Name: Mysi model przewlekłego nadciśnienia ocznego indukowany laserem w celu scharakteryzowania wad wzroku (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Poznaj metodę indukcji przewlekłego nadciśnienia ocznego u myszy za pomocą fotokoagulacji laserowej. Monitoruj ciśnienie wewnątrzgałkowe i ostrość wzroku w czasie, aby badać wpływ nadciśnienia na funkcje wzrokowe.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Praca zawarta w tym artykule została wsparta przez Dr. Douglas H. Johnson Award for Glaucoma Research od American Health Assistance Foundation (XL), William & Mary Greve Special Scholar Award od Research to Prevent Blindness (XL), Illinois Society for the Prevention of Blindness (HC) oraz grant NIH R01EY019034 (XL).

Procedury
myszy C57BL/6J (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) są hodowane w Ośrodku Opieki nad Zwierzętami Uniwersytetu Northwestern. Wszystkie zwierzęta są wykorzystywane zgodnie z protokołami zatwierdzonymi przez Northwestern University Institutional Animal Care and Use Committee i są zgodne z wytycznymi NIH dotyczącymi wykorzystywania zwierząt w badaniach neurologicznych.
1. Fotokoagulacja laserowa
Procedura fotokoagulacji laserowej jest zmodyfikowana w stosunku do wcześniej opublikowanych protokołów 5-7.
<ol>
	<li>Znieczulenie 40-60-dniowej myszy przez dootrzewnowe wstrzyknięcie ketaminy (100 mg / kg, Butler Schein Animal Health, OH) i ksylazyny (10 mg / kg, Lloyd Inc. z Iowa, Shenandoah, IA).</li>
	<li>Rozszerz źrenicę prawego oka zwierzęcia doświadczalnego poprzez miejscowe leczenie jedną lub dwiema kroplami 1% roztworu siarczanu atropiny (Alcon Labs, Inc., Fort Worth, TX).</li>
	<li>Po rozszerzeniu źrenic spłaszcz przednią komorę, aby zwiększyć indukcję lasera 6. Włóż szklaną mikropipetę z ostrą końcówką (World Precision Instruments Inc, Sarasota, FL) do przedniej przestrzeni pod lampą szczelinową (SL-3E, Topcon, Oakland, NJ), aby spuścić płyn z przedniej komory.</li>
	<li>Utrzymaj mysz w plastikowym uchwycie na stożek (Braintree Sci Inc., MA) i przywiąż do domowej roboty platformy (patrz rysunek 1A). Trzymaj mysz z ogranicznikiem i wystawia prawe oko myszy na źródło światła za lampą szczelinową. Ustaw prawe oko znieczulonej myszy pod lampą szczelinową.</li>
	<li>Trzymając obiema rękami ogranicznik myszy, nałóż oświetlenie laserowe na rąbek rogówki za pomocą lasera argonowego (Ultima 2000SE, Coherent, Santa Clara, CA). Dostarczyć około 80-100 plamek laserowych (514 nm, 100 mW, impuls 50 ms i plamka 200 μm) prostopadle do obwodu siatki beleczkowej. Myszy C57BL/6 mają pigmentowaną tęczówkę, która służy jako bariera dla potencjalnej zabłąkanej energii 7.</li>
