Name: Model odwarstwienia siatkówki u gryzoni przez podsiatkówkowe wstrzyknięcie hialuronianu sodu (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-11T15:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 58 s
Description: Poznaj metodę podsiatkówkowego wstrzyknięcia hialuronianu sodu u gryzoni, tworzącą powtarzalne odwarstwienie siatkówki bez krwawienia. Technika umożliwia badanie mechanizmów obumierania fotoreceptorów i testowanie terapii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy Wendy Chao za wsparcie w krytycznej recenzji. Praca ta była wspierana przez Bausch & Lomb Vitreoretinal Fellowship (HM), grant EY014104 National Eye Institute (JWM), Research to Prevent Blindness Foundation (DGV), Lions Eye Research Fund (DGV) oraz hojną darowiznę rodziny Yeatts (JWM i DGV).

Wszystkie eksperymenty na zwierzętach zostały przeprowadzone zgodnie z oświadczeniem Stowarzyszenia Badań nad Widzeniem i Okulistyką dotyczącą wykorzystania zwierząt w badaniach nad oczami i wzrokiem oraz wytycznymi i przepisami określonymi przez Komitet Opieki nad Zwierzętami w Massachusetts Eye and Ear Infirmary.
1. Obróbka wstępna
<ol>
 <li>Znieczulij 8-tygodniową mysz wstrzyknięciem dootrzewnowym mieszaniny 60 mg/kg ketaminy i 6 mg/kg ksylazyny. </li>
 <li>Obetnij wąsy. Dzieje się tak, ponieważ zakłócają one wizualizację i rozmieszczenie instrumentów.</li>
 <li>Rozszerz źrenicę za pomocą 5% fenylefryny i 0,5% tropikamidu. </li>
 <li>Wytnij rzęski. Dzieje się tak również dlatego, że zakłócają one wizualizację i rozmieszczenie instrumentów. </li>
 <li>Zastosuj znieczulenie miejscowe (0,5% roztwór okulistyczny chlorowodorku proparakainy). </li>
</ol>
2. Operacja pod mikroskopem
<ol>
 <li>Ustaw mysz w pozycji bocznej z nosem skierowanym w stronę chirurga. Wykonuje się szczypanie palca u nogi w celu potwierdzenia znieczulenia chirurgicznego, a przed rozpoczęciem operacji zakłada się sterylne rękawiczki.</li>
 <li>Naciąć spojówkę skroniową na tylnym rąbku i oddzielić spojówkę od twardówki. Unikaj penetrowania twardówki. Po tym kroku chwyć spojówkę na rąbku kleszczami, aby kontrolować oko. </li>
 <li>Wykonaj samouszczelniające się nacięcie twardówki za pomocą końcówki igły 30 G ze skosem skierowanym do góry. Wykonaj tunel twardówkowy przez twardówkę i wniknij w twardówkę do naczyniówki (ryc. 1). Unikać penetracji siatkówki. Jeśli wystąpi krwawienie naczyniówkowe i wyjdzie przez ranę twardówki, wykonaj zwężenie włócznią chirurgiczną, aż krwawienie ustanie. Ta rana twardówkowa zostanie samoczynnie uszczelniona ciśnieniem wewnątrzgałkowym.</li>
 <li>Nakłuć rogówkę igłą 30 G, aby zmniejszyć ciśnienie wewnątrzgałkowe. Igły należy używać równolegle do tęczówki, aby uniknąć uszkodzenia tęczówki i soczewki podczas wprowadzania do komory przedniej. Ciśnienie wewnątrzgałkowe spowoduje samouszczelnienie się rany. </li>
 <li>Włóż igłę 33 G podłączoną do strzykawki Hamiltona 10 μl do przestrzeni podsiatkówkowej ze skosem skierowanym w dół (w kierunku wewnętrznego oka) i delikatnie wstrzyknij 3,5 μl hialuronianu sodu, aby odłączyć siatkówkę neurosensoryczną od leżącego pod nią RPE. Należy unikać penetracji siatkówki igłą 33 G, ponieważ hialuronian sodu dostanie się do przestrzeni ciała szklistego, ale nie do przestrzeni podsiatkówkowej, jeśli siatkówka zostanie przeniknięta. Należy również unikać szybkiego wstrzykiwania, ponieważ spowoduje to rozdarcie jamy ustnej, a hialuronian sodu wycieknie do przedniej komory.</li>
 <li>Pozwól, aby ciecz wodnista wypłynęła z nakłucia rogówki, popychając rogówkę wokół nakłucia rogówki za pomocą kleszczy, aby wyregulować ciśnienie wewnątrzgałkowe. </li>
 <li>Potwierdź brak wycieku z rany twardówki za pomocą włóczni chirurgicznej. </li>
 <li>Aby zmniejszyć ryzyko wycieku hialuronianu sodu, umieść klej chirurgiczny z cyjanoakrylanem na ranie twardówki. </li>
 <li>Ponownie przymocuj spojówkę do jej pierwotnej pozycji za pomocą kleju chirurgicznego z cyjanoakrylanem. To jeszcze bardziej zmniejszy ryzyko wycieku hialuronianu sodu. </li>
 <li>Sprawdź dno oka za pomocą szkła nakrywkowego i potwierdź utworzenie pęcherzowego RD bez krwotoku podsiatkówkowego. </li>
</ol>
3. Po zabiegu
<ol>
 <li>Nałóż maść z antybiotykiem bacytracyny na oko, aby zmniejszyć ryzyko infekcji.</li>
 <li>Trzymaj myszy na poduszce grzewczej, aby zapobiec znieczuleniu (mieszaninie ketaminy i ksylazyny) powodującemu niską temperaturę ciała po niskim ciśnieniu krwi. </li>
 <li>Umieść myszy z powrotem w klatce dla zwierząt po przebudzeniu z narkozy. Codziennie monitoruj myszy pod kątem powikłań. Jeśli pojawią się jakiekolwiek komplikacje, poddaj myszy eutanazji zgodnie z poniższym opisem. </li>
</ol>
4. Poświęcenie
<ol>
 <li>Poddać myszy eutanazji przez zwichnięcie szyjki macicy po dootrzewnowym wstrzyknięciu 100 mg / kg pentobarbitalu sodu i wyłuszczyć oczy w odpowiednich punktach czasowych dla każdego eksperymentu (nie pokazano). Unikaj wywierania nacisku na oko podczas enukleacji, ponieważ hialuronian sodu może wyciekać. Pęcherzowe RD powinny utrzymywać się przez co najmniej 14 dni.
 </li>
</ol>

