Name: Ludzki model blaszki miażdżycowej ex vivo do badania biologii zmian chorobowych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-06T14:15:00.000+00:00
Duration: 5 min 51 s
Description: Poznaj model ex vivo blaszki miażdżycowej do badania procesów zapalnych w tkankach ludzkich. Ta metoda umożliwia analizę cytokin i chemokin w celu identyfikacji nowych celów terapeutycznych w leczeniu miażdżycy.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dziękujemy Nadine Wambsganss za doskonałą pomoc techniczną. Prace te były wspierane przez Niemiecką Fundację Badawczą (DFG) ER 682/2-1 oraz stypendium badawcze Niemieckiego Towarzystwa Kardiologicznego dla C. Erbela, a także stypendium badawcze od Niemieckiej Służby Akademickiej w Heidelbergu dla L. Zhao.

1. Przygotuj podłoże w następujący sposób
<ol>
	<li>Pożywka hodowlana: pożywka RPMI.</li>
	<li>Dodaj 10% płodowej surowicy cielęcej (FCS).</li>
	<li>Dodać 100 j./ml penicyliny G i 100 g/ml streptomycyny.</li>
</ol>
2. Przechowywanie świeżej płytki nazębnej do momentu użycia
<ol>
	<li>Operacja endarterektomii tętnicy szyjnej u pacjentów z objawami niedokrwiennymi lub bez objawów niedokrwiennych (udar, przemijający atak niedokrwienny) ze znacznym zwężeniem tętnicy szyjnej zostanie wykonana przez chirurgów naczyniowych, a endarterektomia tętnic wieńcowych podczas pomostowania aortalno-wieńcowego przez kardiochirurgów. Blaszki szyjne / wieńcowe muszą być usuwane en bloc, aby zachować strukturę blaszki miażdżycowej, jak opisano wcześniej5.</li>
	<li>Po usunięciu płytki nazębnej umieść próbkę w probówce wypełnionej pożywką i przechowuj ją na lodzie (płytka nazębna musi być całkowicie pokryta podłożem) do czasu użycia.</li>
</ol>
3. Przetwarzanie płytki nazębnej
<ol>
	<li>Użyj odpowiedniego naczynia do hodowli komórkowej (np. 60 mm) i dodaj 5 ml pożywki RPMI.</li>
	<li>Umieść tkankę płytki nazębnej w naczyniu hodowlanym (płytka nazębna powinna być całkowicie pokryta podłożem).</li>
	<li>Ostrożnie przytrzymaj tkankę płytki nazębnej na krawędziach tkanki za pomocą sterylnych kleszczy.</li>
	<li>Odetnij krawędzie próbki płytki nazębnej za pomocą sterylnego skalpela.</li>
	<li>Podziel tkankę płytki nazębnej na pół.</li>
	<li>Ocenić morfologię zmiany makroskopowo (zwapniałe, bogate w lipidy, pęknięte, skrzepliny, zwłóknienie).</li>
	<li>Przeanalizuj dokładną morfologię blaszki miażdżycowej po eksperymencie ex vivo za pomocą immunohistochemii. Użyj klasyfikacji AHA 10.</li>
	<li>Wyrzuć blaszki z silnym zwapnieniem lub zwłóknieniem.</li>
	<li>Pokrój tkankę płytki nazębnej na homologiczne małe kawałki (3 x 3 x 3 mm).</li>
	<li>Szokowe zamrożenie dwóch kawałków płytki nazębnej i przechowywanie ich w ciekłym azocie dla podstawowych wartości zmiany do czasu użycia.</li>
	<li>Przygotuj płytkę 48-dołkową.</li>
	<li>Dodaj 500 μl pożywki RPMI do każdego dołka użytego w eksperymencie.</li>
	<li>Prosimy o użycie co najmniej dwóch kawałków plakietki dla każdej grupy.</li>
	<li>Dodać substancję, która nas interesuje (np. specyficzne cytokiny i chemokiny).</li>
	<li>Użyj niestymulowanych kawałków płytki nazębnej jako kontroli.</li>
	<li>Losowo umieść odpowiednią liczbę kawałków płytki w studniach.</li>
	<li>Posadź kawałki płytki nazębnej dla wskazanych punktów czasowych.</li>
	<li>Do eksperymentu stymulacji tkanki płytki nazębnej za pomocą lipopolisacharydu (LPS)
	<ol>
		<li>Użyj następujących punktów czasowych: 3 godziny, 8 godzin i 24 godziny.</li>
		<li>Użyj odpowiednio 2 kawałków płytki nazębnej dla LPS i dwóch dla grupy niestymulowanej dla każdego punktu czasowego.</li>
		<li>Dodać 1 μg/ml lipopolisacharydu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Podczas inkubacji utrzymywać 48-dołkową płytkę w temperaturze 37 °C w wilgotnym powietrzu zawierającym 5% CO2 .</li>
</ol>
4. Po wskazanym czasie zbierz kawałki tkanki płytki nazębnej
<ol>
	<li>Szokowe zamrożenie fragmentów płytki nazębnej w celu izolacji mRNA i syntezy cDNA (szczegółowe informacje - patrz sekcja 5 protokołu).</li>
	<li>Zebrać supernatant i przechowywać go w temperaturze -20 °C do analizy ELISA.</li>
	<li>W przypadku western blotting rozbij i zlizuj tkankę płytki nazębnej. Przefiltruj lizat przez filtr odśrodkowy 0,65 μm i 0,1 μm.</li>
	<li>Osadź tkankę płytki nazębnej w tissue-tec lub parafinie w celu barwienia immunohistochemicznego.</li>
</ol>
5. Ekstrakcja RNA z fragmentów płytki hodowlanej
<ol>
	<li>Do homogenizacji należy użyć TissueLyser.</li>
	<li>Wyizoluj RNA za pomocą zestawu (patrz tabela materiałów) zgodnie z instrukcjami producenta.</li>
	<li>Oznaczyć ilość i jakość RNA próbek za pomocą spektrofotometru.</li>
	<li>Użyj zestawu cDNA firmy Boehringer do odwrotnej transkrypcji zgodnie z instrukcjami producenta.</li>
	<li>W przypadku ilościowej reakcji PCR należy użyć na przykład zestawu Roche do PCR w czasie rzeczywistym z SYBR Green.</li>
</ol>

