Name: 5/6 nefrektomia w połączeniu z dietą bogatą w sól i hamowaniem syntazy tlenku azotu w celu wywołania przewlekłej choroby nerek u szczura Lewisa (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-07-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: Poznaj metodę wywoływania przewlekłej choroby nerek u szczura Lewisa poprzez 5/6 nefrektomię, inhibicję syntazy tlenku azotu i dietę bogatą w sól. Model ten umożliwia badanie mechanizmów niewydolności nerek oraz testowanie nowych interwencji terapeutycznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy Krista den Ouden za doskonałą pomoc techniczną. Technika ta została wsparta finansowo przez Dutch Kidney Foundation, grant C06.2174. M.C.V. jest wspierany przez Holenderską Organizację Badań Naukowych (NWO) Vidi-grant 016.096.359.

Wszystkie eksperymenty są przeprowadzane zgodnie z wytycznymi etycznymi Komitetu ds. Zwierząt Doświadczalnych w Utrechcie. Protokół jest wykonywany pod kierunkiem i za zgodą komitetu ds. opieki nad zwierzętami i wykorzystania zwierząt, w której znajduje się autor.
CKD jest indukowana u samców wsobnych szczurów Lewis (Charles River, Sulzfeld, Niemcy) w wieku 8 tygodni. Szczury są trzymane w standardowych warunkach w środowisku o kontrolowanym świetle, temperaturze i wilgotności.
1. Przygotowanie do operacji
<ol>
	<li>Sterylizuj narzędzia chirurgiczne:
	<ul>
		<li>1 kleszczyki do tkanek studenckich 1-2 zęby 12 cm</li>
		<li>1 kleszcze uczniowskie o standardowym wzorze</li>
		<li>2 kleszcze Semken</li>
		<li>1 nożyczki majonezowe</li>
		<li>1 student nożyczki do tęczówki</li>
		<li>1 uchwyt na igły Olsen-Hegar z nożyczkami</li>
		<li>koc</li>
	</ul>
	</li>
	<li>Sprawdź listę inwentarza:
	<ul>
		<li>Stół operacyjny z podkładką rozgrzewającą i lampą</li>
		<li>O2, izofluran</li>
		<li>Tkanek</li>
		<li>golarka</li>
		<li>waga</li>
		<li>Sterylny zestaw operacyjny</li>
		<li>Sterylna gaza 5x5 i 10x10</li>
		<li>70% alkoholu</li>
		<li>0,9% roztwór NaCl</li>
		<li>Strzykawka 1 ml</li>
		<li>Igły (25G)</li>
		<li>Żelowe podkładki piankowe: spongostan</li>
		<li>Vicryl 4.0 i 5.0</li>
		<li>Buprenorfina 0,03 mg/kg (1:10 rozcieńczona w soli fizjologicznej)</li>
		<li>Czysta klatka dla szczurów po operacji</li>
	</ul>
	</li>
</ol>
2. Uninefrektomia po prawej stronie
<ol>
	<li>Zdezynfekuj stół 70% alkoholem.</li>
	<li>Umieścić szczura w pudełku indukcyjnym i wywołać znieczulenie 4% izofluranem i 1 litrem przepływuO2. Uwaga: w zależności od zastosowanego szczepu szczura przepisywane jest znieczulenie przed- i okołooperacyjne, należy to omówić z lokalnym weterynarzem.</li>
	<li>Przenieś szczura na stół i umieść nos w stożku. Stożek szczura i nosa umieszcza się na poduszce grzewczej, aby utrzymać temperaturę ciała szczura. Szczur jest wentylowany mieszaniną 2% izofluranu i 1 litra O2 .</li>
	<li>Ogol bok szczura i zdezynfekuj alkoholem. Myć i dezynfekować ręce oraz nosić sterylne rękawice chirurgiczne. Załóż czapkę na głowę i maskę. Wykonaj nacięcie 1-1,5 cm równolegle do żeber za pomocą anatomicznych kleszczy i nożyczek. Odsłoń nerkę poprzez rozwarstwienie mięśni pleców.</li>
	<li>Dolny biegun nerki jest widoczny, ostrożnie użyj małych kleszczyków, aby chwycić okołonerkową tkankę tłuszczową. Eksternalizacji nerki delikatnie ciągnąc za tłuszcz okołonerkowy kleszczami. Należy uważać, aby podczas tego zabiegu nie naruszyć pracy nadnercza. Nadnercza można łatwo usunąć, umieszczając kleszcze w miejscu przyśrodkowym w tkance tłuszczowej i delikatnie przesuwając w górę między nadnerczami a nerką, jak pokazano na rycinie 2.</li>
	<li>Delikatnie umieść nerkę na gazie i oczyścij ją z otaczającego tłuszczu i tkanki łącznej. Zidentyfikuj tętnicę nerkową i żyłę nerkową i umieść ligaturę (5,0 vicryl) z pojedynczym węzłem wokół naczyń, ale nie zawiązuj węzła.</li>
	<li>Ostrożnie przesuń luźny węzeł wzdłuż naczyń w kierunku aorty o około 0,5 cm, aby utworzyć przestrzeń między nerką a węzłem. Ma to na celu zapobieżenie zsuwaniu się ligatury po przecięciu.</li>
	<li>Zawiąż węzeł dwoma podwójnymi węzłami. Jeśli perfuzja zostanie zatrzymana, kolor nerki natychmiast zmieni się na brązowy. Nie obcinaj końców ligatury.</li>
	<li>Przeciąć naczynia nerkowe w pobliżu nerki i usunąć nerkę. Delikatnie pociągnij za długie końce ligatury, aby sprawdzić, czy nie ma krwawienia z naczyń nerkowych. Podwiązanie powinno pozostać na swoim miejscu na naczyniu. Odetnij długie końce ligatury. Należy pamiętać, że resztki naczyń nerkowych natychmiast cofną się do jamy brzusznej.</li>
	<li>Osusz wyciętą nerkę do sucha i zważ ją.</li>
	<li>Zamknij nacięcie mięśni szkieletowych za pomocą szwów biegowych za pomocą Vicryl 5.0. Wstrzyknąć 0,10 ml (0,03 mg/kg) buprenorfiny domięśniowo w kończynę tylną. Zamknij skórę za pomocą Vicryl 4.0 za pomocą szwów śródskórnych. Zapobiega to otwieraniu rany przez szczury. Uwaga: ze względu na depresję oddechową u szczurów Lewisa, podajemy tylko pooperacyjne znieczulenie tuż przed wyłączeniem izofluranu.</li>
	<li>Trzymaj szczura w czystej, samotnej klatce z łatwym dostępem do jedzenia i wody. Umieść połowę klatki na podkładce grzewczej O/N i dokładnie sprawdź szczura następnego dnia. Gdy rana zostanie zamknięta, a szczur jest aktywny, co zwykle trwa od 6 do 12 godzin po operacji, szczur może zostać umieszczony z powrotem w pomieszczeniu grupowym.</li>
</ol>
3. Nefrektomia z sumą częściową lewej strony
<ol>
	<li>Siedem dni później po lewej stronie wykonuje się te same preparaty, co po prawej stronie, jak opisano od 2,1 do 2,5. Przed zabiegiem oblicza się ilość tkanki nerkowej, która musi zostać usunięta, odpowiadającą około 2/3 masy prawej nerki. Przygotuj małe kawałki pianki żelowej (Spongostan, Johnson & Johnson, New Jersey) przed zabiegiem.</li>
	<li>Umieść ostre nożyczki wokół górnego bieguna lewej nerki i wytnij górny biegun jednym pociągnięciem (w celu ustalenia nożyczek, patrz rysunek 3). Natychmiast przykryj kawałkiem pianki żelowej i delikatnie dociśnij sterylną gazą.</li>
	<li>Powtórzyć z dolnym biegunem nerki, jak w ppkt 3.3.</li>
	<li>Podnieś nerkę, aby zapobiec zakrzepom na skórze. Utrzymuj łagodny nacisk na obie żelowe wkładki piankowe sterylną gazą, aż krwawienie ustanie. Gdy krwawienie utrzymuje się, dodaj kolejną podkładkę piankową.</li>
	<li>Umieść resztki nerki z przylegającymi żelowymi podkładkami piankowymi w jamie brzusznej. Zamknij mięsień i skórę i postępuj zgodnie z 2,9-2,12.</li>
</ol>
4. Pozorna chirurgia
<ol>
	<li>Kontrole sterowane pozorami są poddawane tej samej procedurze w celu odsłonięcia nerek. Zamiast wytępić nerkę lub przeciąć bieguny tydzień później, obie nerki są odkapsulowane w odstępach jednego tygodnia, uważając, aby nie naruszyć pracy nadnerczy. Zamykanie ran i opieka pooperacyjna są identyczne jak w 2.11 i 2.12.</li>
</ol>