<ol><li>Anderson, D. H., Guerin, C. J., Erickson, P. A., Stern, W. H., Fisher, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+recovery+in+the+reattached+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Morphological recovery in the reattached retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 27, 168-183 (1986).</li>
<li>Cook, B., Lewis, G. P., Fisher, S. K., Adler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptotic+photoreceptor+degeneration+in+experimental+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Apoptotic photoreceptor degeneration in experimental retinal detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 990-996 (1995).</li>
<li>Zacks, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caspase+Activation+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Caspase Activation in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 1262-1267 (2003).</li>
<li>Zacks, D. N., Han, Y., Zeng, Y., Swaroop, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Signaling+Pathways+and+Stress-Response+Genes+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Activation of Signaling Pathways and Stress-Response Genes in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 47, 1691-1695 (2006).</li>
<li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+cytokine+responses+to+retinal+detachment+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis%22%5BJournal%5D)">Characterization of cytokine responses to retinal detachment in rats.</a> Mol. Vis. 12, 867-878 (2006).</li>
<li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+Necrosis+Factor-Mediates+Photoreceptor+Death+in+a+Rodent+Model+of+Retinal+Detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Tumor Necrosis Factor-Mediates Photoreceptor Death in a Rodent Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1384-1391 (2011).</li>
<li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relocalization+of+apoptosis-inducing+factor+in+photoreceptor+apoptosis+induced+by+retinal+detachment+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Relocalization of apoptosis-inducing factor in photoreceptor apoptosis induced by retinal detachment in vivo.</a> Am. J. Pathol. 158, 1271-1278 (2001).</li>
<li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+role+of+photoreceptor+apoptosis+in+functional+damage+after+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Critical role of photoreceptor apoptosis in functional damage after retinal detachment.</a> Curr. Eye Res. 24, 161-172 (2002).</li>
<li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+chemoattractant+protein+1+mediates+retinal+detachment-induced+photoreceptor+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Monocyte chemoattractant protein 1 mediates retinal detachment-induced photoreceptor apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 104, 2425-2430 (2007).</li>
<li>Trichonas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receptor+interacting+protein+kinases+mediate+retinal+detachment-induced+photoreceptor+necrosis+and+compensate+for+inhibition+of+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Receptor interacting protein kinases mediate retinal detachment-induced photoreceptor necrosis and compensate for inhibition of apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 107, 21695-21700 (2010).</li>
<li>Roh, M. I., Murakami, Y., Thanos, A., Vavvas, D. G., Miller, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Edaravone%2C+an+ROS+Scavenger%2C+Ameliorates+Photoreceptor+Cell+Death+after+Experimental+Retinal+Detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Edaravone, an ROS Scavenger, Ameliorates Photoreceptor Cell Death after Experimental Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3825-3831 (2011).</li>
<li>Mantopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tauroursodeoxycholic+acid+%28TUDCA%29+protects+photoreceptors+from+cell+death+after+experimental+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Tauroursodeoxycholic acid (TUDCA) protects photoreceptors from cell death after experimental retinal detachment.</a> PLoS One. 6, e24245(2011).</li>
<li>Yang, L., Bula, D., Arroyo, J. G., Chen, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventing+retinal+detachment-associated+photoreceptor+cell+loss+in+Bax-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Preventing retinal detachment-associated photoreceptor cell loss in Bax-deficient mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 648-654 (2004).</li>
<li>Cebulla, C. M., Ruggeri, M., Murray, T. G., Feuer, W. J., Hernandez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+murine+retinal+detachment+model%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Spectral domain optical coherence tomography in a murine retinal detachment model.</a> Exp. Eye Res. 90, 521-527 (2010).</li>
<li>Secondi, R., Kong, J., Blonska, A. M., Staurenghi, G., Sparrow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundus+Autofluorescence+Findings+in+a+Mouse+Model+of+Retinal+Detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Fundus Autofluorescence Findings in a Mouse Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 5190-5197 (2012).</li>
<li>Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+retinal+detachment+in+the+owl+monkey.+IV.+The+reattached+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Experimental retinal detachment in the owl monkey. IV. The reattached retina.</a> Am. J. Ophthalmol. 66, 1075-1091 (1968).</li>
<li>Ross, W., Lavina, A., Russell, M., Maberley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+correlation+between+height+of+macular+detachment+and+visual+outcome+in+macula-off+retinal+detachments+of+%3C+or+%3D+7+days%27+duration%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">The correlation between height of macular detachment and visual outcome in macula-off retinal detachments of < or = 7 days' duration.</a> Ophthalmology. 112, 1213-1217 (2005).</li>
<li>Glatt, H., Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+subretinal+hemorrhage+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Experimental subretinal hemorrhage in rabbits.</a> Am. J. Ophthalmol. 94, 762-773 (1982).</li>
<li>Toth, C. A., Morse, L. S., Hjelmeland, L. M., Landers, M. B. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+directs+early+retinal+damage+after+experimental+subretinal+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Fibrin directs early retinal damage after experimental subretinal hemorrhage.</a> Arch. Ophthalmol. 109, 723-729 (1991).</li>
<li>Benner, J. D., Hay, A., Landers, M. B. 3rd, Hjelmeland, L. M., Morse, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrinolytic-assisted+removal+of+experimental+subretinal+hemorrhage+within+7+days+reduces+outer+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Fibrinolytic-assisted removal of experimental subretinal hemorrhage within 7 days reduces outer retinal degeneration.</a> Ophthalmology. , 101-672 (1994).</li>
<li>Bhisitkul, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effect+of+intravitreal+triamcinolone+acetonide+against+photoreceptor+apoptosis+in+a+rabbit+model+of+subretinal+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effect of intravitreal triamcinolone acetonide against photoreceptor apoptosis in a rabbit model of subretinal hemorrhage.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 4071-4077 (2008).</li>
<li>Zeng, R., Zhang, Y., Shi, F., Kong, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Experimental+Mouse+Model+of+Retinal+Detachment%3A+Complete+Functional+and+Histologic+Recovery+of+the+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">A Novel Experimental Mouse Model of Retinal Detachment: Complete Functional and Histologic Recovery of the Retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 1685-1695 (2012).</li>
<li>Leon, S., Yin, Y., Nguyen, J., Irwin, N., Benowitz, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lens+injury+stimulates+axon+regeneration+in+the+mature+rat+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Lens injury stimulates axon regeneration in the mature rat optic nerve.</a> J. Neurosci. 20, 4615-4626 (2000).</li>
<li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+choroidal+neovascularization+via+brief+subretinal+exposure+to+a+newly+developed+lentiviral+vector+pseudotyped+with+Sendai+viral+envelope+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Inhibition of choroidal neovascularization via brief subretinal exposure to a newly developed lentiviral vector pseudotyped with Sendai viral envelope proteins.</a> Hum. Gene Ther. 21, 199-209 (2010).</li>
<li>Kong, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-complementary+AAV5+vector+facilitates+quicker+transgene+expression+in+photoreceptor+and+retinal+pigment+epithelial+cells+of+normal+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Self-complementary AAV5 vector facilitates quicker transgene expression in photoreceptor and retinal pigment epithelial cells of normal mouse.</a> Exp. Eye Res. 90, 546-554 (2010).</li>
</ol>