<ol><li>Lusis, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Atherosclerosis.</a> Nature. 407, 233-241 (2000).</li>
<li>Hansson, G. K., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immune+response+in+atherosclerosis%3A+a+double-edged+sword%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">The immune response in atherosclerosis: a double-edged sword.</a> Nat Rev Immunol. 6, 508-519 (2006).</li>
<li>Virmani, R., Kolodgie, F. D., Burke, A. P., Farb, A., Schwartz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+from+sudden+coronary+death%3A+a+comprehensive+morphological+classification+scheme+for+atherosclerotic+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Lessons from sudden coronary death: a comprehensive morphological classification scheme for atherosclerotic lesions.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 20, 1262-1275 (2000).</li>
<li>Erbel, C., et al. Expression of IL-17A in human atherosclerotic lesions is associated with increased inflammation and plaque vulnerability. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aErbel%2C+C+%22Basic+Res+Cardiol%22">Basic Res Cardiol</a>. 106, 125-134 (2011).</li>
<li>Erbel, C., et al. Functional profile of activated dendritic cells in unstable atherosclerotic plaque. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aErbel%2C+C+%22Basic+Res+Cardiol%22">Basic Res Cardiol</a>. 102, 123-132 (2007).</li>
<li>Bentzon, J. F., Falk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atherosclerotic+lesions+in+mouse+and+man%3A+is+it+the+same+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Lipidol%22%5BJournal%5D)">Atherosclerotic lesions in mouse and man: is it the same disease.</a> Curr Opin Lipidol. 21, 434-440 (2010).</li>
<li>Tran, D. Q., Ramsey, H., Shevach, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+FOXP3+expression+in+naive+human+CD4%2BFOXP3+T+cells+by+T-cell+receptor+stimulation+is+transforming+growth+factor-beta+dependent+but+does+not+confer+a+regulatory+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Induction of FOXP3 expression in naive human CD4+FOXP3 T cells by T-cell receptor stimulation is transforming growth factor-beta dependent but does not confer a regulatory phenotype.</a> Blood. 110, 2983-2990 (2007).</li>
<li>Raes, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arginase-1+and+Ym1+are+markers+for+murine%2C+but+not+human%2C+alternatively+activated+myeloid+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Arginase-1 and Ym1 are markers for murine, but not human, alternatively activated myeloid cells.</a> J Immunol. 174, 6561-6562 (2005).</li>
<li>Ingersoll, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+gene+expression+profiles+between+human+and+mouse+monocyte+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Comparison of gene expression profiles between human and mouse monocyte subsets.</a> Blood. 115, 10-19 (2010).</li>
<li>Stary, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+history+and+histological+classification+of+atherosclerotic+lesions%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Natural history and histological classification of atherosclerotic lesions: an update.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 20, 1177-1178 (2000).</li>
<li>Galkina, E., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+and+inflammatory+mechanisms+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immune and inflammatory mechanisms of atherosclerosis.</a> Annu Rev Immunol. 27, 165-197 (2009).</li>
<li>Suganuma, T., Workman, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAP+kinases+and+histone+modification%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">MAP kinases and histone modification.</a> J Mol Cell Biol. 4, 348-350 (2012).</li>
<li>Libby, P., Ridker, P. M., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+and+challenges+in+translating+the+biology+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Progress and challenges in translating the biology of atherosclerosis.</a> Nature. 473, 317-325 (2011).</li>
<li>Niessner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+proinflammatory+effects+of+the+antiviral+cytokine+interferon-alpha+and+Toll-like+receptor+4+ligands+in+the+atherosclerotic+plaque%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Synergistic proinflammatory effects of the antiviral cytokine interferon-alpha and Toll-like receptor 4 ligands in the atherosclerotic plaque.</a> Circulation. 116, 2043-2052 (2007).</li>
<li>Monaco, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Canonical+pathway+of+nuclear+factor+kappa+B+activation+selectively+regulates+proinflammatory+and+prothrombotic+responses+in+human+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Canonical pathway of nuclear factor kappa B activation selectively regulates proinflammatory and prothrombotic responses in human atherosclerosis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 5634-5639 (2004).</li>
</ol>