<ol><li>AS, G. o, Chertow, G. M., Fan, D., McCulloch, C. E., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+kidney+disease+and+the+risks+of+death%2C+cardiovascular+events%2C+and+hospitalization%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Chronic kidney disease and the risks of death, cardiovascular events, and hospitalization.</a> N. Engl. J. Med. 351 (13), 1296-1305 (2004).</li>
<li>Fleck, C., Appenroth, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suitability+of+5%2F6+nephrectomy+%285%2F6NX%29+for+the+induction+of+interstitial+renal+fibrosis+in+rats--influence+of+sex%2C+strain%2C+and+surgical+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Toxicol.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Suitability of 5/6 nephrectomy (5/6NX) for the induction of interstitial renal fibrosis in rats--influence of sex, strain, and surgical procedure.</a> Exp. Toxicol. Pathol. 57 (3), 195-205 (2006).</li>
<li>Griffin, K. A., Picken, M. M., Churchill, M., Churchill, P., Bidani, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+structural+correlates+of+glomerulosclerosis+after+renal+mass+reduction+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Functional and structural correlates of glomerulosclerosis after renal mass reduction in the rat.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 11 (3), 497-506 (2000).</li>
<li>Kang, D. H., Kanellis, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+microvascular+endothelium+in+progressive+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Role of the microvascular endothelium in progressive renal disease.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 13 (3), 806-816 (2002).</li>
<li>Baylis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+synthase+derangements+and+hypertension+in+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Nephrol.+Hypertens%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide synthase derangements and hypertension in kidney disease.</a> Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 21 (1), 1-6 (2012).</li>
<li>Bongartz, L. G., Braam, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+nitric+oxide+reduction+induces+permanent+cardiac+systolic+dysfunction+and+worsens+kidney+damage+in+rats+with+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transient nitric oxide reduction induces permanent cardiac systolic dysfunction and worsens kidney damage in rats with chronic kidney disease.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 298 (3), 815-823 (2010).</li>
<li>Fujihara, C. K., De N, G., Zatz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+nitric+oxide+synthase+inhibition+aggravates+glomerular+injury+in+rats+with+subtotal+nephrectomy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Chronic nitric oxide synthase inhibition aggravates glomerular injury in rats with subtotal nephrectomy.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 5 (7), 1498-1507 (1995).</li>
<li>Fujihara, C. K., Sena, C. R., Malheiros, D. M., Mattar, A. L., Zatz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-term+nitric+oxide+inhibition+induces+progressive+nephropathy+after+regression+of+initial+renal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Short-term nitric oxide inhibition induces progressive nephropathy after regression of initial renal injury.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 290 (3), F632-F640 (2006).</li>
<li>Dikow, R., Kihm, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+infarct+size+in+uremic+rats%3A+reduced+ischemia+tolerance%3F%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Increased infarct size in uremic rats: reduced ischemia tolerance?</a> J. Am. Soc. Nephrol. 15 (6), 1530-1536 (2004).</li>
<li>Elrashidy, R. A., Asker, M. E., Mohamed, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pioglitazone+attenuates+cardiac+fibrosis+and+hypertrophy+in+a+rat+model+of+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cardiovasc.+Pharmacol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Pioglitazone attenuates cardiac fibrosis and hypertrophy in a rat model of diabetic nephropathy.</a> J. Cardiovasc. Pharmacol. Ther. 17 (3), 324-333 (2012).</li>
<li>Haylor, J., Schroeder, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+gadolinium+following+use+of+MR+contrast+agents+in+a+rat+model+of+nephrogenic+systemic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Skin gadolinium following use of MR contrast agents in a rat model of nephrogenic systemic fibrosis.</a> Radiology. 263 (1), 107-116 (2012).</li>
<li>Moriguchi, Y., Yogo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Left+ventricular+hypertrophy+is+associated+with+inflammation+in+sodium+loaded+subtotal+nephrectomized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Res%22%5BJournal%5D)">Left ventricular hypertrophy is associated with inflammation in sodium loaded subtotal nephrectomized rats.</a> Biomed. Res. 32 (2), 83-90 (2011).</li>
<li>van Koppen, A., Joles, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Healthy+bone+marrow+cells+reduce+progression+of+kidney+failure+better+than+CKD+bone+marrow+cells+in+rats+with+established+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Healthy bone marrow cells reduce progression of kidney failure better than CKD bone marrow cells in rats with established chronic kidney disease.</a> Cell Transplant. , (2012).</li>
