1.5: Wprowadzenie do mikropipetora

Mikropipetor jest ważnym przyrządem służącym do precyzyjnego pomiaru małych objętości cieczy. To narzędzie badawcze, które można znaleźć w wielu laboratoriach badawczych na całym świecie, występuje w kilku kształtach i rozmiarach. Jednak pomimo różnic między mikropipetatorami, wszystkie działają w podobny sposób, aby dokładnie odmierzać mikrolitrowe ilości cieczy. Mikropipety są używane z jednorazowymi końcówkami, które, podobnie jak mikropipety, są dostępne w różnych rozmiarach.

Wszystkie mikropipety mają te same podstawowe komponenty do zasysania i dozowania cieczy. Tłok znajduje się w górnej części pipetora i służy do wciągania lub wypychania cieczy w zależności od pozycji, do której jest wciśnięty lub zwolniony.

Pokrętło regulacji głośności służy do zmiany objętości płynu do przelania.

Wyświetlacz odczytu głośności jest odczytywany od góry do dołu. W zależności od użytego mikropipetora, liczby odzwierciedlają różne rzędy wielkości w pomiarze objętości. Tutaj możesz zobaczyć pomiar na 370 mikrolitrów.

Jednorazowe końcówki są ładowane na spód mikropipetora.

Przycisk wysuwania końcówki i wałek wysuwania końcówki współpracują ze sobą, aby wyrzucić końcówki pipet, gdy trzeba je wyrzucić.

Rodzina mikropipetorów składa się z kilku elementów o różnych rozmiarach, które przenoszą precyzyjny zakres objętości.

Tutaj możesz zobaczyć, jak rodzina ustawia się w kolejce według zakresów głośności, które każdy z nich może przenieść. Na przykład Papa P-1000 dostarcza od 200 do 1000 μl, podczas gdy dziecko z gromady, P-2, przenosi między 0,2 a 2 μl.

Każdy z członków rodziny można rozpoznać po liczbie na górze tłoka oraz po kolorze, który jasno pokazuje, kim są i jaką objętość mogą wygodnie przenieść.

Od czasu do czasu inni krewni mikropipetorów pojawiają się na eksperymencie, jak Wujek P5000, Ciocia P100 i Kuzyn P10. Razem ta rozszerzona rodzina może pomóc w przenoszeniu cieczy o objętości od 0,2 do 5000 μl.

Aby dodatkowo zapewnić dokładne i precyzyjne przenoszenie cieczy, końcówki pipet o różnych rozmiarach, często, ale nie zawsze, są oznaczone kolorami w celu łatwego rozpoznania i są używane do pipetorów o różnych rozmiarach. Jeśli chodzi o przenoszoną objętość, białe końcówki do mikropipet zazwyczaj przenoszą od 0,5 do 2,5 μl, żółte końcówki do 1-200 μl, a niebieskie końcówki od 200 do 1000 μl.

W przypadku korzystania z mikropipetatora najpierw wybierz urządzenie o odpowiednim zakresie dla objętości, którą chcesz przenieść. Właściwy wybór pipetora może zadecydować o udanym lub nieudanym eksperymencie.

Aby rozpocząć, ustaw pokrętło na żądaną głośność. Aby zwiększyć głośność aspiracji, przekręć pokrętło w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara, przesuwając żądaną głośność o jedną trzecią obrotu, a następnie powoli zmniejszając do końcowego znaku. Aby zmniejszyć głośność, obróć pokrętło zgodnie z ruchem wskazówek zegara.

Należy pamiętać, że te cyfry w odczycie objętości mają różne rzędy wielkości w zależności od mikropipetora. Na przykład po lewej stronie widzimy P1000 z odczytem 370 ?l. W tysiącach jest zero, w setkach 3, a na dziesiątkach 7. Po prawej stronie znajduje się P200, wyświetlający 159 μl z 1 na miejscu setek, 5 na miejscu dziesiątek i 9 na miejscu jedynki.

Po ustawieniu głośności wybierz końcówkę.