	<li>Wkraplanie miejscowe 0,5% moksyfloksacyny (Alcon Labs, Inc., Fort Worth, TX) na powierzchnię oka w celu dezynfekcji obszaru poddanego zabiegowi laserowemu oraz 0,5% proparakainy (Bausch & Lomb, Rochester, NY) w celu złagodzenia bólu.</li>
	<li>Trzymaj zwierzę na poduszce grzewczej (Sunbeam Products Inc, Boca Raton, FL) w celu regeneracji przez około godzinę, aż w pełni się obudzi.</li>
	<li>Lewe oko nie jest traktowane jako kontrola.</li>
</ol>
2. Pomiary IOP
<ol>
	<li>Umieść obudzoną mysz w tubie, aby załadować ją do plastikowego uchwytu stożka, a następnie przymocuj ją do platformy (patrz Rysunek 2A).</li>
	<li>Odczekaj od pięciu do dziesięciu minut, aby mysz przystosowała się do pozycji uchwytu. Zbliż tonometr odbicia (TonoLab, Colonial Medical Supply, Franconia, NH) do oka myszy, aż końcówka sondy znajdzie się w odległości 2-3 mm od powierzchni rogówki 14.</li>
	<li>Naciśnij przycisk pomiaru, aby końcówka sondy delikatnie uderzyła w środkową powierzchnię rogówki. Trzy kolejne zestawy sześciu pomiarów ciśnienia wewnątrzgałkowego tego samego oka są uzyskiwane i uśredniane jako ciśnienie wewnątrzgałkowe oka. Nieleczone oko kontrolne jest zawsze mierzone jako pierwsze, aby uzyskać odczyt wyjściowy dla oka leczonego laserowo, które jest mierzone jako następne.</li>
</ol>
3. Test optomotoryczny
Ostrość wzroku i wrażliwość na kontrast są testowane 14,15 . Dwoje oczu poszczególnych myszy jest badanych oddzielnie poprzez odwrócenie kierunku dryfującej siatki; tj. krata dryfująca zgodnie z ruchem wskazówek zegara służy do identyfikacji funkcji wzrokowej lewego oka, a krata dryfująca w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara dla prawego oka 16. Każdy test trwa około 15 minut i jest powtarzany przez dwóch obserwatorów niezależnie.
<ol>
	<li>Umieść mysz i pozwól jej swobodnie poruszać się po podwyższonej platformie otoczonej czterema monitorami komputerowymi (Rysunek 3A-B).</li>
	<li>Ustaw monitory tak, aby wyświetlały poziomo dryfujące siatki sinusoidalne jako bodźce wizualne o średniej luminancji 39 cd/m2. Kierunek ruchu kraty powinien zmieniać się kolejno zgodnie z ruchem wskazówek zegara i przeciwnie do ruchu wskazówek zegara.</li>
	<li>Analizuj ruchy zwierzęcia. Ruchy zwierzęcia w zgodzie z dryfującymi kratami są uważane za "pozytywne" w ciągu 15 sekund po włączeniu bodźca wzrokowego, a następnie stopniowo zwiększane. Najwyższy bodziec wzrokowy wywołujący reakcję definiuje się jako ostrość wzroku zwierzęcia 17.</li>
	<li>Zbadaj czułość kontrastu przy trzech wstępnie wybranych częstotliwościach przestrzennych: 0,075, 0,16 i 0,3 cykli na stopień (cpd). Próg kontrastu dla każdego oka jest definiowany jako najniższy kontrast, który wywołuje reakcje wzrokowe przy wcześniej ustalonej częstotliwości. Czułość kontrastu jest odwrotnością progu 17.</li>
</ol>

