Metoda badania wpływu chemicznie indukowanej niewydolności jajników na zdolność do wykonywania ćwiczeń i adaptacji serca u myszy
7 kwietnia 2014
Dwa paradygmaty ćwiczeń zostały przetestowane na nowo opracowanej chemicznie indukowanej menopausalnej mysiej modelu, aby zbadać wpływ menopauzy na zdolność do wykonywania ćwiczeń i adaptację serca do wysiłku.
Ogólnym celem tej procedury jest przyspieszenie naturalnego procesu atrezji pęcherzyków w jajnikach, co prowadzi do niewydolności jajników, wyczerpania estrogenu i stanu bezcyklicznego u samic, która jest bardzo podobna do menopauzy. Osiąga się to poprzez podawanie przez 15 do 20 kolejnych dni chemikaliów zawodowych, takich jak winylowa cyklina dwutlenek lub VCD, które zostały wykazane jako specyficznie ukierunkowane na zniszczenie małych pierwotnych i pierwotnych pęcherzyków jajników poprzez przyspieszenie ich naturalnego procesu atrezji. Drugim krokiem jest określenie cyklu estrowego i cykliczności jajników przez cytologię pochwową począwszy od około sześciu tygodni po rozpoczęciu iniekcji VCD.
15 do 20 dni uporczywego dste lub bezcykliczności musi być obserwowane przez cytologię pochwową, aby potwierdzić utratę cyklu i niewydolność jajników. Ostatnim krokiem jest wdrożenie interwencji, która może być wpłynięta przez menopauzę lub przejście do menopauzy, takie jak dobrowolne ćwiczenia na kołach klatki lub adaptacja serca. Ostatecznie, dobrowolne aktywności na kołach klatki i adaptacja serca są używane, aby pokazać, czy menopauza zmniejsza aktywność na kołach klatki.
Główną zaletą tej techniki nad istniejącymi metodami, takimi jak ektomia, jest to, że ektomia jest zabiegiem chirurgicznym, który prowadzi do nagłego wyczerpania estrogenu, co jest w przeciwieństwie do naturalnego progresywnego ubytku estrogenu, jak się to dzieje podczas przejścia przedmenopauzalnego. Implikacje tej techniki rozciągają się na terapię chorób metabolicznych i układu krążenia u kobiet w okresie pomenopauzalnym, ponieważ kobiety w okresie pomenopauzalnym są szczególnie bardziej podatne na zespół metaboliczny i powiązane z nim choroby współistniejące, w tym choroby układu krążenia, w porównaniu do kobiet przedmiesięczniczych. Wizualna demonstracja tej metody jest krytyczna, ponieważ kroki cytologii pochwy są trudne do nauczenia, ponieważ należy zachować ostrożność, aby wykonać odpowiednią technikę wymazu i zidentyfikować cykl EST.
Cztery, winylowa cyklina dwutlenek lub VCD jest przechowywana w temperaturze minus 20 stopni Celsjusza. Aby przygotować VCD do protokołu iniekcji, dodaj punkt 587 mililitrów VCD do czystej fiolki dokującej i doprowadź końcową objętość do 10 mililitrów olejem sezamowym, przykryj i uszczelnij za pomocą param i wymieszaj, lekko odwracając. Przechowuj w temperaturze czterech stopni Celsjusza przez maksymalnie siedem dni.
Aby rozpocząć protokół iniekcji VCD, ważyć dwa myszy w wieku dwóch miesięcy przez 20 kolejnych dni, podawać codzienne iniekcje dootrzewnowe pokojowej temperatury VCD w dawce 160 miligramów na kilogram, używając igły 27-kaliberowej podczas okresu iniekcji. Staraj się naprzemiennie zmieniać miejsca iniekcji, aby zmniejszyć szanse na infekcję miejscową w podobny sposób. Wstrzykiwać myszy kontrolne roztworem pojazdu, olejem sezamowym w objętości 2,5 mililitrów na kilogram po zakończeniu okresu iniekcji.
Monitoruj codziennie cykl estrów poprzez pobieranie wymazu pochwy. Jednym z czynników kluczowych dla sukcesu tego badania jest uzyskanie wysokiej jakości wymazu pochwy do oznaczenia cytologicznego. Utrzymuj myszy za pomocą metody grzbietowej.
