Wprowadzenie do obsługi mikropipety

Mikropipeta jest ważnym instrumentem służącym do precyzyjnego pomiaru małych objętości cieczy. To narzędzie badawcze, które można znaleźć w licznych laboratoriach badawczych na całym świecie, występuje w kilku kształtach i rozmiarach. Jednak pomimo różnic między modelami, wszystkie mikropipety działają w podobny sposób, aby dokładnie odmierzać ilości cieczy w mikrolitrach. Mikropipety stosuje się z jednorazowymi końcówkami, które, podobnie jak same pipety, są dostępne w różnych rozmiarach.

Wszystkie mikropipety posiadają te same podstawowe elementy służące do pobierania i dozowania cieczy. Tłok znajduje się w górnej części pipety i służy do zasysania lub wypychania cieczy, w zależności od stopnia jego wciśnięcia lub zwolnienia.

Pokrętło regulacji objętości służy do zmiany objętości cieczy, która ma zostać przeniesiona.

Wyświetlacz objętości odczytuje się od góry do dołu. W zależności od rodzaju użytej mikropipety, cyfry odzwierciedlają różne rzędy wielkości pomiaru objętości. Tutaj widoczny jest pomiar wynoszący 370 µL.

Jednorazowe końcówki zakłada się na dolną część mikropipety.

Przycisk wyrzucania końcówek oraz trzpień wyrzucający współpracują ze sobą, aby usunąć końcówki pipety, gdy wymagane jest ich wyrzucenie.

Rodzina mikropipet obejmuje kilka modeli o różnych rozmiarach, które przenoszą precyzyjny zakres objętości.

Tutaj można zobaczyć tę rodzinę ustawioną zgodnie z zakresami objętości, jakie każdy z modeli może przenieść. Na przykład P-1000 pobiera od 200-1000 µl, podczas gdy najmniejsza z grupy, P-2, przenosi od 0,2-2 µl.

Każdy z członków tej rodziny jest rozpoznawalny po numerze na górze tłoka oraz po kolorze, co jasno wskazuje, który to model i jaką objętość może wygodnie przenieść.

Sporadycznie podczas eksperymentu pojawiają się inni krewni mikropipet, tacy jak P5000, P100 oraz P10. Wspólnie ta rozszerzona rodzina pozwala na przenoszenie cieczy w zakresie objętości od 0,2-5000 µl.

Aby dodatkowo zapewnić dokładne i precyzyjne przenoszenie cieczy, stosuje się końcówki do pipet o różnych rozmiarach, które często (choć nie zawsze) są kodowane kolorami dla łatwiejszego rozpoznawania i dopasowane do różnych rozmiarów pipet. Biorąc pod uwagę przenoszoną objętość, białe końcówki do mikropipet zazwyczaj przenoszą od 0,5-2,5 μl, żółte końcówki służą do objętości 1-200 µl, a niebieskie końcówki od 200 do 1000 μl.

Podczas korzystania z mikropipety w pierwszej kolejności należy wybrać instrument o zakresie odpowiednim dla objętości, którą chcemy przenieść. Prawidłowy wybór pipety może decydować o sukcesie lub niepowodzeniu eksperymentu.

Aby zacząć, ustaw pokrętło na pożądaną objętość. Aby zwiększyć objętość zasysania, obracaj pokrętło w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara, przekraczając pożądaną wartość o około jedną trzecią obrotu, a następnie powoli zmniejszaj ją do końcowego oznaczenia. Aby zmniejszyć objętość, obracaj pokrętło zgodnie z ruchem wskazówek zegara.

Należy pamiętać, że cyfry w odczycie objętości mają różne rzędy wielkości w zależności od modelu mikropipety. Na przykład po lewej stronie widzimy model P1000 z odczytem 370 µl. Zero znajduje się na miejscu tysięcy, 3 na miejscu setek, a 7 na miejscu dziesiątek. Po prawej stronie znajduje się model P200, wyświetlający 159 µl, gdzie 1 znajduje się na miejscu setek, 5 na miejscu dziesiątek, a 9 na miejscu jedności.

Po ustawieniu objętości wybierz odpowiedni końcówkę.

Teraz trzymaj mikropipetę w pozycji pionowej, opierając wąską część korpusu o dłoń, a wystający element o palec wskazujący.