<li>Baylis, C., Corman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aging+kidney%3A+insights+from+experimental+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The aging kidney: insights from experimental studies.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 9 (4), 699-709 (1998).</li>
<li>Szabo, A. J., Muller, V., Chen, G. F., Samsell, L. J., Erdely, A., Baylis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephron+number+determines+susceptibility+to+renal+mass+reduction-induced+CKD+in+Lewis+and+Fisher+344+rats%3A+implications+for+development+of+experimentally+induced+chronic+allograft+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol.+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Nephron number determines susceptibility to renal mass reduction-induced CKD in Lewis and Fisher 344 rats: implications for development of experimentally induced chronic allograft nephropathy.</a> Nephrol. Dial Transplant. 23 (8), 2492-2495 (2008).</li>
<li>Darling, I. M., Morris, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+%22true%22+creatinine+clearance+in+rats+reveals+extensive+renal+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of "true" creatinine clearance in rats reveals extensive renal secretion.</a> Pharm. Res. 8 (10), 1318-1322 (1991).</li>
<li>Levey, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+renal+function+in+chronic+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Measurement of renal function in chronic renal disease.</a> Kidney Int. 38 (1), 167-184 (1990).</li>
<li>Myers, G. L., Miller, W. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+improving+serum+creatinine+measurement%3A+a+report+from+the+Laboratory+Working+Group+of+the+National+Kidney+Disease+Education+Program%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">Recommendations for improving serum creatinine measurement: a report from the Laboratory Working Group of the National Kidney Disease Education Program.</a> Clin. Chem. 52 (1), 5-18 (2006).</li>
<li>Hostetter, T. H., Meyer, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+clearance+methods+for+measurement+of+glomerular+filtration+and+tubular+reabsorption%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">The development of clearance methods for measurement of glomerular filtration and tubular reabsorption.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 287 (5), F868-F870 (2004).</li>
<li>Koeners, M. P., Racasan, S., Koomans, H. A., Joles, J. A., Braam, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide%2C+superoxide+and+renal+blood+flow+autoregulation+in+SHR+after+perinatal+L-arginine+and+antioxidants%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Physiol.+%28Oxf%29%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide, superoxide and renal blood flow autoregulation in SHR after perinatal L-arginine and antioxidants.</a> Acta. Physiol. (Oxf). 190 (4), 329-338 (2007).</li>
<li>van den Brandt, J., Wang, D., Kwon, S. H., Heinkelein, M., Reichardt, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentivirally+generated+eGFP-transgenic+rats+allow+efficient+cell+tracking+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Lentivirally generated eGFP-transgenic rats allow efficient cell tracking in vivo.</a> Genesis. 39 (2), 94-99 (2004).</li>
<li>Kreutz, R., Kovacevic, L., Schulz, A., Rothermund, L., Ketteler, M., Paul, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+high+NaCl+diet+on+spontaneous+hypertension+in+a+genetic+rat+model+with+reduced+nephron+number%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hypertens%22%5BJournal%5D)">Effect of high NaCl diet on spontaneous hypertension in a genetic rat model with reduced nephron number.</a> J. Hypertens. 18 (6), 777-782 (2000).</li>
<li>Liu, Z. C., Chow, K. M., Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+two+protocols+of+uremic+rat+model%3A+partial+nephrectomy+and%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Evaluation of two protocols of uremic rat model: partial nephrectomy and.</a> 25 (6), 935-943 (2003).</li>
<li>Griffin, K. A., Picken, M., Bidani, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+of+renal+mass+reduction+is+a+critical+modulator+of+subsequent+hypertension+and+glomerular+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Method of renal mass reduction is a critical modulator of subsequent hypertension and glomerular injury.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 4 (12), 2023-2031 (1994).</li>
<li>Meyer, F., Ioshii, S. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laparoscopic+partial+nephrectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Cir.+Bras%22%5BJournal%5D)">Laparoscopic partial nephrectomy in rats.</a> Acta. Cir. Bras. 22 (2), 152-156 (2007).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Chirurgiczne usunięcie 5/6 masy nerkowej u szczura Lewisa, w połączeniu z dietą bogatą w sól i tymczasowym hamowaniem NOS, prowadzi do powstania modelu PChN, który przypomina ludzką PChN i umożliwia badanie mechanizmów przyczynowych i skuteczności interwencji terapeutycznych w PChN.
Model nefrektomii 5/6 jest dobrze znanym i szeroko opisanym modelem PChN. Jednak samo usunięcie 5/6 masy nerkowej nie prowadzi do natychmiastowej niewydolności nerek u wszystkich szczepów szczurów. Używamy szczurów...