Włóż kroplomierz z 0,2 mililitrów sterylnego soli fizjologicznej do ujścia pochwy na głębokość 0,5 centymetra. Wymieszaj wstrzykniętą sol fizjologiczną trzy razy za pomocą kroplomierza, a następnie umieść jedną kroplę na pustym szlajfie. Natychmiast oceń każdą próbkę mikroskopicznie za pomocą standardowego mikroskopu świetlnego o powiększeniu 100 x, aby zweryfikować niewydolność jajników.
Następnie, myszy wywołane menopauzą za pomocą VCD są używane do eksperymentów ćwiczeniowych. Urządzenie z kołem klatki składa się z koła o średnicy 11,5 centymetra z pięciocentymetrową powierzchnią biegową wyposażoną w cyfrowy licznik magnetyczny, który jest aktywowany przez obrót koła. Przed każdym biegim na kole, wykonaj kalibrację klatki zgodnie z wytycznymi producenta.
Zmierzyć wewnętrzny średnicę koła biegowego. Oblicz obwód i wprowadź tę wartość do cyfrowego licznika jako rozmiar koła, aby zamontować koło do klatki, przesuń koło. Stań przez górny przewód klatki.
Zamocuj podstawkę koła do przewodu klatki za pomocą klipsów szybkich. Klipsy powinny być na szczycie przewodu z dala od zwierzęcia. Przełóż część komputerową i dodatkowy przewód przez przewody klatki.
Umieść komputer i dodatkowy przewód poza zasięgiem zwierzęcia. Można to osiągnąć, umieszczając średniej wielkości plastikowy pojemnik na wadze na szczycie przewodu klatki, aby trzymać komputer i dodatkowy przewód. Następnie podłącz część komputerową cyfrowego licznika magnetycznego do podstawki koła.
Za pomocą taśmy klejącej przymocuj wolny magnes cyfrowego licznika magnetycznego do centralnego pręta po tej samej stronie, co przewód magnetyczny do komputera. Ponownie należy użyć taśmy klejącej wystarczająco, aby chronić magnes przed uszkodzeniem przez gryzienie. Magnes powinien być ustawiony tak, aby każdy obrót koła był rejestrowany przez komputer bez żadnego
Overview
This study investigates the effects of menopause on exercise capacity and cardiac adaptation using a chemically induced menopausal mouse model. Two exercise paradigms were tested to assess these impacts.
Key Study Components
Area of Science
- Neuroscience
- Cardiovascular Health
- Exercise Physiology
Background
- The study utilizes vinyl cycline dioxide (VCD) to induce menopause in mice.
- This method mimics the natural progression of menopause, unlike surgical options.
- Postmenopausal women are at higher risk for metabolic and cardiovascular diseases.
- Understanding exercise capacity in this context is crucial for developing therapies.
Purpose of Study
- To evaluate how menopause affects exercise capacity in a mouse model.
- To assess cardiac adaptations resulting from exercise in menopausal mice.
- To provide insights into potential interventions for postmenopausal women.
Methods Used
- Administration of VCD to induce menopause over 15 to 20 days.
- Monitoring ovarian cyclicity through vaginal cytology.
- Implementing voluntary cage wheel exercise for experimental groups.
- Recording distance and time spent running using a digital magnetic counter.
Main Results
- Menopausal mice exhibited decreased exercise capacity compared to controls.
- Cardiac adaptations were measured in response to exercise interventions.
- The study highlights the impact of menopause on physical activity levels.
- Results suggest potential therapeutic avenues for postmenopausal women.
Conclusions
- Menopause significantly affects exercise capacity in mice.
- Cardiac adaptations to exercise differ in menopausal versus non-menopausal mice.
- Further research is needed to explore interventions for improving health in postmenopausal women.
Frequently Asked Questions
Chapters in this video
0:05
Title
2:24
Treatment with 4-Vinylcyclohexene Diepoxide (VCD)
4:37
Voluntary Cage-wheel Exercise
8:36
Results: VCD-induced Menopause Treatment Does Not Affect Voluntary or Forced Running Capacity or the Cardiac Adaptive Response to Exercise
13:51
Conclusion