Stosując lekki nacisk, naciśnij tłok mniej więcej do połowy drogi do pierwszego zatrzymania lub do momentu, gdy poczujesz większy opór.

Czynność ta wypycha powietrze z końcówki pipety.

Trzymając tłok wciśnięty, zanurz końcówkę w próbce na głębokość 1-3 mm. Płynnie zwolnij tłok do pozycji spoczynkowej, odczekaj jedną sekundę, aż ciecz wniknie do końcówki, a następnie wyjmij pipetę z próbki.

Po powrocie tłoka do pozycji spoczynkowej ciecz zostaje wciągnięta dzięki próżni powstałej w wyniku wypchnięcia powietrza.

Sprawdź końcówkę, aby potwierdzić, że wciągnięto pożądaną ilość cieczy i że w końcówce nie ma pęcherzyków powietrza.

Przenosząc próbkę do odpowiedniego naczynia, trzymaj mikropipetę pod kątem 10-45° względem wewnętrznej ścianki naczynia odbiorczego. Zapobiegnie to powstawaniu pęcherzyków powietrza przy końcówce. Aby wypuścić ciecz, płynnie naciśnij tłok lekko do pierwszego zatrzymania, aby rozpocząć dozowanie cieczy, a następnie, stosując silniejszy nacisk, dociśnij tłok do drugą zatrzymania, aby „wydmuchać” ostatnią kroplę cieczy z końcówki.

Całkowicie wyjmij końcówkę z naczynia, a następnie zwolnij tłok do pozycji spoczynkowej.

Teraz użyj przycisku wyrzutu, aby ostrożnie wyrzucić końcówkę pipety do odpowiedniego pojemnika. Zachowaj ostrożność, ponieważ wyrzucane końcówki mogą działać jak pociski i potencjalnie zranić współpracowników w laboratorium.

Aby zapewnić prawidłowe działanie mikropipet i chronić wewnętrzny mechanizm regulacji objętości, nigdy nie przekraczaj górnej ani dolnej granicy zakresu objętości danej mikropipety. Może to doprowadzić do uszkodzenia instrumentu.

Aby uniknąć kontaminacji krzyżowej próbek, wymieniaj końcówkę po każdym transferze objętości.

Podczas pracy z mikropipetami istotna jest powtarzalność działań operatora. Płynne naciskanie tłoka pozwoli uzyskać optymalne wyniki eksperymentalne. Na koniec pamiętaj, aby w celu utrzymania najwyższej sprawności mikropipet zawsze przechowywać instrumenty w pozycji pionowej, gdy nie są one używane.

Po omówieniu podstawowej obsługi i zasad korzystania z mikropipet, przejdźmy do omówienia typowych zastosowań laboratoryjnych w zakresie przenoszenia mikroobjętości oraz wariantów tego instrumentu.

Mikropipety są często wykorzystywane do przenoszenia zawiesin komórkowych na płytki hodowlane w ramach różnego rodzaju doświadczeń.

W połączeniu ze specjalistycznymi końcówkami mikropipety mogą być używane do ostrożnego nakładania próbek w technikach analitycznych, takich jak elektroforeza DNA w żelu.

Mikropipety mogą również służyć do mechanicznego rozdrabniania tkanek w celu uzyskania zawiesin pojedynczych komórek.

W laboratorium można spotkać także warianty mikropipet działające na zasadzie przemieszczania powietrza.

Pipety powtarzalne umożliwiają seryjne dozowanie mniejszych objętości po początkowym pobraniu większej objętości roztworu. Pipety te są niezwykle użyteczne przy przenoszeniu tej samej objętości próbki do dużej liczby naczyń.

Pipety wielokanałowe są zazwyczaj stosowane do przenoszenia objętości z zakresu 20-200 μl i pomagają w napełnianiu całych rzędów płytek 96-dołkowych.

Właśnie obejrzeli Państwo wprowadzenie JoVE do obsługi mikropipet.

W tym filmie omówiliśmy: czym jest mikropipeta i jak działa, jak pobierać i dozować próbki cieczy, zasady bezpieczeństwa oraz różnorodne zastosowania mikropipet. Dziękujemy za uwagę i pamiętajcie o wyborze odpowiedniej pipety do swoich eksperymentów.