Massachusetts Eye and Ear Infirmary posiada udziały w trzech amerykańskich patentach dotyczących stosowania werteporfiny. Ponadto Massachusetts Eye and Ear Infirmary ma udziały w niektórych wnioskach patentowych dotyczących selektywnego niszczenia podsiatkówkowej neowaskulatury naczyniówkowej w leczeniu zwyrodnienia plamki żółtej i innych zaburzeń. Massachusetts Eye and Ear Infirmary otrzymuje tantiemy w wyniku tych patentów i wniosków patentowych, a dr Miller otrzymuje udział w nich zgodnie z instytucjonalną polityką i procedurami patentowymi Massachusetts Eye and Ear Infirmary, która obejmuje postanowienia dotyczące podziału tantiem. Autorka, dr Joan W. Miller, jest byłym członkiem zarządu i byłym udziałowcem Alcon, Inc., a obecnie pełni funkcję konsultanta Alcon; Imagen Biotech, Inc.; Farmaceutyki ISIS; Kalvista Pharmaceuticals; Regeneron Pharmaceuticals, Inc i ONL Therapeutics, LLC. Dr Demetrios G. Vavvas pełni funkcję konsultanta w firmach Roche, Genentech, Kala Pharmaceuticals.

Opisano kilka metod ustalania modelu RD w oczach gryzoni3-15, 22. Większość z nich wykorzystuje podsiatkówkowe wstrzyknięcie hialuronianu sodu, ponieważ jest to lepki materiał powszechnie stosowany podczas operacji wewnątrzgałkowej u ludzi i nie wiąże się z żadną znaną toksycznością oczną1-15. Hialuronian sodu, w przeciwieństwie do zwykłej soli fizjologicznej lub soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS), wydłuża czas trwania RD.
Metody wstrzykiwania hialuronianu sodu do siatkówki wykorzystują jedno z dwóch podejść: dostęp przezszklistkowy3-6 lub dostęp przeztwardówkowy7-15. Obie metody wykonywane są z obserwacją dna oka. W podejściu transszklistkowym do jamy ciała szklistego wprowadza się wstrzykiwacz podsiatkówkowy, w siatkówce obwodowej tworzy się retinotomię, a hialuronian sodu jest wstrzykiwany do przestrzeni podsiatkówkowej. W tej metodzie wykonuje się dwa rozdarcia siatkówki, co zwiększa ryzyko krwotoku siatkówkowego, który może dostać się do przestrzeni podsiatkówkowej. Ponadto istnieje ryzyko uszkodzenia soczewki podczas tworzenia retinotomii. Istnieje kilka zmodyfikowanych metod podejścia przeztwardówkowego. W większości tych metod7-12, po obniżeniu ciśnienia wewnątrzgałkowego za pomocą nakłucia przedniej komory, igła 30 G połączona ze strzykawką wypełnioną hialuronianem sodu jest bezpośrednio wprowadzana do przestrzeni podsiatkówkowej przez spojówkę, twardówkę, naczyniówkę i RPE. Hialuronian sodu jest następnie wstrzykiwany do przestrzeni podsiatkówkowej. Ryzyko rozdarcia siatkówki i uszkodzenia soczewki przy użyciu tej metody przeztwardówkowej jest mniejsze niż w przypadku dostępu przezszklistego. Jednak otwór wykonany w twardówce za pomocą igły 30 G jest duży, szczególnie w przypadku oczu myszy, a hialuronian sodu wstrzyknięty do przestrzeni podsiatkówkowej łatwo wycieka z oka przez ranę twardówki. Prowadzi to do niższej, mniej trwałej RD i bardziej zmiennej śmierci komórek fotoreceptorów. Ponadto, jeśli krwawienie naczyniówkowe wystąpi na etapie perforacji twardówki, krwotok rozprzestrzeni się do przestrzeni podsiatkówkowej, ponieważ ciśnienie wewnątrzgałkowe zostało zmniejszone przed wstrzyknięciem hialuronianu podsiatkówkowego.
