne wycofanie łapy lub lizanie łapy testowej. Gdy zarejestrowano pozytywną odpowiedź, przykładano następny słabszy filament, a jeśli zaobserwowano negatywną odpowiedź, przykładano następny silniejszy filament.</li>
	<li>Opisane eksperymenty i metodologia zostały zrecenzowane i zatwierdzone przez komitet ds. opieki nad zwierzętami i ich wykorzystania na Uniwersytecie Northwestern.</li>
</ol>

<ol><li>Yamamoto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+epidemiology+of+uropathogenic+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+infection+and+chemotherapy+official+journal+of+the+Japan+Society+of+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Molecular epidemiology of uropathogenic Escherichia coli.</a> Journal of infection and chemotherapy official journal of the Japan Society of Chemotherapy. 13, 68-73 (2007).</li>
<li>Rudick, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uropathogenic+Escherichia+coli+induces+chronic+pelvic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Uropathogenic Escherichia coli induces chronic pelvic pain.</a> Infect. Immun. 79, 628-635 (2011).</li>
<li>Pontari, M. A., Ruggieri, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+in+prostatitis%2Fchronic+pelvic+pain+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+urology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms in prostatitis/chronic pelvic pain syndrome.</a> The Journal of urology. 172, 839-845 (2004).</li>
<li>Schaeffer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice.+Chronic+prostatitis+and+the+chronic+pelvic+pain+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+journal+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Clinical practice. Chronic prostatitis and the chronic pelvic pain syndrome.</a> The New England journal of medicine. 355, 1690-1698 (2006).</li>
<li>Rudick, C. N., Schaeffer, A. J., Thumbikat, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+autoimmune+prostatitis+induces+chronic+pelvic+pain.+American+journal+of+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Regulatory%2C+integrative+and+comparative+physiology%22%5BJournal%5D)">Experimental autoimmune prostatitis induces chronic pelvic pain. American journal of physiology.</a> Regulatory, integrative and comparative physiology. 294, R1268-R1275 (2008).</li>
<li>Elkahwaji, J. E., Ott, C. J., Janda, L. M., Hopkins, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+for+acute+bacterial+prostatitis+in+genetically+distinct+inbred+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Mouse model for acute bacterial prostatitis in genetically distinct inbred strains.</a> Urology. 66, 883-887 (2005).</li>
<li>Hultgren, S. J., Porter, T. N., Schaeffer, A. J., Duncan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+type+1+pili+and+effects+of+phase+variation+on+lower+urinary+tract+infections+produced+by+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Role of type 1 pili and effects of phase variation on lower urinary tract infections produced by Escherichia coli.</a> Infect. Immun. 50, 370-377 (1985).</li>
<li>Jarrell, J., Giamberardino, M. A., Robert, M., Nasr-Esfahani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bedside+testing+for+chronic+pelvic+pain%3A+discriminating+visceral+from+somatic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain+research+and+treatment%22%5BJournal%5D)">Bedside testing for chronic pelvic pain: discriminating visceral from somatic pain.</a> Pain research and treatment. 2011, 692102(2011).</li>
<li>Jarrell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+Cutaneous+Allodynia+in+Association+with+Chronic+Pelvic+Pain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Demonstration of Cutaneous Allodynia in Association with Chronic Pelvic Pain.</a> J. Vis. Exp. (28), e1232(2009).</li>
<li>Giamberardino, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viscero-visceral+hyperalgesia%3A+characterization+in+different+clinical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Viscero-visceral hyperalgesia: characterization in different clinical models.</a> Pain. 151, 307-322 (2010).</li>
<li>Laird, J. M., Martinez-Caro, L., Garcia-Nicas, E., Cervero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+visceral+pain+and+referred+hyperalgesia+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A new model of visceral pain and referred hyperalgesia in the mouse.</a> Pain. 92, 335-342 (2001).</li>
<li>Laird, J. M., Souslova, V., Wood, J. N., Cervero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficits+in+visceral+pain+and+referred+hyperalgesia+in+Nav1.8+%28SNS%2FPN3%29-null+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Deficits in visceral pain and referred hyperalgesia in Nav1.8 (SNS/PN3)-null mice.</a> J. Neurosci. 22, 8352-8356 (2002).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of neuroscience. 53, 55-63 (1994).</li>
<li>Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+type+1+pilus+expression+in+Escherichia+coli+to+ascending+urinary+tract+infections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice.</a> Infect. Immun. 55, 373-380 (1987).</li>
<li>Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+bacterial+inflammation+of+the+mouse+prostate%5BTitle%5D)+AND+%22The+Prostate%22%5BJournal%5D)">Acute bacterial inflammation of the mouse prostate.</a> The Prostate. 72, 307-317 (2012).</li>
<li>Rivero, V. E., Cailleau, C., Depiante-Depaoli, M., Riera, C. M., Carnaud, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-obese+diabetic+%28NOD%29+mice+are+genetically+susceptible+to+experimental+autoimmune+prostatitis+%28EAP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+autoimmunity%22%5BJournal%5D)">Non-obese diabetic (NOD) mice are genetically susceptible to experimental autoimmune prostatitis (EAP).</a> Journal of autoimmunity. 11, 603-610 (1998).</li>
<li>Pakarainen, T., Zhang, F. P., Makela, S., Poutanen, M., Huhtaniemi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testosterone+replacement+therapy+induces+spermatogenesis+and+partially+restores+fertility+in+luteinizing+hormone+receptor+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Testosterone replacement therapy induces spermatogenesis and partially restores fertility in luteinizing hormone receptor knockout mice.</a> Endocrinology. 146, 596-606 (2005).</li>
<li>Taguchi, O., Kojima, A., Nishizuka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+autoimmune+prostatitis+after+neonatal+thymectomy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+experimental+immunology%22%5BJournal%5D)">Experimental autoimmune prostatitis after neonatal thymectomy in the mouse.</a> Clinical and experimental immunology. 60, 123-129 (1985).</li>
</ol>

Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Zakażenie mysiej prostaty UPEC pozwala na modelowanie in vivo zdarzeń, które mogą być zaangażowane w patogenezę bakteryjnego zapalenia gruczołu krokowego, CP/CPPS lub jako zdarzenie predysponujące do przewlekłego stanu zapalnego. Opisane metody przygotowania i wkraplania bakterii opierają się na obszernej literaturze na temat modeli UPEC w zakażeniach dróg moczowych u kobiet7,14. Model ten ma szerokie zastosowanie w badaniu patogenezy, testowaniu potencjalnych kandydatów na szczepionki i mechanizmach ...

<table><tbody><tr><td>Probówki</td><td>hodowlane BD Falcon</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>LB Bulion Miller</td><td>EMD</td><td>EM1.10285.0500</td><td></td></tr><tr><td>Probówki wirówkowe Nalgene</td><td>Thermo</td><td>3118-0050</td><td></td></tr><tr><td>Izofluran</td><td>Butler Schein</td><td>NDC 11695-6776-1</td><td></td></tr><tr><td>Igła do cewnika 30G</td><td>Rurka Hamilton</td><td>91030</td><td></td></tr><tr><td>PE10</td><td>BD intramedic</td><td>427400</td><td></td></tr><tr><td>Von Frey</td><td>Filaments Stoelting</td><td>58025-31</td><td></td></tr></tbody></table>

pomiar dotykowej allodynii w mysim modelu bakteryjnego zapalenia gruczołu krokowego

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

Uropatogenne Escherichia coli (UPEC) to patogeny, które odgrywają ważną rolę w infekcjach dróg moczowych i bakteryjnym zapaleniu gruczołu krokowego1. Niedawno wykazaliśmy, że UPEC odgrywają ważną rolę w inicjacji przewlekłego bólu miednicy2, który jest cechą przewlekłego zapalenia gruczołu krokowego/zespołu przewlekłego bólu miednicy (CP/CPPS)3,4. Zakażenie gruczołu krokowego przez klinicznie istotny UPEC może zainicjować i wywołać przewlekły ból poprzez mechanizmy, które mogą wiązać się z uszkodzeniem tkanek i inicjacją mechanizmów autoimmunizacji5.
Wyzwaniem dla zrozumienia patogenezy UPEC w prostacie jest względna niedostępność gruczołu krokowego do manipulacji. Wykorzystaliśmy wcześniej opisaną metodę infekcji cewki moczowej6, aby dostarczyć kliniczny szczep UPEC do samców myszy, ustanawiając w ten sposób wstępującą infekcję prostaty. Tutaj opisujemy nasze protokoły standaryzacji inokulum bakteryjnego7, a także procedurę cewnikowania znieczulonych samców myszy w celu wkroplenia bakterii.
CP/CPPS charakteryzuje się przede wszystkim obecnością dotykowej allodynii4. Testy behawioralne opierały się na koncepcji przeczulicy skórnej wynikającej z bólu trzewnego8-10. Drażliwe skupienie w tkankach trzewnych zmniejsza próg bólu skórnego, co pozwala na nadmierną reakcję na normalnie niebolesne bodźce (allodynia). Przyłożenie normalnej siły do skóry powoduje nieprawidłowe reakcje, które mają tendencję do zwiększania się wraz z intensywnością leżącego u podstaw bólu trzewnego. Opisujemy metodologię u myszy NOD / ShiLtJ, które wykorzystują włókna von Freya do ilościowego oznaczania allodynii dotykowej w czasie w odpowiedzi na pojedynczą infekcję bakteriami UPEC.

