Ksenograf torebki nerkowej i podskórna implantacja osadu w celu oceny kancerogenezy gruczołu krokowego i łagodnego przerostu gruczołu krokowego

Techniki zilustrowane w tym filmie są przydatne w eksperymentach, oceniając hormonalną regulację kancerogenezy i łagodny wzrost prostaty. Pierwsze prasy apelacyjne używane do wytwarzania granulek hormonów, które pozwolą na ciągłe podawanie. Następnie przygotowuje się szklane pipety z zaokrąglonymi końcówkami po ekterioryzacji nerki.

Końcówka pipety służy do pomocy we wprowadzaniu przeszczepu. Skompresowane granulki hormonu są następnie wszczepiane podskórnie. Ostatecznie uzyskuje się wyniki, które pokazują wpływ leczenia hormonalnego na wzrost łagodnych ksenoprzeszczepów tkankowych.

Techniki przedstawione w tym filmie są proste do wykonania i powtarzalne. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w tej dziedzinie, takie jak to, w jaki sposób hormony są zaangażowane w transformację łagodnych komórek w nowotwór, a także w jaki sposób łagodny wzrost prostaty jest regulowany przez hormony. Implikacje tej techniki rozciągają się w kierunku potencjalnych nowych terapii i strategii zapobiegania łagodnemu przerostowi protetycznemu i rakowi prostaty.

Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które są nowe w tej technice, będą zmagać się z technicznym aspektem kapsułki nerkowej. Granulki ksenoprzeszczepu są przygotowywane w kapturze bezpieczeństwa chemicznego przy użyciu odpowiedniego sprzętu ochronnego, aby rozpocząć dokładne czyszczenie sprzętu do produkcji peletów 70% etanolem, aby zapobiec zanieczyszczeniu krzyżowemu. Następnie zważ żądaną ilość hormonu w proszku, pozwalając na około 5% dodatkowego materiału, aby zrekompensować straty podczas prasowania.

Niektóre hormony wymagają środka wiążącego lub wypełniacza, który jest mieszany przed producentem granulek. Tutaj estradiol jest łączony z wypełniaczem cholesterolu, co daje 25 miligramów granulki. Gdy wszystko zostanie zważone i połączone, przenieś proszek do dset.

Umieść barwnik pod prasą i mocno popchnij dźwignię w dół, aby ścisnąć granulkę. Używaj stałego nacisku, aby utrzymać stały stosunek powierzchni do objętości. Następnie odwróć uchwyt na barwnik i ponownie popchnij dźwignię w dół, aby uwolnić granulkę.

Sprawdź granulkę pod kątem integralności i określ, czy końcowa masa mieści się w pożądanym zakresie. Granulki mogą być wytwarzane przed zabiegiem chirurgicznym i przechowywane w zależności od stabilności stosowanego hormonu lub leku podczas noszenia odpowiedniej ochrony. Przełóż końcówkę szklanej pipety do pastiera przez płomień, palnik Bunsena, aby uzyskać wypolerowaną, zaokrągloną końcówkę.

Utrzymuj stały i lekki ruch pipety, aby uniknąć gorących punktów. Następnie umieść pipetę w płomieniu pod kątem około 60 stopni, aby uzyskać zakrzywioną, zaokrągloną końcówkę. Ta końcówka zostanie wykorzystana do stworzenia kieszeni do przeszczepu pod torebką nerkową.

Przed rozpoczęciem zabiegu chirurgicznego wysterylizuj wszystkie niezbędne narzędzia i przygotuj miejsce pracy. Po odpowiednim znieczuleniu zwierzęcia należy zdezynfekować miejsce operowane, wielokrotnie stosując betadynę i alkohol. Po nałożeniu sterylnych serwetek na ten obszar wykonuje się dwu- lub trzycentymetrowe nacięcie grzbietowej linii środkowej.

Następnie oddziel leżącą pod spodem skórę właściwą od ściany ciała. Oddziel obie strony nacięcia w przypadku szczepienia obustronnego lub tylko jedną w przypadku szczepienia jednostronnego. Po rozdzieleniu umieść mysz w pozycji bocznej i zlokalizuj nerkę, oglądając profil nerkowy przez ścianę mięśniową.

Delikatny nacisk kciukiem i palcem wskazującym może pomóc w wizualizacji narządów wewnętrznych za pomocą cienkich nożyczek do tęczówki i zachowaniu ostrożności, aby uniknąć głównych naczyń krwionośnych i nerwów rdzeniowych. Wykonaj jednocentymetrowe nacięcie w ścianie ciała równolegle do kręgosłupa. Poszerz to nacięcie do półtora do dwóch centymetrów, delikatnie otwierając nożyczki szerzej.