<ol><li>Gupta, N., Yucel, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glaucoma+as+a+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Glaucoma as a neurodegenerative disease.</a> Curr. Opin. Ophthalmol. 18, 110-114 (2007).</li>
<li>Quigley, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+death+in+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Retin.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Neuronal death in glaucoma.</a> Prog. Retin. Eye Res. 18, 39-57 (1999).</li>
<li>McKinnon, S. J., Schlamp, C. L., Nickells, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+retinal+ganglion+cell+death+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of retinal ganglion cell death and glaucoma.</a> Experimental Eye Research. 88, 816-824 (2009).</li>
<li>Pang, I. H., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+glaucoma+retinopathy+and+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy.</a> J. Glaucoma. 16, 483-505 (2007).</li>
<li>Levkovitch-Verbin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translimbal+laser+photocoagulation+to+the+trabecular+meshwork+as+a+model+of+glaucoma+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Translimbal laser photocoagulation to the trabecular meshwork as a model of glaucoma in rats.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 43, 402-410 (2002).</li>
<li>Aihara, M., Lindsey, J. D., Weinreb, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+mouse+ocular+hypertension%3A+establishment+of+the+model%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Experimental mouse ocular hypertension: establishment of the model.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 44, 4314-4320 (2003).</li>
<li>Grozdanic, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+mouse+model+of+chronic+ocular+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Laser-induced mouse model of chronic ocular hypertension.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 44, 4337-4346 (2003).</li>
<li>Sappington, R. M., Carlson, B. J., Crish, S. D., Calkins, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbead+occlusion+model%3A+a+paradigm+for+induced+ocular+hypertension+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">The microbead occlusion model: a paradigm for induced ocular hypertension in rats and mice.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 51, 207-216 (2010).</li>
<li>Ding, C., Wang, P., Tian, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+general+anesthetics+on+IOP+in+elevated+IOP+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of general anesthetics on IOP in elevated IOP mouse model.</a> Experimental Eye Research. 92, 512-520 (2011).</li>
<li>Kalesnykas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+ganglion+cell+morphology+after+optic+nerve+crush+and+experimental+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Retinal ganglion cell morphology after optic nerve crush and experimental glaucoma.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53, 3847-3857 (2012).</li>
<li>Shareef, S. R., Garcia-Valenzuela, E., Salierno, A., Walsh, J., Sharma, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+ocular+hypertension+following+episcleral+venous+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Chronic ocular hypertension following episcleral venous occlusion in rats.</a> Experimental Eye Research. 61, 379-382 (1995).</li>
<li>Chiu, K., Chang, R., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+chronic+ocular+hypertension+model+on+SD+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Laser-induced chronic ocular hypertension model on SD rats.</a> J. Vis. Exp. (10), e549(2007).</li>
<li>Fu, C. T., Sretavan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+ocular+hypertension+in+albino+CD-1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Laser-induced ocular hypertension in albino CD-1 mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51, 980-990 (2010).</li>
<li>Rangarajan, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+visual+deficits+in+aging+DBA%2F2J+mice+by+two+behavioral+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Detection of visual deficits in aging DBA/2J mice by two behavioral assays.</a> Curr. Eye Res. 36, 481-491 (2011).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direction-specific+disruption+of+subcortical+visual+behavior+and+receptive+fields+in+mice+lacking+the+beta2+subunit+of+nicotinic+acetylcholine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Direction-specific disruption of subcortical visual behavior and receptive fields in mice lacking the beta2 subunit of nicotinic acetylcholine receptor.</a> J. Neurosci. 29, 12909-12918 (2009).</li>
<li>Douglas, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Independent+visual+threshold+measurements+in+the+two+eyes+of+freely+moving+rats+and+mice+using+a+virtual-reality+optokinetic+system%5BTitle%5D)+AND+%22Visual+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Independent visual threshold measurements in the two eyes of freely moving rats and mice using a virtual-reality optokinetic system.</a> Visual Neuroscience. 22, 677-684 (2005).</li>
<li>Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+quantification+of+adult+and+developing+mouse+spatial+vision+using+a+virtual+optomotor+system%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 45, 4611-4616 (2004).</li>
<li>Morrison, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+chronic+pressure-induced+optic+nerve+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage.</a> Experimental Eye Research. 64, 85-96 (1997).</li>
<li>Cone, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+anesthesia%2C+mouse+strain+and+age+on+intraocular+pressure+and+an+improved+murine+model+of+experimental+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">The effects of anesthesia, mouse strain and age on intraocular pressure and an improved murine model of experimental glaucoma.</a> Experimental Eye Research. 99, 27-35 (2012).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-derived+neurotrophic+factor+and+TrkB+modulate+visual+experience-dependent+refinement+of+neuronal+pathways+in+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Brain-derived neurotrophic factor and TrkB modulate visual experience-dependent refinement of neuronal pathways in retina.</a> J. Neurosci. 27, 7256-7267 (2007).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+neonatal+development+of+retinal+ganglion+cell+dendrites+by+neurotrophin-3+overexpression%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Regulation of neonatal development of retinal ganglion cell dendrites by neurotrophin-3 overexpression.</a> The Journal of Comparative Neurology. 514, 449-458 (2009).</li>
<li>Sun, W., Li, N., He, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+morphological+survey+of+mouse+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Large-scale morphological survey of mouse retinal ganglion cells.</a> The Journal of Comparative Neurology. 451, 115-126 (2002).</li>
<li>Feng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+Ocular+Hypertension+Induces+Dendritic+Degeneration+of+Mouse+Retinal+Ganglion+Cells+that+Depends+on+Cell-type+and+Location%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Sustained Ocular Hypertension Induces Dendritic Degeneration of Mouse Retinal Ganglion Cells that Depends on Cell-type and Location.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. , (2013).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.
	Autorzy są pełnoetatowymi pracownikami Northwestern University.
	Autorzy NIE otrzymali ŻADNEGO dofinansowania, które zostało udzielone przez firmy produkujące odczynniki i przyrządy użyte w tym artykule.