Zbadaliśmy obecność przewlekłego bólu po infekcji bakteryjnej u samców myszy szczepów NOD/ShiLtj oraz C57BL/6J. Do cewki moczowej samców myszy (w wieku od 5 do 7 tygodni) wprowadzono sól fizjologiczną lub bakterie (Rycina 1). Stymulacja mechaniczna obszaru miednicy za pomocą filamentów von Frey u myszy C57BL/6J po podaniu soli fizjologicznej oraz u myszy C57BL/6J zainfekowanych UPEC skutkowała częstotliwością odpowiedzi, która nie uległa zmianie w ciągu 28-dniowego przebiegu eksperymentu (Rycina ...

Infekcja prostaty może być czynnikiem przyczyniającym się do pośredniczenia w bólu miednicy w przewlekłym zapaleniu gruczołu krokowego. Opisujemy procedurę przygotowania standaryzowanego inokulum bakteryjnego, wkraplania bakterii do cewki moczowej samców myszy oraz metodologii pomiaru allodynii dotykowej u myszy w czasie.

Pomiar dotykowej allodynii w mysim modelu bakteryjnego zapalenia gruczołu krokowego

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently ...

Ogólnym celem tej procedury jest pomiar allydii dotykowej u myszy wynikającej z infekcji bakteryjnej prostaty. Osiąga się to poprzez przygotowanie najpierw zawiesiny bakteryjnej do instalacji u samca myszy, który jest umieszczany pod narkozą. Drugim krokiem jest delikatne wyciśnięcie penisa myszy, a następnie cewnikowanie wewnątrzcewkowe.Następnie wkrapiane są bakterie, które inicjują narastającą infekcję prostaty myszy. Ostatnim krokiem jest pomiar allodynii dotykowej po zakażeniu. Ostatecznie, zwiększona częstotliwość odpowiedzi na włókna vray nałożone na obszar miednicy jest wykorzystywana do wykazania wzmocnionej dotykowej elo DIA obszaru miednicy w odpowiedzi na bakteryjne zapalenie gruczołu krokowego.Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak zapalenie gruczołu krokowego wywołane hormonami lub autoimmunologiczne zapalenie gruczołu krokowego, jest to, że wykorzystuje klinicznie nieistotne bakterie i naturalną metodologię infekcji wstępującej, które są naprawdę ważne dla patogenezy choroby prostaty, Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które są nowe w tej metodzie, będą zmagać się z powodu niezdolności do konsekwentnego rejestrowania pozytywnych reakcji

measurement-tactile-allodynia-murine-model-bacterial

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Ocena allodynii dotykowej w myszym modelu bakteryjnego zapalenia gruczołu krokowego

Elektroniczne pomiary von Freya są skuteczną i ulepszoną alternatywą dla klasycznych filamentów von Freya, ponieważ pozwalają na szybki i precyzyjny pomiar zmian w progach mechanicznego wycofywania gryzoni do stale stosowanych bodźców ciśnieniowych przed i po zdarzeniu zapalnym.

Pomiar zmian wrażliwości dotykowej w tylnej łapie myszy za pomocą elektronicznego aparatu von Freya

Opisujemy protokół do badania rozwoju hiperalgezji i tolerancji wywołanej opioidami u myszy. Opierając się na pomiarze termicznych i mechanicznych reakcji nocyceptywnych zwierząt nieleczonych morfiną i leczonych morfiną, pozwala na ilościowe określenie wzrostu wrażliwości na ból (hiperalgezja) i spadku analgezji (tolerancji) związanego z przewlekłym podawaniem opiatów.