Kilka czynników może wpływać na wpływ RD na odwarstwioną siatkówkę, w tym zarówno krwotok podsiatkówkowy, jak i wysokość i trwałość RD16-21. Śmierć komórki fotoreceptora wzrasta wraz ze wzrostem wysokości RD16, 17, a uszkodzenie komórek fotoreceptorów może być bardziej rozległe z powodu zmniejszonej dyfuzji tlenu i niezbędnych składników odżywczych z naczynia włosowatego przy wyższym RD w porównaniu z płytkim RD. Krwotok podsiatkówkowy jest również toksyczny dla komórek fotoreceptorów18-21; Możliwe mechanizmy tej toksyczności w odwarstwionej siatkówce obejmują niedotlenienie i zakłócenie metabolizmu przez krwotok podsiatkówkowy jako barierę dyfuzyjną oraz bezpośrednią neurotoksyczność indukowaną przez składniki krwi (takie jak żelazo). Uszkodzenie soczewki, o którym doniesiono, że działa ochronnie na komórki zwojowe siatkówki23, może również wpływać na śmierć komórki fotoreceptora po indukcji RD. Ponadto, jeśli miejsce rany wlotowej nie zostanie uszczelnione, hialuronian sodu może wyciekać w wyniku manipulacji oka podczas enukleacji. Może to prowadzić do błędnej klasyfikacji RD jako płytkiej, co z kolei może wpłynąć na interpretację wyników.
Zmodyfikowaliśmy metodę przeztwardówkową do wstrzykiwania podsiatkówkowego hialuronianu sodu, aby zwiększyć odtwarzalność RD i zmniejszyć częstość krwotoku podsiatkówkowego. Krytycznym etapem tego protokołu jest wykonanie samouszczelniającego się nacięcia twardówki za pomocą igły 30 G, co zapobiega wyciekowi hialuronianu sodu po wstrzyknięciu. W przeciwieństwie do poprzednich metod, ten protokół jest wykonywany bez obserwacji dna oka, dlatego większą uwagę zwraca się na ranę twardówki. Zastosowanie kleju zapobiega również wyciekaniu hialuronianu sodu z oka. Z naszego doświadczenia wynika, że częstość krwotoku podsiatkówkowego przy tym protokole była znacznie mniejsza niż w przypadku innych protokołów. Jeśli krwawienie naczyniówkowe wystąpi podczas etapu nacięcia twardówki, wyjdzie ono z oka przez ranę twardówkową, ponieważ ten etap jest wykonywany przed obniżeniem ciśnienia wewnątrzgałkowego. Jeśli krwawienie naczyniówkowe wystąpi po obniżeniu ciśnienia wewnątrzgałkowego i odwarstwieniu siatkówki neurosensorycznej, krew zostanie rozprowadzona do przestrzeni podsiatkówkowej. Odkryliśmy, że dzieje się tak w około 5% przypadków, w przeciwieństwie do około 10-20% w przypadku innych technik. Zwierzęta te powinny być wyłączone z analizy.
Technika ta może być również stosowana do wstrzykiwania podsiatkówkowego transferu genów za pośrednictwem wektora do docelowych komórek fotoreceptora lub RPE24, 25. Ponieważ typowy nośnik (PBS, sól fizjologiczna) do tych zastrzyków jest znacznie mniej lepki niż hialuronian sodu, standardowe techniki są nękane większą liczbą wycieków. Opisana w niniejszym dokumencie technika, zmniejszając to ryzyko, sprawia, że eksperymenty z transferem wektorów są bardziej powtarzalne i wiarygodne.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50660/">Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate</a>. The footnotes were removed from the abstract due to redundancy in the introduction.