Ze względu na swój postępujący charakter, wynikającą z niego schyłkową chorobę nerek i związaną z nią zachorowalność i śmiertelność z powodu chorób sercowo-naczyniowych, PChN stanowi rosnący problem zdrowia publicznego1. Spowolnienie postępu PChN jest zatem głównym priorytetem zdrowotnym. Ponieważ PChN charakteryzuje się złożonymi zaburzeniami homeostazy, integracyjne modele zwierzęce są niezbędne do badania rozwoju i progresji PChN. Nerka składa się z szerokiej gamy różnych typów komórek, które wchodzą ze sobą w interakcje. Tej złożoności nie da się naśladować in vitro.
Aby badać nowe interwencje terapeutyczne w PChN, używamy modelu ablacji 5/6 nefrektomii, dobrze znanego eksperymentalnego modelu postępującej choroby nerek, przypominającego kilka aspektów ludzkiej PChN2,3. Znaczne zmniejszenie masy nerkowej powoduje postępujące uszkodzenie kłębuszków nerkowych i cewkowo-śródmiąższowych, utratę resztkowych nefronów oraz rozwój nadciśnienia ogólnoustrojowego i kłębuszkowego. Jest to związane z postępującą utratą naczyń włosowatych śródnerkowych4, stanem zapalnym i stwardnieniem kłębuszków nerkowych. Czynniki ryzyka PChN niezmiennie wpływają na funkcję śródbłonka5. Użyliśmy szczepu szczura (Lewis), który jest stosunkowo odporny na rozwój PChN i dlatego połączyliśmy usunięcie 5/6 masy nerkowej z niedoborem tlenku azotu (NO)6, 7, 8 i dietą o wysokiej zawartości soli9. Po przyjeździe i aklimatyzacji zwierzęta otrzymują inhibitor syntazy NO (L-NNA) uzupełniony do wody pitnej (20 mg/L) przez okres 4 tygodni, a następnie prawostronną uninfrektomię (UNX) z kontynuacją L-NNA po dwóch dniach. Tydzień później wykonuje się nefrektomię subtotalną (SNX), czyli usunięcie 2/3 masy nerkowej po stronie lewej. Po SNX zwierzętom pozostawia się rekonwalescencję przez 2 dni, a następnie ponownie podaje się 20 mg/l lnna w wodzie pitnej przez okres 4 tygodni. Dieta bogata w sól (6%), uzupełniona mieloną karmą (patrz oś czasu Rysunek 1), jest kontynuowana przez cały czas trwania eksperymentu. Powodem, dla którego należy wykonać UNX po prawej stronie, a SNX po lewej stronie, jest to, że naczynia nerkowe są dłuższe po lewej stronie, co ułatwia dostęp do nerki bez nadmiernego rozciągania naczyń, gdy nerka jest odsłonięta na zewnątrz ciała. W literaturze opisywane są modele, w których najpierw usuwa się bieguny lewej nerki, a tydzień później UNX prawej nerki10,11,12. W naszych rękach model ten wykazał znacznie szybszy rozwój niewydolności nerek, ale także znacznie większą zmienność w utracie funkcji nerek. Postęp niewydolności nerek śledzi się w miarę upływu czasu poprzez pomiar mocznika w osoczu, skurczowego ciśnienia krwi i białkomoczu. Po sześciu tygodniach od SNX dochodzi do niewydolności nerek, charakteryzującej się znacznym zmniejszeniem współczynnika filtracji kłębuszkowej (69%) i efektywnym przepływem osocza nerkowego (62%)13, nadciśnieniem tętniczym (skurczowe ciśnienie krwi >150 mmHg), białkomoczem (> 50 mg/24 godz.) i łagodną mocznicą (>10 mM). Cechy histologiczne obejmują uszkodzenie kanalików śródmiąższowych objawiające się stanem zapalnym, zanik kanalików i zwłóknienie oraz ogniskowe stwardnienie kłębuszków nerkowych prowadzące do masywnego zmniejszenia liczby zdrowych kłębuszków nerkowych w pozostałej populacji (<10%). Obserwacja do 12 tygodni po SNX pokazuje dalszą progresję PChN, co daje możliwość oceny interwencji terapeutycznych.