Ocena hiperalgezji wywołanej morfiną i tolerancji przeciwbólowej u myszy przy użyciu termicznych i mechanicznych modalności nocyceptywnych

Ból neuropatyczny jest konsekwencją uszkodzenia lub choroby wpływającej na układ somatosensoryczny. "Model mankietowy" bólu neuropatycznego u myszy polega na wszczepieniu mankietu polietylenowego wokół głównej gałęzi nerwu kulszowego. Mechaniczna allodynia jest testowana przy użyciu filamentów von Freya.

Model kajdanki nerwu kulszowego bólu neuropatycznego u myszy

Mierzymy obwodowo-płciową wrażliwość mechaniczną i aktywację komórek tucznych u samców myszy C57BL/6, które przeszły paradygmat stresu we wczesnym okresie życia - separację noworodków od matek, w celu wywołania przedklinicznego modelu przewlekłego zapalenia gruczołu krokowego/przewlekłego bólu miednicy.

Ocena wrażliwości okołopłciowej i aktywacji komórek tucznych gruczołu krokowego w mysim modelu separacji noworodków od matek

Dostarczony jest tutaj protokół, który szczegółowo opisuje kroki prowadzące do stworzenia zwierzęcego modelu przewlekłego bólu po niedokrwieniu (CPIP). Jest to dobrze rozpoznawalny model naśladujący ludzki złożony zespół bólu regionalnego typu I. Dalej oceniane są nadwrażliwości mechaniczne i termiczne, a także zachowania nocyfensywne wywołane kapsaicyną obserwowane w modelu szczurzym CPIP.

Model przewlekłego bólu po niedokrwieniu złożonego zespołu bólu regionalnego typu I u szczurów

Aby opracować nowatorskie interwencje terapeutyczne w celu zapobiegania i leczenia bólu pleców, potrzebne są modele zwierzęce, które zbadają mechanizmy i skuteczność tych terapii z perspektywy translacyjnej. Niniejszy protokół opisuje test BMS, znormalizowaną metodę oceny wrażliwości mechanicznej pleców u szczura.

Ocena wrażliwości mechanicznej pleców u szczura do mechanistycznego badania przewlekłego bólu pleców

Metody prostej, szybkiej indukcji modelu bólu pleców u myszy są tutaj dostępne za pomocą iniekcji aktywatora plazminogenu w moczu do wnętrza więzadła.

Model bólu pleców myszy wywołany aktywatorem plazminogenu typu urokinazy

Częściowe podwiązanie nerwu kulszowego wywołuje długotrwały przewlekły ból neuropatyczny, charakteryzujący się przesadnymi reakcjami na bodźce termiczne i mechaniczne. Ten mysi model bólu neuropatycznego jest powszechnie stosowany do badania innowacyjnych terapii leczenia bólu. W tym artykule szczegółowo opisano procedurę chirurgiczną w celu poprawy standaryzacji i odtwarzalności.

Częściowe podwiązanie nerwu kulszowego: mysi model przewlekłego bólu neuropatycznego w celu zbadania antynocyceptywnego działania nowych terapii

Tutaj prezentujemy protokół oceny nocycepcji u myszy zakażonych Trypanosoma evansi, używając elektronicznego aparatu von Freya jako narzędzia, mierzącego mechaniczne progi tylnej łapy i wnętrzności.

Elektroniczny von Frey związany ze skalą grymasu myszy do oceny allodynii i bólu u myszy zakażonych Trypanosoma evansi

Protokół opisuje, jak mierzyć hiperalgezję kolana u myszy. Pokazujemy przykłady ostrego bólu kolana na mysich oraz modeli choroby zwyrodnieniowej stawów (OA).

Ocena hiperalgezji kolana u myszy za pomocą pomiaru ciśnienia

Poznaj metodę pomiaru dotykowej allodynii w modelu bakteryjnego zapalenia gruczołu krokowego u myszy. Protokół obejmuje infekcję UPEC przez cewnikowanie cewki moczowej oraz behawioralne testy bólu filamentami von Frey.

Pomiar dotykowej allodynii w mysim modelu bakteryjnego zapalenia gruczołu krokowego

Przeglądaj więcej filmów