Poinformowaliśmy powyżej, że utrzymujące się nadciśnienie oczne może być wywołane przez oświetlenie laserowe w oczach myszy. W porównaniu z modelem wstrzykiwania soli fizjologicznej 18 i kauteryzacją żył model 11 , które wymagają rozległych umiejętności mikrochirurgicznych, oświetlenie laserowe jest stosunkowo proste i łatwe do wykonania. Zazwyczaj możemy wykonać oświetlenie laserowe dla 4-6 myszy w ciągu 2-3 godzin. Krytycznymi krokami do osiągnięcia trwałego podniesienia ciśnienia wewnątrzgałkoweg...

<table><tbody><tr><td colspan="4"><silny>odczynnik</td></tr><tr><td>moksyfloksacyna</td><td>Alcon Labs, Inc.</td><td>NDC 0065-4013-03</td><td>0,5 %, tylko Rx</td></tr><tr><td>Chlorowodorek proparakainy</td><td>Bausch Lomb</td><td>NDC 24208-730-06</td><td>0,5 %, tylko Rx</td></tr><tr><td>Roztwór okulistyczny USP</td><td>Bausch Lomb</td><td>NDC 24208-730-06,5</td>%, tylko <td></td></tr><tr><td>Rx ketamina</td><td>Butler Schein Animal Health</td><td>NDC 11695-0550-1</td><td>100 mg / kg </td></tr><tr><td>ksylazyna</td><td>LLOYD Inc. z Iowa</td><td>NADA 139-236</td><td>10 mg / kg </td></tr><tr><td>roztwór siarczanu atropiny</td><td>Alcon Labs, Inc.</td><td>NDC 61314-303-02</td><td>1 %, tylko</td></tr><tr> Rx<td colspan="4">Equipment </td></tr><tr><td>Slit Lamp, TOPCON </td><td>Visual Systems Inc</td><td>SL-3E</td><td>powered by PS-30A</td></tr><tr><td>OptoMotry 1.8.0 virtual</td><td>CerebralMechanics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>opto-kinetyczny system testowania</td><td>CerebralMechanics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tonometr, TonoLab, dla myszy</td><td>Colonial Medical Supply</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Poduszka grzewcza</td><td>Sunbeam Products Inc</td><td>722-810</td><td></td></tr><tr><td>Laser argonowy </td><td>Coherent Inc</td><td>Ultima 2000SE</td><td></td></tr><tr><td>DECAPICONE Plastikowy uchwyt stożka </td><td>Braintree Sci Inc.</td><td>MDC-200</td><td>do myszy</td></tr></tbody></table>

mysi model przewlekłego nadciśnienia ocznego indukowany laserem w celu scharakteryzowania wad wzroku

A Laser-induced Mouse Model of Chronic Ocular Hypertension to Characterize Visual Defects

Jaskra, często związana z podwyższonym ciśnieniem wewnątrzgałkowym (IOP), jest jedną z głównych przyczyn ślepoty. Staraliśmy się ustalić mysi model nadciśnienia ocznego, aby naśladować ludzką jaskrę wysokiego ciśnienia. W tym przypadku oświetlenie laserowe jest stosowane do rąbka rogówki w celu fotokoagulacji odpływu wodnego, wywołując zamknięcie kąta. Zmiany ciśnienia wewnątrzgałkowego są monitorowane za pomocą tonometru odbicia przed i po zabiegu laserowym. Optomotoryczny test behawioralny służy do pomiaru odpowiednich zmian w zdolności widzenia. Pokazano reprezentatywny wynik dla jednej myszy, u której rozwinął się trwały wzrost ciśnienia wewnątrzgałkowego po oświetleniu laserowym. U tej myszy z nadciśnieniem ocznym obserwuje się obniżoną ostrość wzroku i wrażliwość na kontrast. Razem nasze badanie wprowadza cenny system modelowy do badania zwyrodnienia neuronów i leżących u jego podstaw mechanizmów molekularnych u myszy z jaskrą.

Zgodnie z opisem w procedurach, iluminacja laserowa jest skierowana na siateczkę pręgowatą w obszarze limbalnym w celu fotokoagulacji odpływu cieczy wodnistej, co indukuje zamknięcie kąta oka (Rysunek 1). W większości oczu poddanych laseroterapii nie stwierdzono istotnych uszkodzeń fizycznych, odwarstwienia pigmentu ani infekcji, co jest zgodne z wcześniejszymi ustaleniami 6. W przypadku niewielkiej grupy myszy (mniej niż 5% wszystkich zwierząt poddanych laseroterapii), u których wystąpiły fiz...