Po umieszczeniu ich w początkowym nacięciu, zewnętrz nerkę, wywierając delikatny nacisk na zewnątrz ściany mięśniowej po obu stronach nerki. Następnie wsuń krawędzie skóry poniżej zewnętrznej nerki, która będzie spoczywać na ścianie ciała. Jeśli obecne są również inne struktury, można je delikatnie schować, podczas gdy nerka jest na zewnątrz.

Utrzymuj nawilżenie torebki nerkowej, stosując sterylną sól fizjologiczną. Delikatnie unieś torebkę nerkową i wykonaj nacięcie o średnicy od dwóch do czterech milimetrów. Wielkość nacięcia zależy od wielkości przeszczepu, ale powinna być zminimalizowana, aby zachować integralność torebki.

Zaokrągloną, zamkniętą końcówkę przygotowanej wcześniej pipety włożyć pod kapsułkę styczna do powierzchni nerki. Po włożeniu delikatnie otwórz małą kieszeń na przeszczepy, zachowując szczególną ostrożność, aby nie uszkodzić nerki. Przeszczepy tkanki miąższowej przygotowywane są ze świeżej tkanki prostaty uzyskanej podczas resekcji chirurgicznej.

Podnieś przeciętą krawędź torebki nerkowej i włóż przeszczep do kieszeni. Za pomocą końcówki pipety można umieścić kilka przeszczepów pod torebką nerkową i równomiernie rozmieścić je na powierzchni nerki. Po zakończeniu przeszczepu delikatnie unieś boki nacięcia ściany mięśniowej, aby umieścić nerkę z powrotem w jamie ciała.

Upewnij się, że przeszczep nie wyślizgnął się spod kapsułki. Pojedynczy szew służy do zamknięcia ściany mięśniowej przed przystąpieniem do podskórnej implantacji granulki. Po zakończeniu szczepienia oddziel leżącą pod spodem skórę właściwą od ściany ciała w kierunku czaszki.

Delikatnie unieś czaszkową część nacięcia skóry, aby utworzyć kieszeń, trzymając osad hormonu Delikatnie za pomocą prostych ząbkowanych kleszczy włóż granulkę w kark szyi. Za pomocą kleszczy zębatych wyrównaj krawędzie skóry i przyłóż dwa do trzech klipsów chirurgicznych, aby zamknąć nacięcie. W tym przykładzie pierwotne ksenoprzeszczepy tkankowe od pacjentów z łagodnym rozrostem gruczołu krokowego zostały uzupełnione egzogennym testosteronem.

Przez jeden miesiąc groty strzał oznaczają lokalizacje ksenoprzeszczepów. Wszczepienie torebki nerkowej może być również wykorzystane do oceny kancerogenezy hormonalnej. W tym przypadku rekombinanty komórkowe zawierające łagodny nabłonek prostaty i indukcyjny mechy układu moczowo-płciowego tworzą łagodne narośla u nieleczonych myszy.

W tym przykładzie ten sam przeszczep jest hodowany w żywicielu, który otrzymywał podskórne granulki testosteronu i estradiolu przez cztery miesiące i wybrał raka prostaty, który atakuje torebkę nerkową. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak wytwarzać i wszczepiać skompresowane granulki hormonów, a także jak stworzyć szklaną pipetę do operacji i wykonać ksenoprzeszczep torebki nerkowej. Podczas wykonywania tej procedury należy pamiętać o delikatnym obchodzeniu się z torebką nerkową, utrzymywaniu wilgoci i unikaniu uszkodzenia miąższu nerki Po tej procedurze.

Można zastosować inne metody, takie jak histologia, immunohistochemia i techniki molekularne, w celu wykrycia R-N-A-D-N-A lub białek będących przedmiotem zainteresowania. Pozwoli to na lepszą ocenę charakteru obserwowanego łagodnego lub złośliwego wzrostu. Nie zapominaj, że hormony wykorzystywane w tych eksperymentach są potencjalnie teratogenne i rakotwórcze.

Producent skompresowanych granulek hormonalnych powinien być zawsze wykonywany w kapturze bezpieczeństwa chemicznego. Na każdym etapie procedury opisanej w tym filmie należy zawsze nosić odpowiednie środki ochrony osobistej.