<table><tbody><tr><td>&nbsp;</td><td>&nbsp;</td><td>&nbsp;</td><td><silny>odczynnik</silny></td></tr><tr><td>L-NNA</td><td>Sigma-aldrich</td><td>N5501</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Spongostan dental: żelowe podkładki piankowe 1x1x1 cm</td><td>Johnson& Johnson</td><td>Ms0005</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Ethicon Vicryl FS-2S naald 4/0 V392H p/36</td><td>Ethicon</td><td>V303H</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Ethicon Vicryl RB-1+ naald 5/0 V303H p/36</td><td>Ethicon</td><td>V392H</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Buprenorfina (0,3 mg/ml)</td><td>Za pośrednictwem lokalnego farmaceuty zamówionego przez Reckitt Benckiser pharmaceuticals</td><td>nieznany</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>&nbsp;</td><td>&nbsp;</td><td><mocny>Sprzęt</mocny></td></tr><tr><td>Kleszczyki do tkanek studenckich - 1x2 zęby 12 cm</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>91121-12</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Kleszcze studenckie o standardowym wzorze</td><td>FST</td><td>91100-12</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Nożyczki majonezowe</td><td>FST</td><td>14010-15</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>2X Kleszcze Semken</td><td>FST</td><td>11008-13</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Nożyczki studenckie do irysów</td><td>FST</td><td>91460-11</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Uchwyt na igły Olsen-Hegar</td><td>FST</td><td>12002-14</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4"> </td></tr></tbody></table>