Teraz trzymaj mikropipetor w pozycji pionowej, tak aby wąska część ciała znajdowała się w dłoni, a zwis nad palcem wskazującym,

Używając lekkiego nacisku, aby wcisnąć tłok mniej więcej do połowy pierwszego oporu lub gdy zaczniesz odczuwać większy opór.

To działanie wypiera powietrze z końcówki pipety.

Trzymając tłok wciśnięty, zanurzyć końcówkę na głębokość 1-3 mm w próbce. Płynnie zwolnić tłok z powrotem do pozycji spoczynkowej, odczekać jedną sekundę, aż ciecz dostanie się do końcówki, a następnie wyjąć pipetę z próbki.

Gdy tłok zostanie zwolniony z powrotem do pozycji spoczynkowej, ciecz jest wciągana do próżni wytworzonej przez wyparte powietrze.

Sprawdź końcówkę, aby upewnić się, że została pobrana żądana ilość płynu i czy końcówka nie zawiera pęcherzyków powietrza.

Przenosząc próbkę do żądanego naczynia, należy trzymać mikropipetor na temperaturze 10-45? pod kątem do wewnętrznej ściany statku odbiorczego. Zapobiegnie to tworzeniu się pęcherzyków na końcówce. Aby wypchnąć płyn, delikatnie wciśnij tłok do 1. stopnia, aby rozpocząć dozowanie płynu, a następnie, stosując silniejszy opór, wciśnij tłok aż do drugiego oporu, aby ?wydmuchać? ostatnia odrobina płynu z końcówki.

Całkowicie wyjąć końcówkę z naczynia, a następnie zwolnić tłok z powrotem do pozycji spoczynkowej.

Teraz użyj przycisku wysuwania, aby ostrożnie wyrzucić końcówkę pipety do odpowiedniego pojemnika. Zwracaj uwagę na to, co robisz, ponieważ wyrzucone końcówki mogą działać jak pociski i mogą potencjalnie zranić kolegów z laboratorium.

Aby mikropipety działały prawidłowo i zachowały wewnętrzny mechanizm regulacji objętości, nigdy nie należy obracać pokrętła głośności powyżej lub poniżej określonego zakresu mikropipetatora. Możesz złamać instrument.

Aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego między próbkami, należy wymieniać końcówkę po każdym przeniesieniu objętości.

Konsekwencja operatora jest ważna podczas pracy z mikropipeterami. Płynny nacisk tłoka zapewni optymalne wyniki eksperymentalne. Na koniec pamiętaj, że aby utrzymać mikropipety w jak najlepszym stanie, zawsze przechowuj je w pozycji pionowej, gdy nie są używane.

Teraz, gdy omówiliśmy już podstawowe działanie i zasady korzystania z mikropipetatorów, omówmy kilka typowych zastosowań laboratoryjnych do transferów mikroobjętościowych, a także odmiany tego instrumentu.

Mikropipety są często używane do przenoszenia zawiesin komórkowych na płytki hodowlane w różnych eksperymentach.

W połączeniu ze specjalistycznymi końcówkami, mikropipety mogą być używane do ostrożnego ładowania próbek do technik analitycznych, takich jak elektroforeza żelu DNA.

Mikropipety mogą być również używane do mechanicznego rozbijania tkanek w celu uzyskania zawiesin pojedynczych komórek.

W laboratorium można również znaleźć warianty mikropipetatora, które działają w oparciu o wyporność powietrza.

Pipety powtarzalne umożliwiają seryjne pipetowanie mniejszych objętości po wstępnym zasysaniu większej objętości roztworu. Pipety są bardzo przydatne do przenoszenia tej samej objętości próbki do dużej liczby pojemników.

Pipety wielokanałowe są zwykle używane do przenoszenia objętości w zakresie objętości 20-200 μl i są pomocne przy ładowaniu całych rzędów płytek 96-dołkowych.

Właśnie obejrzałeś wprowadzenie JoVE do mikropipetorów.

W tym filmie omówiliśmy: czym jest mikropipetor i jak działa, jak zasysać i dozować próbkę objętości cieczy, niektóre środki ostrożności i różne zastosowania mikropipetatorów. Dziękujemy za oglądanie i pamiętaj, aby wybrać odpowiednią pipetę do swoich eksperymentów.