Erratum: Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Śmierć komórki fotoreceptora i późniejsze pogorszenie wzroku następuje, gdy fotoreceptory są oddzielone od leżącego pod spodem nabłonka barwnikowego siatkówki. Fizyczne rozdzielenie fotoreceptorów obserwuje się w różnych zaburzeniach siatkówki, w tym w zwyrodnieniu plamki żółtej związanym z wiekiem (AMD), centralnej surowiczej chorioretinopatii, retinopatii cukrzycowej i retinopatii wcześniaków, a także regmatogennym (tj. spowodowanym pęknięciem siatkówki) odwarstwieniu siatkówki (RD). Podsiatkówkowe wstrzyknięcie hialuronianu sodu jest powszechnie akceptowanym modelem tworzenia RD, który prowadzi do śmierci komórki fotoreceptora, zapewniając wgląd w patofizjologię zwyrodnienia fotoreceptorów1-15.
Zwyrodnienie fotoreceptorów wywołane wstrzyknięciem hialuronianu sodu do siatkówki, wprowadzone po raz pierwszy w 2001roku 7, ma tę zaletę, że ma rozsądny przebieg czasowy (dni do tygodni). Jednak może mieć znaczną zmienność utraty komórek fotoreceptorowych ze zwierzęcia na zwierzę ze względu na dwa główne czynniki, które wpływają na śmierć komórki fotoreceptora po RD: 1) wysokość i czas trwania RD oraz 2) wystąpienie krwotoku podsiatkówkowego. Metoda ta wiąże się ze stromą krzywą uczenia się techniki, która przyczynia się do obu czynników. Zwyrodnienie komórek fotoreceptorowych zwiększa się wraz ze wzrostem RD, ponieważ odległość między warstwą nabłonka barwnikowego siatkówki (RPE) a fotoreceptorami zwiększa się16-17. Zgodnie z tymi doniesieniami, nasze poprzednie eksperymenty wykazały większą śmierć fotoreceptorów w pęcherzowych RD niż płytkich RD. Doniesiono również, że krwotok podsiatkówkowy jest toksyczny dla komórek fotoreceptorowych i wpływa na śmierć komórek fotoreceptorów18-21. Podobnie, zaobserwowaliśmy więcej zgonów fotoreceptorów w RD z krwotokiem podsiatkówkowym niż w RD bez krwotoku podsiatkówkowego. W związku z tym techniki minimalizujące zmienność muszą koncentrować się na osiąganiu stałych wysokości RD przy jednoczesnym unikaniu krwotoku podsiatkówkowego.
Nasza zmodyfikowana metoda wywoływania RD może sprawić, że w tym samym miejscu oka pojawi się powtarzalne pęcherzowe i uporczywe RD z rzadkim występowaniem krwotoku podsiatkówkowego. Przeprowadziliśmy operację z zastosowaniem podejścia czasowego, ponieważ łatwiej jest uzyskać szersze pole operacyjne w porównaniu z innymi miejscami. Po nacięciu spojówki wykonuje się samouszczelniające się nacięcie twardówki za pomocą igły 30 G. Powstaje tunel twardówkowy, po którym następuje penetracja twardówki do naczyniówki. Jeśli na tym etapie wystąpi krwawienie naczyniówkowe, krwotok wyjdzie z oka przez ranę twardówki, a krwawienie można zatrzymać przez zwężenie włócznią chirurgiczną. Następnie wykonuje się nakłucie przedniej komory z rogówki w celu obniżenia ciśnienia wewnątrzgałkowego. Jest to ważny krok, ponieważ samo wstrzyknięcie podsiatkówkowe doprowadzi do wzrostu ciśnienia wewnątrzgałkowego, a w rezultacie do niedrożności tętnicy siatkówki i niedokrwienia wewnętrznej siatkówki. Igła o wadze 33 G połączona ze strzykawką Hamiltona o pojemności 10 μl jest następnie wprowadzana do przestrzeni podsiatkówkowej, a 3,5 μl hialuronianu sodu jest delikatnie wstrzykiwana w celu odłączenia siatkówki neurosensorycznej od leżącego pod nią RPE. W przeciwieństwie do innych metod indukowania RD, które są wykonywane w ramach obserwacji dna oka, ta technika jest wykonywana pod bezpośrednią obserwacją. Ponieważ rana twardówki jest samouszczelniająca, hialuronian sodu nie wycieknie po wstrzyknięciu. Na koniec klej nakłada się na ranę twardówki, a spojówkę ponownie przymocowuje się do swojej pierwotnej pozycji. Te ostatnie kroki zmniejszają również ryzyko wycieku hialuronianu sodu. Wstrzyknięcie 3,5 μl hialuronianu sodu tworzy powtarzalne RD (50% siatkówki) w oczach 8-tygodniowych myszy. Stworzenie samouszczelniającej się rany jest najważniejszym krokiem w naszej zmodyfikowanej procedurze, ponieważ zapobiega wyciekaniu wstrzykniętego hialuronianu sodu z oka, umożliwiając w ten sposób powtarzalne pęcherzowe i trwałe RD.

<table><tbody><tr><td>Ketaject</td><td>Phoenix</td><td>2010025</td><td></td></tr><tr><td>AnaSed</td><td>LLOYD</td><td>4004821</td><td></td></tr><tr><td>5% Fenylefryna / 0,5% Tropicamid</td><td>Massachusetts Eye and Ear Pharmacy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0,5% Chlorowodorek proparakainy Roztwór okulistyczny</td><td>AKORN</td><td>17478-263-12</td><td></td></tr><tr><td>Provics</td><td>Alcon</td><td>8065183085</td><td></td></tr><tr><td>Webglue</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-8566128</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Leica</td><td>MG90</td><td></td></tr><tr><td>30G1/2 Igła PrecisionGlide</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Weck-Cel Eye Spears</td><td>Beaver-Visitec</td><td>0008685</td><td></td></tr><tr><td>10 mikrolitrów Strzykawka</td><td>Hamilton</td><td>7635-01</td><td></td></tr><tr><td>33, igła 0,5 cala</td><td>Hamilton</td><td>7803-05</td><td></td></tr><tr><td>Szkło osłonowe 18x18mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>18-548A</td><td></td></tr></tbody></table>

model odwarstwienia siatkówki u gryzoni przez podsiatkówkowe wstrzyknięcie hialuronianu sodu