5/6 nefrektomia w połączeniu z dietą bogatą w sól i hamowaniem syntazy tlenku azotu w celu wywołania przewlekłej choroby nerek u szczura lewisa

5/6th Nephrectomy in Combination with High Salt Diet and Nitric Oxide Synthase Inhibition to Induce Chronic Kidney Disease in the Lewis Rat

Przewlekła choroba nerek (PChN) jest problemem globalnym. Spowolnienie postępu PChN jest głównym priorytetem zdrowotnym. Ponieważ PChN charakteryzuje się złożonymi zaburzeniami homeostazy, integracyjne modele zwierzęce są niezbędne do badania rozwoju i progresji PChN. Aby zbadać rozwój PChN i nowe interwencje terapeutyczne w PChN, wykorzystujemy model ablacji 5/6 nefrektomii, dobrze znany eksperymentalny model postępującej choroby nerek, przypominający kilka aspektów PChN u ludzi. Znaczne zmniejszenie masy nerkowej powoduje postępujące uszkodzenie kłębuszków nerkowych i cewkowo-śródmiąższowych, utratę resztkowych nefronów oraz rozwój nadciśnienia ogólnoustrojowego i kłębuszkowego. Wiąże się to również z postępującą utratą naczyń włosowatych śródnerkowych, stanem zapalnym i miażdżycą kłębuszków nerkowych. Czynniki ryzyka PChN niezmiennie wpływają na funkcję śródbłonka. Aby to naśladować, łączymy usunięcie 5/6 masy nerkowej z niedoborem tlenku azotu (NO) i dietą bogatą w sól. Po przyjeździe i aklimatyzacji zwierzęta otrzymują inhibitor syntazy NO (NG-nitro-L-Arginina) (L-NNA) uzupełniony do wody pitnej (20 mg/L) przez okres 4 tygodni, a następnie prawostronną uninfrektomię. Tydzień później wykonuje się nefrektomię subtotalną (SNX) po lewej stronie. Po SNX zwierzętom pozwala się na rekonwalescencję przez dwa dni, a następnie LNNA w wodzie pitnej (20 mg/l) przez kolejny okres 4 tygodni. Dieta bogata w sól (6%), uzupełniona mieloną karmą (patrz oś czasu Rysunek 1), jest kontynuowana przez cały czas trwania eksperymentu. Postęp niewydolności nerek śledzi się w miarę upływu czasu poprzez pomiar mocznika w osoczu, skurczowego ciśnienia krwi i białkomoczu. Po sześciu tygodniach od SNX dochodzi do niewydolności nerek. Czynność nerek mierzy się za pomocą "złotego standardu" inuliny i technologii klirensu kwasu para-amino-hippurowego (PAH). Ten model PChN charakteryzuje się zmniejszeniem współczynnika filtracji kłębuszkowej (GFR) i efektywnym przepływem osocza nerkowego (ERPF), nadciśnieniem tętniczym (skurczowe ciśnienie krwi >150 mmHg), białkomoczem (> 50 mg/24 h) i łagodną mocznicą (>10 mM). Cechy histologiczne obejmują uszkodzenie kanalików śródmiąższowych objawiające się stanem zapalnym, zanik kanalików i zwłóknienie oraz ogniskowe stwardnienie kłębuszków nerkowych prowadzące do masywnego zmniejszenia liczby zdrowych kłębuszków nerkowych w pozostałej populacji (<10%). Obserwacja do 12 tygodni po SNX wykazuje dalszą progresję PChN.