Autorzy nie mają żadnych konfliktów do ujawnienia.

W niniejszej pracy przedstawiamy model hodowli płytki nazębnej ex vivo w celu zbadania wpływu potencjalnie istotnych substancji na biologię zmian miażdżycowych. Główną zaletą tej metody ex vivo jest możliwość oceny wpływu wskazanych substancji na komórki zapalne i ich wzajemne oddziaływanie komórkowe oraz szlaki i kaskady zapalne w obrębie zmian miażdżycowych człowieka. Kilka użytecznych metod (np. RT-PCR, western blot, immunohistochemia, cytometria przepływowa, ELISA) pomaga w kompleksowej ana...

Miażdżyca jako przewlekła choroba zapalna jest jedną z głównych przyczyn zgonów w krajach uprzemysłowionych1-2. Powikłania miażdżycy, zwłaszcza ostre zespoły wieńcowe, są związane z pękaniem wrażliwych zmian, powodując miażdżycę i niedrożność naczyń3. Odporność wrodzona i nabyta wydaje się być zaangażowana we wszystkie etapy miażdżycy2,4-5. Chociaż poczyniono znaczne postępy w leczeniu zawału mięśnia sercowego, skuteczne zapobieganie miażdżycy i niepożądanym zdarzeniom sercowo-naczyniowym nadal nie zostało rozwiązane. W związku z tym badanie biologii zmian chorobowych jest niezbędne do poszerzenia naszej wiedzy na temat patofizjologii miażdżycy oraz umożliwienia identyfikacji nowych celów terapeutycznych i opracowania nowych terapii.
W wielu przypadkach mysie modele są używane do badania patofizjologii konkretnych chorób. Jednak badaniu miażdżycy przy użyciu modeli mysich towarzyszy kilka ograniczeń: (1) Zwykle myszy z miażdżycą otrzymują dietę o wysokiej zawartości cholesterolu. Poziomy cholesterolu w tych modelach nie mogą być porównywane z poziomami u pacjentów z podwyższonym poziomem cholesterolu w surowicy6. (2) Istnieją znaczne różnice między mysim a ludzkim układem odpornościowym; w związku z tym foxp3 jest specyficznym markerem mysich regulatorowych limfocytów T, podczas gdy ludzka ekspresja foxp3 w ludzkich komórkach T niekoniecznie nadaje regulatorowy fenotyp7. Ponadto paradygmat Th1 / Th2 zdefiniowany u ludzi nie jest w pełni przenoszony na mysie limfocyty T. (3) W ludzkich komórkach szpikowych nie istnieje pewna liczba markerów używanych do identyfikacji mysich monocytów i makrofagów, takich jak F4/80 i markery klasycznych (M1) i alternatywnych (M2) wzorców aktywacji8. (4) Stwierdzono, że ekspresja genów mysich i ludzkich monocytów krwi obwodowej jest zasadniczo różna9.
Dlatego, aby zwiększyć nasze zrozumienie przewlekłych procesów zapalnych w ludzkiej miażdżycy, musimy korzystać z modeli pracujących z ludzkimi tkankami, krwią lub komórkami. W tym artykule opisano model hodowli tkankowej ludzkiej płytki nazębnej, który umożliwia badanie potencjalnych nowych substancji w koncepcji biologii zmian zapalnych człowieka.