Przewlekłe nadciśnienie oczne jest wywoływane za pomocą laserowej fotokoagulacji siatki beleczkowej w oczach myszy. Ciśnienie wewnątrzgałkowe (IOP) utrzymuje się podwyższone przez kilka miesięcy po leczeniu laserowym. Spadek ostrości wzroku i wrażliwości na kontrast u zwierząt doświadczalnych monitoruje się za pomocą testu optomotorycznego.

Mysi model przewlekłego nadciśnienia ocznego indukowany laserem w celu scharakteryzowania wad wzroku

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model ...

Ogólnym celem tej procedury jest wywołanie przewlekłego nadciśnienia wewnątrzgałkowego u myszy za pomocą fotokoagulacji laserowej siateczki beleczkowej. Po znieczuleniu myszy rozszerza się źrenicę w docelowych oczach, a następnie spłaszcza przednią komorę. Drugim krokiem jest wywołanie nadciśnienia wewnątrzgałkowego poprzez skierowanie wiązki lasera prostopadle do powierzchni, wzdłuż obwodu siateczki beleczkowej.Następnie, za pomocą tonometru monitorowane jest ciśnienie wewnątrzgałkowe u myszy w czasie. Ostatnim krokiem jest przeprowadzenie testów automatycznych w celu wykazania zmian w ostrości widzenia. W rezultacie można monitorować w czasie wady wzroku spowodowane nadciśnieniem.Po uzyskaniu zatwierdzonego protokołu I-A-C-U-C, znieczuli mysz szczepu C 57 black six w wieku od 40 do 60 dni poprzez podanie dootrzewnowe ketaminy i ksylazyny. Następnie ostrożnie nanieście maść do oczu na lewe oko kontrolne, a następnie rozszerzcie źrenicę prawego oka poprzez miejscowe podanie jednej lub dwóch kropli 1% roztworu siarczanu atropiny. Po pełnym rozszerzeniu źrenicy wprowadźcie ostrą szklaną mikropipetę do przestrzeni przedniej oka, aby odprowadzić płyn z komory przedniej.Doprowadzi to do spłaszczenia komory przedniej i wzmocni indukcję laserową. Następnie umieść mysz pod lampą szczelinową, unieruchom ją w plastikowym uchwycie stożkowym i zabezpiecz na platformie wykonanej własnoręcznie. Następnie przygotuj źródło lasera Argonne, ustawiając długość fali na 514 nanometrów, moc na 100 milliwattów, czas trwania impulsu na 50 milisekund oraz rozmiar plamki na 200 mikrometrów.Po przygotowaniu lasera, unieruchom mysz w stabilizatorze i wystaw jej prawe oko na źródło światła za lampą szczelinową w celu wyrównania lasera. Następnie skieruj wiązkę lasera na limbus rogówki, używając lasera argonowego do wykonania od 80 do 100 punktów laserowych prostopadle wokół obwodu siecitrawki. Patrz 57 czarnych sześciu myszy.Zapewnij pigmentację tęczówki, która służy jako bariera przed potencjalną energią rozproszoną. Po zakończeniu procedury podaj miejscowo 0,5% moksifloxacynę na powierzchnię oka w celu dezynfekcji obszaru poddanego działaniu lasera oraz 0,5% propaginu w celu uśmierzenia bólu. Utrzymuj zwierzę na podgrzewaczu podczas rekonwalescencji przez około godzinę, aż do pełnego wybudzenia.Umieść przebudzoną mysz w probówce, a następnie włóż ją do plastikowego uchwytu stożkowego. Następnie unieruchom zwierzę na platformie. Należy uważać, aby nie unieruchomić myszy zbyt mocno, ponieważ może to spowodować sztuczny wzrost pomiarów ciśnienia wewnątrzgałkowego.Odczekać od pięciu do 10 minut, aby mysz zaadaptowała się do pozycji w uchwycie. Następnie powoli zbliżyć chronometr odbicia do oka kontrolnego, aż końcówka sondy znajdzie się w odległości dwóch do trzech milimetrów od powierzchni rogówki. W pierwszej kolejności zawsze dokonuje się pomiaru