Po subtotalnej nefrektomii pozostaje około 1/6 całkowitej masy nerek. Rysunek 4 przedstawia masę usuniętej części prawej nerki wraz ze średnią i odchyleniem standardowym w dwóch poprzednich eksperymentach. Należy pamiętać, że w tygodniu po UNX następuje przerost lewej nerki; oznacza to, że masa do usunięcia wyliczona na podstawie masy prawej nerki zawsze skutkuje usunięciem mniej niż 5/6 całej masy. Ponieważ jednak podczas operacji nie jest możliwe określenie masy lewej nerki, jest to najdokładniejsza me...

Opisano dwuetapową metodę leczenia przewlekłej choroby nerek (PChN) u szczura Lewisa poprzez chirurgiczne usunięcie 5/6 masy nerkowej. Połączenie zabiegu chirurgicznego, hamowania NOS i diety bogatej w sól prowadzi do powstania modelu przypominającego ludzką PChN, co pozwala na badanie mechanizmów przyczynowych i opracowywanie nowych interwencji terapeutycznych.

5/6 nefrektomia w połączeniu z dietą bogatą w sól i hamowaniem syntazy tlenku azotu w celu wywołania przewlekłej choroby nerek u szczura Lewisa

Chronic kidney disease (CKD) is a global problem. Slowing CKD progression is a major health priority. Since CKD is characterized by complex derangements ...

Ogólnym celem tej procedury jest wywołanie przewlekłej choroby nerek u szczura linii Lewis. Jest to osiągane poprzez uprzednie podawanie blokera tlenku azotu, NG Nitro, L-argininy lub LNNA przez okres czterech tygodni. Następnie usuwa się całą prawą nerkę.Następnie po tygodniu usuwa się dwie trzecie lewej nerki. Na koniec, podczas podawania LNNA i stosowania diety wysokosolnej, monitoruje się rozwój niewydolności nerek u szczura w czasie. W efekcie można uzyskać wyniki wykazujące utrwaloną przewlekłą chorobę nerek poprzez pobieranie moczu w celu pomiaru białka oraz oznaczanie hematokrytu i UIA we krwi, osoczu i/lub moczu, a także pomiar ciśnienia tętniczego skurczowego.Funkcja nerek jest ostatecznie określana przez klirens inuliny oraz stosunek klirensu para-aminohiroksybenzoesanu, czyli klirens PAH. Metoda ta może pomóc w udzieleniu odpowiedzi na kluczowe pytania w dziedzinie nefrologii, takie jak lepsze zrozumienie patologii CKD, i może być wykorzystana do badania efektów interwencji terapeutycznych. Na cztery tygodnie przed początkowym zabiegiem nefrektomii należy rozpocząć podawanie 20 mg/L inhibitora syntazy tlenku azotu LNNA w wodzie pitnej szczurów.Zgodnie z tym harmonograme

56th-nephrectomy-combination-with-high-salt-diet-nitric-oxide

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

5/6 nefrektomia w połączeniu z dietą wysokosodną i inhibicją syntazy tlenu azotowego w celu wywołania przewlekłej choroby nerek u szczura Lewis

Określenie współczynnika filtracji kłębuszkowej (GFR) jest złotym standardem do oceny ogólnej funkcji nerek. Jednak tradycyjne procedury pomiaru tego parametru są kłopotliwe i wymagają dużej inwestycji czasu. W tym miejscu opisujemy szybszą i minimalnie inwazyjną metodę przezskórnego oznaczania GFR.

Przezskórna ocena czynności nerek u świadomych gryzoni

Ten manuskrypt zawiera szczegółową dwuetapową procedurę chirurgiczną do wykonania mysiej 5/6częściowej nefrektomii (PNx) z podwiązaniem bieguna. Cztery tygodnie po operacji, w porównaniu z myszami operowanymi pozorowanymi, myszy PNx rozwinęły upośledzoną czynność nerek, niedokrwistość, przerost serca, zwłóknienie serca oraz zmniejszoną czynność skurczową i rozkurczową serca.

Mysi model nefrektomii 5/6, który indukuje eksperymentalną kardiomiopatię mocznicową

Ten manuskrypt opisuje protokoły mikroskopii wideo in vitro do oceny funkcji naczyniowej w tętnicach oporowych mózgu szczurów. W manuskrypcie opisano również techniki oceny gęstości mikronaczyń za pomocą znakowanej fluorescencyjnie lektyny i perfuzji tkanek za pomocą laserowej przepływometrii dopplerowskiej.