<table><tbody><tr><td>Średni RPMI</td><td>Gibco</td><td>21875-091</td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>Gibco</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr><td>Penicylina-streptomycyna</td><td>Sigma</td><td>P-4458</td><td></td></tr><tr><td>15 ml Probówka</td><td>Sarstedt</td><td>62,554,502</td><td></td></tr><tr><td>Naczynie hodowlane (60 mm)</td><td>Pomarańczowy Scientific</td><td>5550200</td><td></td></tr><tr><td>Komórka LPS</td><td>Sigma</td><td>L4516</td><td></td></tr><tr><td> płytki hodowlane 48-dołkowy</td><td>skalpel Greiner</td><td>677102</td><td></td></tr><tr><td>- jednorazowy</td><td>Feather</td><td>FEA200130011</td><td></td></tr><tr><td>TissueLyser</td><td>Precellys 24 Dual</td><td>Cat. Nie. EQ03119.200.RD010.0</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw RNeasy (Mini)&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>Nr kat. Nr 74104</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw cDNA firmy Boehringer&nbsp;</td><td>Roche Diagnostics</td><td>Kat. Nr 11483188001</td><td></td></tr><tr><td>Spektrofotometr Nanodrop&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Naukowy</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ludzki model blaszki miażdżycowej ex vivo do badania biologii zmian chorobowych

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

Miażdżyca jest przewlekłą chorobą zapalną układu krwionośnego. Istnieją różne metody badania związku zapalnego w zmianach miażdżycowych. Modele mysie są ważnym narzędziem do badania procesów zapalnych w miażdżycy, ale modele te cierpią z powodu różnic fenotypowych i funkcjonalnych między mysim a ludzkim układem odpornościowym. Eksperymenty komórkowe in vitro są wykorzystywane do specyficznej oceny zmian zależnych od typu komórki spowodowanych przez substancję będącą przedmiotem zainteresowania, ale zmiany zależne od hodowli i niemożność analizy wpływu określonych cząsteczek w kontekście związku zapalnego w zmianach miażdżycowych ograniczają wpływ wyników. Ponadto pomiar poziomu cząsteczki będącej przedmiotem zainteresowania w ludzkiej krwi pomaga w dalszym badaniu jej znaczenia klinicznego, ale reprezentuje to ogólnoustrojowy, a nie miejscowy stan zapalny. Dlatego opisujemy tutaj model kultury płytki nazębnej do badania biologii zmian miażdżycowych u ludzi ex vivo. Krótko mówiąc, świeże blaszki uzyskuje się od pacjentów poddawanych endarterektomii lub pomostowaniu aortalno-wieńcowemu i przechowuje się je w pożywce RPMI na lodzie do czasu użycia. Próbki są cięte na małe kawałki, a następnie losowo rozdzielane na 48-dołkową płytkę, zawierającą pożywkę RPMI oprócz substancji będącej przedmiotem zainteresowania, takiej jak cytokiny lub chemokiny pojedynczo lub w połączeniu przez określony czas. Po inkubacji fragmenty płytki nazębnej można zamrozić szokowo w celu izolacji mRNA, zatopić w parafinie lub OCT w celu barwienia immunohistochemicznego lub rozbić i poddać lizie w celu uzyskania western blot. Ponadto komórki można wyizolować z płytki nazębnej w celu analizy cytometrii przepływowej. Ponadto supernatanty mogą być zbierane do pomiaru białka za pomocą testu ELISA. Podsumowując, zaprezentowany model ex vivo otwiera możliwość dalszych badań nad biologią zmian zapalnych, co może zaowocować identyfikacją nowych mechanizmów chorobowych i celów terapeutycznych.

