Model odwarstwienia siatkówki u gryzoni przez podsiatkówkowe wstrzyknięcie hialuronianu sodu

Ogólnym celem tej procedury jest stworzenie eksperymentalnych odwarstwień siatkówki o powtarzalnej i trwałej wysokości odwarstwienia bez krwotoku podsiatkówkowego. Osiąga się to za pomocą pierwszej cewki, skroniowej spojówki na tylnym rąbku, aby oddzielić spojówkę od twardówki. W drugim kroku końcówka igły o rozmiarze 30 służy do wykonania samouszczelniającego się nacięcia twardówki i nakłucia rogówki.

Następnie sód jest wstrzykiwany do przestrzeni podsiatkówkowej w celu odłączenia siatkówki neurosensorycznej od leżącego poniżej nabłonka barwnikowego siatkówki. W ostatnim etapie klej cyjanoakrylowy jest umieszczany na ranie twardówki, a spojówka jest ponownie mocowana do swojej pierwotnej pozycji, zmniejszając ryzyko wycieku moczu z hali sodu. Ostatecznie dno oka jest badane za pomocą szkła nakrywkowego, aby potwierdzić utworzenie odwarstwienia siatkówki w bolusie bez krwotoku podsiatkówkowego.

Istniejące metody zmniejszania odwarstwienia siatkówki u gryzoni mogą powodować zmienność wysokości i utrzymywanie się odwarstwienia siatkówki, co prowadzi do pomiaru niespójnych wskaźników śmierci komórek. Dzięki tej technice można stworzyć powtarzalne pęcherzowe i trwałe odwarstwienia siatkówki przy zmniejszonym ryzyku hemoroidów podsiatkówkowych, co pozwala na wiarygodny model odwarstwienia siatkówki u gryzoni. Eksperymentalne odwarstwienie siatkówki u gryzoni jest stosunkowo proste do przeprowadzenia, ma rozsądny przebieg w czasie i jest dość podobne do choroby ludzkiej.

Jest to więc świetny model do badania mechanizmów śmierci komórek fotoreceptorowych i terapii zapobiegających utracie wzroku. W zaburzeniach zwyrodnieniowych siatkówki Wiadomo, że zmienna śmierć komórek fotoreceptora w odłączonej siatkówce jest korzystna do stworzenia powtarzalnego odwarstwienia bez krwotoku podsiatkówkowego. Dzieje się tak, ponieważ wydłużony czas trwania odwarstwienia siatkówki lub wystąpienie krwotoku podsiatkówkowego może wpływać na śmierć komórek fotoreceptorów.

Po znieczuleniu ośmiotygodniowej myszy przytnij wąsy zwierzęcia, a następnie rozszerz źrenicę roztworem zawierającym 5% fenylu i 0,5% tropiku pod mikroskopem chirurgicznym. Wytnij zwierzę clia, zastosuj znieczulenie miejscowe, 0,5% roztwór okulistyczny chlorowodorku propanu. Umieść mysz w pozycji bocznej z nosem skierowanym w stronę chirurga, a następnie przyłóż spojówkę skroniową do tylnego rąbka, oddzielając spojówkę od twardówki za pomocą kleszczy.

Chwyć spojówkę na rąbku, aby kontrolować oko. Następnie trzymając igłę o rozmiarze 30 ze skosem skierowanym do góry. Użyj końcówki igły, aby wykonać tunel przez twardówkę, penetrując twardówkę do naczyniówki bez penetracji siatkówki.

Następnie, trzymając igłę o rozmiarze 30 równolegle do tęczówki, nakłuj rogówkę, aby zmniejszyć ciśnienie wewnątrzgałkowe. Teraz skieruj fazę w dół. Włóż igłę o rozmiarze 33 podłączoną do strzykawki Hamiltona o pojemności 10 mikrolitrów do przestrzeni podsiatkówkowej i wstrzyknij 3,5 mikrolitra moczu sodu.

Spowoduje to odłączenie około 50% siatkówki neurosensorycznej od leżącego poniżej nabłonka barwnikowego siatkówki. Za pomocą kleszczy popchnij rogówkę wokół nakłucia rogówki, aby ciecz wodnista wypłynęła z nakłucia rogówki, a następnie użyj chirurgicznej włóczni celulozowej, aby potwierdzić brak wycieku z rany twardówki, aby zmniejszyć ryzyko wycieku moczu z sodu. Umieść klej cyjanoakrylowy na ranie twardówki, a następnie ponownie przymocuj spojówkę do jej pierwotnej pozycji.

Użyj szkła nakrywkowego, aby sprawdzić dno oka i potwierdzić utworzenie odwarstwienia siatkówki w bolusie bez krwotoku podsiatkówkowego. Na koniec nałóż maść z antybiotykiem na oko, aby zmniejszyć ryzyko infekcji. Trzymaj mysz na poduszce grzewczej, aby zapobiec niskiej temperaturze ciała.

Po obniżeniu ciśnienia krwi. Zwróć zwierzę z powrotem do klatki po przebudzeniu się z narkozy. Aby ocenić trwałość odwarstwienia siatkówki wykonanego za pomocą tego protokołu, kriogeniczne sekcje wykonano w trzecim, siódmym i czternastym dniu po indukcji odwarstwienia.

Dla każdego punktu czasowego użyto sześciu oczu, hematyny i eozyny. Barwienie użyto do wizualizacji odcinków, z których każdy wykazywał bolus. Odwarstwienie siatkówki zbliżające się do soczewki.

Żadne oczy nie wykazywały żadnych oznak infekcji lub uszkodzenia soczewki. Po opanowaniu tej operacji można ją wykonać w ciągu około pięciu minut Podczas próby tej procedury ważne jest, aby wykonywać każdy krok delikatnie, aby uniknąć wycieku sodu, krwotoku podsiatkówkowego o wysokim oświetleniu lub uszkodzenia soczewki, które mogą wpływać na śmierć komórki receptorowej w odłączonej siatkówce. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak stworzyć eksperymentalne odwarstwienie siatkówki u gryzoni z powtarzalną i utrzymującą się wysokością odwarstwienia bez krwotoku podsiatkówkowego.