Ocena mechanizmów kontroli naczyniowej z wykorzystaniem wideomikroskopii izolowanych tętnic opornych szczurów

Celem tego manuskryptu i protokołu jest szczegółowe wyjaśnienie i demonstracja procedury chirurgicznej ortotopowego przeszczepu nerki u szczurów. Metoda ta jest uproszczona w celu uzyskania prawidłowej perfuzji nerki dawcy i skrócenia czasu reperfuzji poprzez zastosowanie techniki zespolenia mankietu żylnego i moczowodowego.

Ortotopowy przeszczep nerki szczura: nowatorskie i uproszczone podejście chirurgiczne

Zmodyfikowany model myszy Goldblatt z 2 nerkami i klipsem (2K1C) został opracowany przy użyciu rurki poliuretanowej do zainicjowania zwężenia tętnicy nerkowej, wywołując wzrost ekspresji reniny i uszkodzenie nerek. W tym miejscu opisujemy szczegółową procedurę przygotowania i umieszczenia mankietu na tętnicy nerkowej w celu wygenerowania powtarzalnego i spójnego modelu myszy 2K1C.

Zmodyfikowany mysi model regulacji reniny w zwężeniu tętnicy nerkowej z jedną nerką i jednym klipsem

Model ortotopowego przeszczepu nerki u szczurów przyczynia się do zbadania mechanizmu odrzucania alloprzeszczepu nerki. Obecny model zwiększa przeżywalność biorców bez zakłóceń w ukrwieniu i refluksu żylnego dolnej części ciała za pomocą zespolenia end-to-end implantacji nerki oraz metody "tunelowej" zespolenia moczowód-pęcherz moczowy.

Ortotopowy model przeszczepu nerki u szczura do odrzucania alloprzeszczepu nerki

Ten protokół szczegółowo opisuje etapy chirurgiczne tworzenia mysiej wspólnej przetoki tętniczo-żylnej. Opracowaliśmy ten model do badania patofizjologii kończyn związanej z dostępem do hemodializy.

Mysi model dysfunkcji ręki związanej z dostępem do hemodializy

Ten manuskrypt wprowadza ustandaryzowany protokół dla nefrektomii 5/6 poprzez ostrą bipolektomię poprzez laparotomię w linii środkowej na modelu szczurzym, mający na celu wywołanie stanu niewydolności nerek poprzez redukcję miąższu nerki z dużą precyzją metodyczną i niskim ryzykiem błędu technicznego.

5/6 Nefrektomia przy użyciu ostrej bipolektomii przez laparotomię w linii środkowej u szczurów

W tym artykule przedstawiono model niedokrwiennej CKD z wykorzystaniem jednostronnego IRI nerki z kontralateralną nefrektomią wykonaną dzień przed pobraniem próbki; protokół ten umożliwia ocenę funkcjonalną opartą na surowicy, wysoką przeżywalność oraz powtarzalną patologię PREWKinek w ciągu 28 i 42 dni, zapewniając wszechstronną platformę do badań mechanistycznych i interwencyjnych.

Model myszy przejścia z ostrej do przewlekłej choroby nerek wywołanego niedokrwieniem nerek lub uszkodzeniem reperfuzyjnym

Endogenna produkcja tlenku azotu (NO) reguluje szeroki wachlarz funkcji biologicznych. Coraz wyraźniej staje się jasne, że zaburzenia lub dysregulacja sygnalizacji opartej na NO są zaangażowane w wiele ludzkich chorób. Metody ilościowego oznaczania odpowiednich metabolitów NO mogą dostarczyć nowych diagnostycznych lub prognostycznych biomarkerów chorób ludzkich.

Techniki analityczne do badania bioaktywności tlenku azotu

Poznaj metodę wywoływania przewlekłej choroby nerek u szczura Lewisa poprzez 5/6 nefrektomię, inhibicję syntazy tlenku azotu i dietę bogatą w sól. Model ten umożliwia badanie mechanizmów niewydolności nerek oraz testowanie nowych interwencji terapeutycznych.

5/6 nefrektomia w połączeniu z dietą bogatą w sól i hamowaniem syntazy tlenku azotu w celu wywołania przewlekłej choroby nerek u szczura Lewisa (Wideo) | JoVE Journal

5/6 nefrektomia w połączeniu z dietą bogatą w sól i hamowaniem syntazy tlenku azotu w celu wywołania przewlekłej choroby nerek u szczura Lewisa

Przeglądaj więcej filmów