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Podsiatkówkowe wstrzykiwanie hialuronianu sodu jest powszechnie akceptowaną metodą wywoływania odwarstwienia siatkówki (RD). Jednak wysokość i czas trwania RD lub wystąpienie krwotoku podsiatkówkowego może wpływać na śmierć komórki fotoreceptora w odwarstwionej siatkówce. W związku z tym korzystne jest tworzenie powtarzalnych RD bez krwotoku podsiatkówkowego w celu oceny śmierci komórki fotoreceptorowej. Zmodyfikowaliśmy wcześniej opisaną metodę tworzenia pęcherzowych i uporczywych RD w odtwarzalnej lokalizacji z rzadkim występowaniem krwotoku podsiatkówkowego. Krytycznym etapem tej zmodyfikowanej metody jest utworzenie samouszczelniającego się nacięcia twardówki, które może zapobiec wyciekowi hialuronianu sodu po wstrzyknięciu do przestrzeni podsiatkówkowej. Aby wykonać samouszczelniające się nacięcie twardówki, tworzy się tunel twardówkowy, a następnie penetrację twardówki do naczyniówki za pomocą igły 30 G. Chociaż na tym etapie może wystąpić krwotok naczyniówkowy, zwężenie włócznią chirurgiczną zmniejsza częstość krwotoku naczyniówkowego. Metoda ta pozwala na bardziej powtarzalny i wiarygodny model śmierci fotoreceptorów w chorobach związanych z RD, takich jak regmatogenne RD, retinopatia wcześniaków, retinopatia cukrzycowa, centralna surowicza chorioretinopatia i zwyrodnienie plamki żółtej związane z wiekiem (AMD).

Aby ocenić trwałość odwarstwienia siatkówki (RD) wywołanego zgodnie z tym protokołem, w 3., 7. i 14. dniu po indukcji RD wykonano krioprzecięcia. Dla każdego punktu czasowego wykorzystano sześć oczu. Do wizualizacji przekrojów zastosowano barwienie hematoksyliną i eozyną (HE). Wszystkie przekroje wykazały pęcherzowe RD sięgające soczewki (Rysunek 2). W jednym oku w 7. dniu zaobserwowano krwotok podsiatkówkowy. W żadnym z oczu nie wystąpiły oznaki infekcji ani uszkodzenia soczewki.
<img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1.jpg" alt="Schemat anatomiczny oka, nacięcie w twardówce ukazujące spojówkę, naczyniówkę i nabłonek pigmentowy siatkówki." fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1highres.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 1"> 
Rysunek 1. Wykonanie samouszczelniającego nacięcia twardówki. Ten schemat przedstawia obraz przekroju poprzecznego prawidłowego oka myszy. Czerwona linia wskazuje samouszczelniające nacięcie twardówki. Wykonanie tunelu w twardówce, a następnie penetracja twardówki do naczyniówki igłą 30 G tworzy samouszczelniające nacięcie twardówki. Rana ta zostanie samoczynnie uszczelniona pod wpływem ciśnienia wewnątrzgałkowego, co może zapobiec wyciekowi hialuronianu sodu po wstrzyknięciu do przestrzeni podsiatkówkowej i pozwolić na uzyskanie trwałych odwarstwień bąblowych siatkówki.
<img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2.jpg" alt="Rozwój tkanki serca, schemat histologiczny, dni 0, 3, 7, 14. Badanie regeneracji serca." fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2highres.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2. Przebieg czasowy odwarstwienia siatkówki. To zdjęcie dna oka przedstawia pęcherzykowate odwarstwienie siatkówki bez krwotoku podsiatkówkowego bezpośrednio po zabiegu. Przekroje mrożone z barwieniem hematoksyliną i eozyną (HE) wykazują trwałe pęcherzykowate odwarstwienie siatkówki bez krwotoku podsiatkówkowego co najmniej do 14. dnia.

Tworzenie eksperymentalnych odwarstwień siatkówki o powtarzalnej i trwałej wysokości odwarstwienia, bez krwotoku podsiatkówkowego, jest ważne dla badania patofizjologii utraty komórek fotoreceptorowych w chorobie siatkówki i oceny potencjalnych interwencji terapeutycznych. Tutaj szczegółowo opisujemy taką metodę.

Model odwarstwienia siatkówki u gryzoni przez podsiatkówkowe wstrzyknięcie hialuronianu sodu