W niniejszej części przedstawiamy szereg rycin demonstrujących wyniki hodowli blaszek miażdżycowych ex vivo. Aby ocenić zmiany w środowisku zapalnym w odpowiedzi na badany czynnik w eksperymentalnym modelu ex vivo, mierzymy poziomy różnych cząsteczek, o których wiadomo, że biorą one główny udział w aterogenezie. Jako reprezentatywne cytokiny proaterogenne wybrano TNFa, IL6 oraz IFNg2,11. Dodatkowo, w celu oceny zmian prozakrzepowych, wykorzystujemy czynnik von Willebranda oraz czynnik tkankow...

Miażdżyca jest przewlekłym procesem zapalnym. Manuskrypt ten ilustruje łatwy w użyciu model ex vivo do badania świeżych blaszek miażdżycowych tętnic szyjnych lub wieńcowych. Model ex vivo pozwala na badanie potencjalnych substancji w środowisku zapalnym w zmianach miażdżycowych u ludzi, a wyniki mogą być analizowane różnymi metodami.

Ludzki model blaszki miażdżycowej ex vivo do badania biologii zmian chorobowych

Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the vasculature. There are various methods to study the inflammatory compound in atherosclerotic ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest przedstawienie łatwego w użyciu modelu ex vivo do badania świeżych blaszek miażdżycowych tętnic szyjnych lub wieńcowych. Jest to realizowane poprzez pobranie świeżych blaszek od pacjentów poddawanych endarterektomii lub pomostowaniu tętnic wieńcowych. Drugim krokiem jest pocięcie preparatu na małe fragmenty.Następnie należy przeprowadzić losowy rozdział fragmentów blaszki do płytki 48-dołkowej zawierającej podłoże RPMI. Ostatnim krokiem jest dodanie badanej substancji, takiej jak cytokiny lub chemokiny, osobno lub w kombinacjach, na określone okresy czasu. W końcowej fazie do analizy eksperymentu z kulturą blaszki można wykorzystać izolację RNA, qPCR, immunohistochemię oraz EISA.Przedstawiona tutaj metoda może pomóc w odpowiedzi na kluczowe pytania z zakresu zapaleń naczyniowych, takie jak poszerzenie wiedzy na temat patofizjologii miażdżycy u ludzi. Zastosowania tej techniki obejmują diagnostykę oraz terapię przyczyn miażdżycy. Jest to jedyna metoda pozwalająca na badanie roli interesujących cząsteczek w środowisku zapalnym wewnątrz ludzkich zmian miażdżycowych.Dzięki temu możliwe może być zidentyfikowanie nowych celów terapeutycznych i opra

a-human-ex-vivo-atherosclerotic-plaque-model-to-study-lesion-biology

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Człowiek Ex Vivo Model płata miażdżycowego do badania biologii zmian

Szczegółowo opisujemy nowy cewnik do fluorescencji w bliskiej podczerwieni (NIRF), służący do dwuwymiarowego wewnątrznaczyniowego obrazowania molekularnego biologii blaszki miażdżycowej in vivo. Cewnik NIRF umożliwia wizualizację kluczowych procesów biologicznych, takich jak zapalenie, poprzez wykrywanie obecności aktywowalnych i celowanych fluorochromów NIR wykazujących powinowactwo do blaszki miażdżycowej. Cewnik spełnia wymogi inżynieryjne i energetyczne stosowane w klinice i jest...

In vivo wewnątrznaczyniowe obrazowanie molekularne blaszek zapalnych z wykorzystaniem fluorescencji w bliskiej podczerwieni (NIRF) – multimodalne podejście do obrazowania miażdżycy

Opisujemy procedury ilościowego określania i charakteryzowania zmian miażdżycowych w modelach mysich, wykorzystując precyzyjne przekroje zatoki aortalnej aorty i aorty wstępującej w połączeniu z analizą histochemiczną i immunohistochemiczną.