w nieleczonym oku kontrolnym, aby uzyskać wartość bazową dla oka poddanego zabiegowi laserowemu, który jest mierzony w następnej kolejności.Po ustawieniu chronometru odbiciowego naciśnij przycisk pomiaru, aby końcówka sondy delikatnie uderzyła w centralną powierzchnię rogówki. Wykonaj trzy kolejne serie po sześć pomiarów ciśnienia wewnątrzgałkowego tego samego oka. Wyniki tych pomiarów są następnie uśredniane dla każdego oka; sprawdź ostrość wzroku oraz czułość kontrastową za pomocą testu motorycznego.Osiąga się to poprzez umieszczenie myszy na podwyższonej platformie otoczonej czterema monitorami komputerowymi i umożliwienie jej swobodnego poruszania się. Należy skonfigurować monitory aparatury optometrycznej tak, aby wyświetlały poziomo dryfujące prążki sinusoidalne jako bodźce wzrokowe ze średnią luminancją 39 cd/m². Kierunek ruchu prążków powinien naprzemiennie zmieniać się zgodnie i przeciwnie z ruchem wskazówek zegara.W trakcie testu należy rejestrować ruchy myszy za pomocą kamery umieszczonej nad zwierzęciem. Do oceny funkcji wzrokowej lewego oka należy wykorzystać bodziec przesuwający się zgodnie z ruchem wskazówek zegara, a dla prawego oka – przeciwnie do ruchu wskazówek zegara.Każdy test trwa około 15 minut i jest powtarzany niezależnie przez dwóch obserwatorów, którzy podczas testu liczą ruchy zsynchronizowane z przemieszczaniem się stopniowania jako ruchy pozytywne. Jeśli wystąpią one w ciągu 15 sekund od rozpoczęcia, po 15 sekundach należy zwiększyć bodziec wizualny, aby znaleźć najwyższą odpowiedź; taki wywołujący bodziec wizualny uznaje się za ostrość wzroku zwierzęcia. Następnie należy zbadać czułość kontrastową każdego zwierzęcia przy trzech preselekcjonowanych częstotliwościach przestrzennych; próg kontrastu dla każdego oka definiuje się jako najniższy kontrast wywołujący reakcje wzrokowe przy ustalonych częstotliwościach.Ciśnienie wewnątrzgałkowe miało tendencję do podwyższenia w prawie każdym oku poddanym terapii laserowej. Niemniej jednak mniej niż 5% myszy wykazywało fizyczne oznaki poważnych uszkodzeń, takich jak zapadnięte gałki oczne, ciężka zaćma, znaczące pigmenty, odwarstwienie lub krwawienie. Jeden z przykładów zmiany ciśnienia wewnątrzgałkowego został przedstawiony tutaj.Tydzień po zabiegu laserowym. Ciśnienie wewnątrzgałkowe w oku leczonym było prawie dwukrotnie wyższe niż w oku nieleczonym i pozostawało podwyższone przez około 16 tygodni. Podwyższone ciśnienie powróciło następnie do poziomu zbliżonego do normy.Około 20. tygodnia w oku poddanym zabiegowi nastąpił spadek ostrości wzroku po wykonaniu procedury. Stan ten utrzymywał się przez co najmniej sześć miesięcy i trwał dłużej niż wzrost ciśnienia wewnątrzgałkowego.Podobnie zaobserwowano niższą czułość kontrastową oka leczonego, w którym wystąpiło podwyższone ciśnienie wewnątrzgałkowe.

a-laser-induced-mouse-model-chronic-ocular-hypertension-to

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Model myszy z przewlekłym nadciśnieniem oka indukowany laserem do scharakteryzowania wad wzroku

Jaskra jest jedną z głównych przyczyn ślepoty na świecie. Podwyższone ciśnienie wewnątrzgałkowe stanowi główny czynnik ryzyka. Hipertonia oczna indukowana laserową fotokoagulacją jest jednym z dobrze ugruntowanych modeli zwierzęcych. Niniejszy film demonstruje, jak indukować hipertonię oczną za pomocą fotokoagulacji laserem argonowym u szczura.