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Ogólnym celem tej procedury jest wywołanie eksperymentalnego odwarstwienia siatkówki o powtarzalnej i stabilnej wysokości odwarstwienia, bez występowania krwotoku podsiatkówkowego. Osiąga się to poprzez wstępne nacięcie spojówki skroniowej w okolicy tylnego krawędzi przejścia rogówkowo-twardówkowego w celu oddzielenia spojówki od twardówki. W drugim kroku używa się czubka igły 30 G do wykonania samouszczelniającego nacięcia twardówki oraz punkcji rogówki.Następnie do przestrzeni podsiatkówkowej wstrzykuje się uronian sodu, aby oddzielić siatkówkę neurosensoryczną od znajdującego się pod nią nabłonka pigmentowego siatkówki. W ostatnim kroku na ranę twardówki nakłada się klej cyjanoakrylowy, a spojówkę przytwierdza do jej pierwotnej pozycji, co zmniejsza ryzyko wycieku uronianu sodu. Na koniec dno oka bada się za pomocą szkiełka nakrywkowe, aby potwierdzić powstanie bolusa odwarstwienia siatkówki bez krwawienia podsiatkówkowego.Istniejące metody redukcji odklejenia siatkówki u gryzoni mogą powodować zmienność w wysokości i trwałości odklejenia, co prowadzi do pomiaru niespójnych wskaźników obumierania komórek. Dzięki zastosowaniu tej techniki możliwe jest stworzenie powtarzalnego, pęcherzykowatego i trwałego odklejenia siatkówki przy zmniejszonym ryzyku krwawień podsiatkówkowych, co pozwala na uzyskanie wiarygodnego modelu odklejenia siatkówki u gryzoni. Eksperymentalne odklejenie siatkówki u gryzoni jest stosunkowo proste do wykonania, charakteryzuje się odpowiednim przebiegiem czasowym i jest bardzo podobne do przebiegu tej choroby u ludzi.Jest to zatem doskonały model do badania mechanizmów śmierci komórek fotoreceptorów oraz terapii zapobiegających utracie wzroku. W przypadku degeneracyjnych schorzeń siatkówki, w których dochodzi do zróżnicowanej śmierci komórek fotoreceptorów w odwarstwionej siatkówce, korzystne jest wywołanie powtarzalnego odwarstwienia bez krwawienia podsiatkówkowego. Wynika to z faktu, że wydłużony czas odwarstwienia siatkówki lub wystąpienie krwawienia podsiatkówkowego mogą wpływać na proces śmierci komórek fotoreceptorów.Po znieczuleniu ośmiotygodniowej myszy przyciąć wibrysy zwierzęcia, a następnie pod mikroskopem chirurgicznym rozszerzyć źrenicę roztworem zawierającym 5% fenylefryny i 0,5% tropikaminy. Odciąć rzęsy zwierzęcia i zastosować miejscowe znieczulenie w postaci 0,5% roztworu okulistycznego chlorowodorku prokainy. Umieścić mysz w pozycji bocznej nosem skierowanym w stronę chirurga, a następnie naciąć spojówkę skroniową na wysokości tylnego limbusa, oddzielając spojówkę od twardówki za pomocą pęsety.Chwyć spojówkę w okolicy limbusa, aby ustabilizować oko. Następnie, trzymając igłę o rozmiarze 30 G ściętym otworem skierowanym do góry, użyj jej czubka do wykonania tunelu przez twardówkę, penetrując ją aż do naczyniówki, tak aby nie przebić siatkówki.Następnie, trzymając igłę 30 G równolegle do tęczówki, nakłuj rogówkę, aby obniżyć ciśnienie wewnątrzgałkowe. Teraz, kierując ściętą końcówką igły w dół, wprowadź igłę 33 G połączoną ze strzykawką Hamiltona o pojemności 10 µL do przestrzeni podsiatkówkowej i wstrzyknij 3,5 µL uronianu sodu.Spowoduje to odwarstwienie około 50% siatkówki neurosensorycznej od leżącego pod nią nabłonka pigmentowego siatkówki. Za pomocą pęsety uciśnij rogówkę wokół miejsca nakłucia, aby umożliwić wypłynięcie cieczy wodnistej, a następnie użyj chirurgicznego aplikatora celulozowego, aby potwierdzić brak przecieku z rany twardówki, co zredukuje ryzyko wycieku urynianu sodu. Nałóż klej cyjanoakrylanowy na ranę twardówki, a następnie przytwierdź spojówkę z powrotem do jej pierwotnego położenia.Użyj szkiełka nakrywkowego, aby sprawdzić dno oka i potwierdzić powstanie bolusa odwarstwienia siatkówki bez krwawienia podsiatkówkowego. Na koniec nałóż na oko maść z antybiotykiem, aby zmniejszyć ryzyko infekcji. Utrzymuj mysz na podkładce grzewczej, aby zapobiec hipotermii.Następnie obserwowano wystąpienie niskiego ciśnienia krwi. Po wybudzeniu z narkozy zwierzę zwrócono do klatki. Aby ocenić trwałość odwarstwienia siatkówki wywołanego zgodnie z tym protokołem, w trzeciej, siódmej i czternastej dobie po indukcji odwarstwienia wykonano skrawki mrożone.Dla każdego punktu czasowego wykorzystano sześć oczu. Do wizualizacji przekrojów zastosowano barwienie hematoksyliną i eozyną, a każdy z nich wykazał odwarstwienie siatkówki w postaci bolusa zbliżającego się do soczewki.W żadnym z oczu nie stwierdzono oznak infekcji ani uszkodzenia soczewki. Po opanowaniu techniki zabieg ten można przeprowadzić w około pięć minut. Podczas wykonywania tej procedury ważne jest, aby każdy krok realizować delikatnie, aby uniknąć wycieku sodu, znacznego krwotoku podsiatkówkowego lub uszkodzenia soczewki, gdyż czynniki te mogą wpływać na śmierć komórek receptorowych w odwarstwionej siatkówce. Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać dobrą wiedzę na temat tego, jak wywołać eksperymentalne odwarstwienie siatkówki u gryzoni, zapewniając powtarzalną i stałą wysokość odwarstwienia bez wystąpienia krwotoku podsiatkówkowego.

retinal-detachment-model-rodents-subretinal-injection-sodium

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Model odczepienia siatkówki u gryzoni poprzez podsiatkówkowe wstrzyknięcie hialuronianu sodu

Źródło: Park, S. W., et al. Podejście rąbkowe - podsiatkówkowe wstrzyknięcie wektorów wirusowych do terapii genowej u myszy nabłonek barwnikowy siatkówki. J. Vis. Exp. (2015)Film opisuje metodę podsiatkówkowego wstrzykiwania wektorów wirusowych do nabłonka barwnikowego siatkówki (RPE) w modelu mysim. Szczegółowo opisano w nim procedurę, od znieczulenia i przygotowania oka po precyzyjne dostarczenie wektora lentiwirusowego, zapewniając integrację i ekspresję genów w RPE.