Analiza ilościowa i charakterystyka zmian miażdżycowych w mysiej zatoce aortalnej

Opisujemy protokół indukowania miażdżycy w korzeniu aorty myszy ApoE-/- karmionych dietą aterogenną, poprzez ciągłe uwalnianie aldosteronu. Opisano również metody charakteryzowania składu płytki nazębnej.

Indukcja blaszek miażdżycowych poprzez aktywację receptorów mineralokortykoidowych u myszy z niedoborem apolipoproteiny E

Proponujemy ustandaryzowany protokół do scharakteryzowania składu komórkowego późnych zmian miażdżycowych u myszy, w tym systematyczne metody preparacji zwierząt, osadzania tkanek, cięcia, barwienia i analizy tętnic ramienno-głowowych od myszy śledzących linię komórek mięśni gładkich w atheroprone.

Analiza ilościowa składu komórkowego w zaawansowanych zmianach miażdżycowych myszy śledzących linię komórek mięśni gładkich

Mysie modele miażdżycy są użytecznymi narzędziami do badania szlaków patogennych na poziomie molekularnym, ale wymagają standaryzowanej kwantyfikacji rozwoju zmian. Protokół ten opisuje zoptymalizowaną metodę określania wielkości zmiany w głównych naczyniach tętniczych, w tym w korzeniu aorty, łuku aortalnym i tętnicy ramienno-głowowej.

Kwantyfikacja miażdżycy u myszy

Ten protokół krok po kroku przeprowadza procedurę analizy obciążenia miażdżycowego u myszy. Badacze mogą użyć tego protokołu do porównania obfitości, lokalizacji i wielkości zmian miażdżycowych u różnych zwierząt.

Obrazowanie i analiza zmian całej aorty barwionych czerwienią olejową O w mysim modelu hiperlipidemii tętniaka

Tutaj prezentujemy zoptymalizowane protokoły oczyszczania tkanek do obrazowania mysiej aorty w trzech wymiarach (3D). Opisujemy najnowocześniejsze procedury barwienia immunologicznego, oczyszczania optycznego i obrazowania z zamiarem określenia anatomicznej bliskości obwodowego układu nerwowego z blaszkami miażdżycowymi i przydanką w miażdżycy.

Trójwymiarowe obrazowanie tkanek aorty w miażdżycy

Ten protokół dostarcza kompleksową metodologię analizy ilościowej blaszek miażdżycowych, aby ułatwić bardziej dogłębne badania nad mechanizmami i postępem miażdżycy.

Izolacja i analiza zmian łuku aorty i korzeni w mysim modelu miażdżycowym

Próbki tkanek po endarterektomii wieńcowej zostały przetworzone w celu wyizolowania pojedynczych jąder przy użyciu zoptymalizowanego protokołu dysocjacji. Integralność izolowanych jąder została zweryfikowana za pomocą trzech uzupełniających się podejść: barwienia trypanowym wykluczającym do oceny integralności błony, mikroskopii konfokalnej opartej na DAPI do potwierdzenia morfologii jądrowej oraz cytometrii przepływowej do ilościowej oceny wydajności i czystości jądrowej.

Izolacja pojedynczego jądra od tkanki po endarterektomii wieńcowej pacjentów poddanych przeszczepowi tętnic wieńcowych

Istnieje ogromna potrzeba nieinwazyjnego rozpoznawania miażdżycy; w niniejszej pracy demonstrujemy, w jaki sposób badanie FDG-PET/CT może zostać wykorzystane do wykrywania i ilościowego określania aktywności blaszki miażdżycowej oraz stanu zapalnego naczyń.

Ilościowe oznaczanie aktywności blaszki miażdżycowej i stanu zapalnego naczyń krwionośnych za pomocą pozytonowej tomografii emisyjnej z tomografią komputerową z użyciem [18-F] fluorodeoksyglukozy (FDG-PET/CT)

Poznaj model ex vivo blaszki miażdżycowej do badania procesów zapalnych w tkankach ludzkich. Ta metoda umożliwia analizę cytokin i chemokin w celu identyfikacji nowych celów terapeutycznych w leczeniu miażdżycy.

Ludzki model blaszki miażdżycowej ex vivo do badania biologii zmian chorobowych

Przeglądaj więcej filmów