Model przewlekłego nadciśnienia wewnątrzgałkowego indukowanego laserem u szczurów SD

Źródło: Lani-Louzada, R.,  i wsp., Kauteryzacja pełnego koła rąbkowego splotu naczyniowego w przypadku chirurgicznie wywołanej jaskry u gryzoni. J. Vis. Exp. (2022)Ten film pokazuje indukcję i monitorowanie podwyższonego ciśnienia wewnątrzgałkowego (IOP) w modelu szczurzym. Proces ten polega na kauteryzacji rąbkowych naczyń krwionośnych, co skutkuje niedrożnością naczyń i podwyższonym ciśnieniem wewnątrzgałkowym. Szczur może następnie wyzdrowieć, a ciśnienie wewnątrzgałkowe jest regularnie...

 Indukcja podwyższonego ciśnienia wewnątrzgałkowego w modelu szczurzym

Tutaj prezentujemy protokół neowaskularyzacji naczyniówki indukowanej laserem myszy (CNV), eksperymentalny model, który odtwarza naczyniowe cechy neowaskularnego zwyrodnienia plamki żółtej związanego z wiekiem (AMD). Po opanowaniu może niezawodnie i skutecznie indukować CNV jako system modelowy do testowania różnych środków eksperymentalnych.

Mysi model do neowaskularyzacji naczyniówkowej indukowanej laserem

Tutaj prezentujemy protokół indukcji nadciśnienia ocznego w mysim oku, który powoduje utratę komórek zwojowych siatkówki, co obserwuje się w jaskrze. Mikrogranulki magnetyczne są wstrzykiwane do przedniej komory i przyciągane do kąta tęczówkowo-rogówkowego za pomocą magnesu, aby zablokować odpływ cieczy wodnistej.

Magnetyczny model okluzji mikrokulek do wywoływania jaskry zależnej od nadciśnienia ocznego u myszy

Tutaj prezentujemy przydatność podłużnego obrazowania in vivo w obserwacji zmian morfologicznych wywołanej laserem neowaskularyzacji naczyniówkowej u myszy.

In vivo (in vivo) Multimodalne obrazowanie i analiza mysiego modelu neowaskularyzacji naczyniówki indukowanej laserem

Przewlekłe nadciśnienie oczne jest wywoływane przez zastosowanie szwu okołokończynowego u szczurów i myszy, co prowadzi do funkcjonalnego i strukturalnego pogorszenia komórek zwojowych siatkówki zgodnego z jaskrą.

Model jaskry indukowanej szwem okołolimbowym u szczurów i myszy

Tutaj opisujemy użycie optycznej koherentnej tomografii spektralnej (SD-OCT) do wizualizacji struktur siatkówki i oka in vivo w modelach zwyrodnienia siatkówki, jaskry, retinopatii cukrzycowej i krótkowzroczności.

Strukturalne oceny in vivo chorób oczu w modelach gryzoni przy użyciu optycznej koherentnej tomografii

Tutaj opisujemy zoptymalizowany protokół do zamykania żył siatkówki za pomocą róży bengalskiej i sterowanego laserowo systemu obrazowania siatkówki z zaleceniami maksymalizacji jego odtwarzalności w genetycznie modyfikowanych szczepach.

Optymalizacja mysiego modelu niedrożności żyły siatkówki w celu ograniczenia zmienności

Tutaj opisujemy technikę obrazowania in vivo wykorzystującą optyczną koherentną tomografię ułatwiającą diagnozę i ilościowy pomiar retinopatii u myszy.

Zastosowanie optycznej koherentnej tomografii do mysiego modelu retinopatii

Celem tego protokołu jest scharakteryzowanie nowego modelu neurodegeneracji jaskry opartej na 360° termicznej kauteryzacji rąbkowego splotu naczyniowego, wywołującej podostre nadciśnienie oczne.

Kauteryzacja pełnego koła rąbka splotu naczyniowego w przypadku jaskry wywołanej chirurgicznie u gryzoni

Poznaj metodę indukcji przewlekłego nadciśnienia ocznego u myszy za pomocą fotokoagulacji laserowej. Monitoruj ciśnienie wewnątrzgałkowe i ostrość wzroku w czasie, aby badać wpływ nadciśnienia na funkcje wzrokowe.

Mysi model przewlekłego nadciśnienia ocznego indukowany laserem w celu scharakteryzowania wad wzroku

Przeglądaj więcej filmów