Podsiatkówkowe wstrzyknięcie wektorów wirusowych do nabłonka barwnikowego siatkówki w modelu mysim

Tutaj prezentujemy akceptowany przez społeczność protokół w formacie multimedialnym do podsiatkówkowego wstrzykiwania bolusa komórek RPE szczurom i myszom. Podejście to można wykorzystać do określenia potencjałów ratunkowych, profili bezpieczeństwa i zdolności przeżycia przeszczepionych komórek RPE po implantacji w zwierzęcych modelach zwyrodnienia siatkówki.

Wykonywanie iniekcji podsiatkówkowych u gryzoni w celu dostarczenia komórek nabłonka barwnikowego siatkówki w zawiesinie

Strategie wymiany nabłonka barwnikowego siatkówki (RPE) i terapia oparta na genach są brane pod uwagę w przypadku kilku stanów zwyrodnieniowych siatkówki. Do translacji klinicznej wymagane są modele zwierzęce z dużymi oczami do badania technik chirurgicznych stosowanych u pacjentów. W tym miejscu przedstawiamy model królika do chirurgii podsiatkówkowej ukierunkowany na przeszczep RPE, który jest wszechstronny i opłacalny.

Protokół krok po kroku dla chirurgii podsiatkówkowej u królików

Zastrzyki podsiatkówkowe są najczęstszą techniką dostarczania dużych środków terapeutycznych, takich jak białka i wektory wirusowe, do fotoreceptorów i nabłonka barwnikowego siatkówki. Alternatywna metoda u myszy, która z powodzeniem celuje w przestrzeń podsiatkówkową z minimalnymi uszkodzeniami ubocznymi i krótkim czasem rekonwalescencji, jest opisana tutaj.

Alternatywna i zwalidowana metoda iniekcji umożliwiająca dostęp do przestrzeni podsiatkówkowej przez przeztwardówkowy dostęp tylny

Wstrzyknięcie podsiatkówkowe jest szeroko stosowane w badaniach przedklinicznych terapii zastępczej komórkami macierzystymi w przypadku zwyrodnienia plamki żółtej związanego z wiekiem. W tym zwizualizowanym artykule opisujemy mniej ryzykowną, powtarzalną i precyzyjnie zmodyfikowaną technikę wstrzykiwania podsiatkówkowego za pomocą podejścia przeztwardówkowego w celu dostarczenia komórek do oczu szczura.

Opracowanie udoskonalonego protokołu przeztwardówkowego przeszczepu podsiatkówkowego ludzkich komórek nabłonka barwnikowego siatkówki do oczu szczurów

Tutaj demonstrujemy nowatorskie podejście do wykorzystania wysokiej rozdzielczości optycznej koherentnej tomografii spektralnej (HR-SD-OCT) do wspomagania dostarczania środków terapii genowej do przestrzeni podsiatkówkowej, oceny jej zasięgu powierzchniowego i charakteryzowania żywotności fotoreceptorów.

Optyczna koherentna tomografia myszy o ultrawysokiej rozdzielczości wspomagająca wstrzyknięcie do gałki ocznej w badaniach nad terapią genową siatkówki

Komórki nabłonka barwnikowego siatkówki mogłyby służyć jako terapia zastępcza dla zaawansowanej formy suchego, związanego z wiekiem zwyrodnienia plamki żółtej. Protokół ten opisuje generowanie wielkookiego modelu atrofii geograficznej i podsiatkówkowy przeszczep ludzkich embrionalnych komórek nabłonka barwnikowego siatkówki pochodzących z embrionalnych komórek macierzystych do tego modelu choroby.

Przeszczep podsiatkówkowy ludzkich embrionalnych komórek nabłonka barwnikowego pochodzących z komórek macierzystych siatkówki do wielkookiego modelu atrofii geograficznej

Naczelny (NHP) jest idealnym modelem do badania terapii komórkowej ludzkiej siatkówki ze względu na podobieństwa anatomiczne i genetyczne. W artykule opisano metodę podplamkowego przeszczepu komórek nabłonka barwnikowego siatkówki w oku NHP oraz strategie zapobiegania powikłaniom śródoperacyjnym związanym z manipulacją plamki żółtej.

Przeszczep nabłonka barwnikowego siatkówki w modelu naczelnych innych niż człowiek w chorobach zwyrodnieniowych siatkówki

Ten protokół przedstawia przezźrenicowe, sterowane widzeniem podejście przeztwardówkowe do bezpiecznego i precyzyjnego dostarczania przeszczepów komórkowych podsiatkówkowych, z niskim wskaźnikiem powikłań chirurgicznych, u myszy, biorców ze zwyrodnieniem siatkówki lub bez.

Przezźrenicowe przeszczepienie przeztwardówkowe przeszczepów podsiatkówkowych w mysim modelu zwyrodnienia siatkówki

Ten artykuł opisuje metody iniekcji podsiatkówkowej u szczurów, wykorzystując śródoperacyjną wizualizację do kontrolowania zarówno miejsca wstrzyknięcia, jak i obszaru odwarstwienia siatkówki.

Śródoperacyjna wizualizacja wstrzyknięcia podsiatkówkowego i odwarstwienia siatkówki u szczurów

Poznaj metodę podsiatkówkowego wstrzyknięcia hialuronianu sodu u gryzoni, tworzącą powtarzalne odwarstwienie siatkówki bez krwawienia. Technika umożliwia badanie mechanizmów obumierania fotoreceptorów i testowanie terapii.

Model odwarstwienia siatkówki u gryzoni przez podsiatkówkowe wstrzyknięcie hialuronianu sodu

Przeglądaj więcej filmów