Name: Protokół badania klinicznego w celu wykrycia trzęsawki atypowej i klasycznej u owiec (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 42 s
Description: Poznaj protokół badania klinicznego owiec w celu wykrywania klasycznej i atypowej postaci scrapie. Ta metoda obejmuje ocenę zachowania, postawy, odruchów oraz kondycji ciała.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Badania nad zwierzętami zostały sfinansowane przez brytyjski Departament ds. Żywności, Środowiska i Spraw Wiejskich oraz Unię Europejską (poprzez finansowanie Laboratorium Referencyjnego UE ds. TSE). Dziękujemy za wsparcie kierowników projektu, dr M. Simmonsa i dr M. Jeffreya.

1. Ocena postawy
<ol>
	<li>Oceń postawę zwierzęcia, gdy nie jest zakłócone.</li>
	<li>Zwierzęta dotknięte TSE mogą stać z szeroko rozstawionymi kończynami, mogą sprawiać wrażenie zgarbionych lub mogą stać z niskim wózkiem głowy.</li>
</ol>
2. Ocena zachowania
<ol>
	<li>Zbadaj zachowanie zwierzęcia, gdy jest pozostawione samo, gdy się do niego zbliża i gdy się z nim obchodzi.</li>
	<li>Zwierzęta zakażone TSE mogą wykazywać zmienione cechy mentalne, ponieważ stoją oddzielnie od innych owiec lub nie podążają bezpośrednio za innymi owcami.</li>
	<li>Kiedy zwierzę się zbliży, może uciec i upaść lub upadnie na podłogę podczas dotykania. Kompulsywne krążenie zgodnie z ruchem wskazówek zegara lub przeciwnie do ruchu wskazówek zegara można zaobserwować u owiec z nietypową trzęsawką.</li>
</ol>
3. Testowanie reakcji na zagrożenie
<ol>
	<li>Przytrzymaj głowę zwierzęcia w celu zbadania reakcji zagrożenia: przesuń rękę lub kilka palców kilka razy w kierunku każdego oka zwierzęcia, aby wywołać reakcję mrugania, ale uważaj, aby nie dotknąć włosów na twarzy ani nie wywołać zawirowań powietrza, które mogą spowodować mruganie zwierzęcia.</li>
	<li>Reakcja zagrożenia może być nieobecna u zwierząt dotkniętych trzęsawką, szczególnie u owiec z trzęsawką nietypową. Chociaż badanie reakcji zagrożenia jest jedynym badaniem nerwów czaszkowych stosowanym w ramach protokołu, oględziny twarzy podczas tego zabiegu mogą ujawnić inne oznaki deficytów neurologicznych, które zwykle nie występują u trzęsawki, np. paraliż twarzy. Jeśli zwierzę nie mruga w odpowiedzi na zagrożenie, zaleca się przetestowanie odruchu powiekowego poprzez dotknięcie powiek, aby upewnić się, że niezdolność zwierzęcia do mrugania nie jest spowodowana paraliżem twarzy.</li>
</ol>
4. Testowanie odpowiedzi na zadrapanie
<ol>
	<li>Upewnij się, że zwierzę jest spokojne podczas tej procedury, ponieważ testu nie można zinterpretować u zwierzęcia walczącego.</li>
	<li>Podrap obszary pleców w okolicy piersiowej, lędźwiowej i krzyżowej, zatrzymując się między każdym epizodem drapania.</li>
	<li>Jeśli zwierzę reaguje rytmicznymi ruchami głowy lub ciała, porusza się lub oblizuje wargi po drapaniu jednego określonego obszaru, powtórz test drapania, aby potwierdzić odtwarzalność reakcji na drapanie.</li>
	<li>Powtarzalna reakcja jest zwykle wywoływana u zwierząt ze świądem, co zwykle obejmuje owce z klasyczną trzęsawką lub kozy ze świądową postacią trzęsawki, ale na ogół nie ma odpowiedzi u owiec z nietypową trzęsawką, chyba że obecne są inne choroby świądu skóry lub ektopasożyty.</li>
</ol>
5. Sprawdzanie, czy nie ma utraty wełny i zmian skórnych
<ol>
	<li>Sprawdź skórę.</li>
	<li>Świąd spowodowany trzęsawką zwykle powoduje wypadanie włosów, które może znajdować się na potylicy, plecach, zadzie, boku klatki piersiowej lub brzuchu z powodu nadmiernego pocierania lub drapania w miejscu, w którym skóra pod spodem wydaje się normalna.</li>
	<li>Otarcia mogą pojawić się później, jeśli zwierzę ma możliwość pocierania ostrych przedmiotów. Mogą pojawić się rany po ugryzieniach, szczególnie na kończynach, z powodu nadmiernego skubania kończyn.</li>
</ol>
6. Punktacja kondycji ciała
<ol>
	<li>Oceń stan ciała zwierzęcia, badając palpacyjnie wyrostki grzbietowe i poprzeczne kręgów lędźwiowych.</li>
	<li>Trzęsawka może powodować postępującą utratę kondycji ciała, w której wyrostki poprzeczne kręgów lędźwiowych można łatwo wyczuć pojedynczo, a końce wyrostków wydają się ostre.</li>
</ol>
7. Zawiązanie oczu zwierzęciu
<ol>
	<li>Zakryj oczy zwierzęcia kapturem, który można wykonać za pomocą dowolnej nieprzezroczystej torby, w której jeden róg jest odcięty, aby umożliwić zwierzęciu oddychanie.</li>
	<li>Wypuszczaj zwierzę tylko wtedy, gdy nie ma obaw o bezpieczeństwo i nie ma ryzyka zranienia z powodu panikującego zwierzęcia; w przeciwnym razie trzymaj owce i badaj ruchy zwierzęcia, nadal kontrolując zwierzę.</li>
	<li>Zawiązywanie oczu może nasilać objawy układu przedsionkowego lub dysfunkcji móżdżku, które mogą być zasłonięte przez zdolność zwierzęcia do kompensacji za pomocą wzroku. Może dojść do utraty równowagi, braku koordynacji lub krążenia, szczególnie u inaczej niewyróżniających się klinicznie owiec z nietypową trzęsawką.</li>
</ol>
8. Ocena ruchu zwierzęcia
<ol>
	<li>Badaj chód i ruchy mięśni zwierzęcia, gdy porusza się swobodnie.</li>
	<li>Brak koordynacji może charakteryzować się szerokimi ruchami kończyn tylnych, skakaniem obiema kończynami tylnymi lub nadmiernym kołysaniem się w kończynach tylnych, co może skutkować potknięciem się lub krótkim siadaniem.</li>
	<li>Drżenie głowy jest często subtelne, gdy zwierzę nie jest zaniepokojone, ale może stać się bardziej zauważalne w trakcie lub po zakończeniu badania klinicznego.</li>
</ol>
9. Interpretacja
<ol>
	<li>Zastanów się nad znaczeniem ustaleń w odniesieniu do trzęsawki.</li>
	<li>Chociaż obecność pojedynczych objawów, takich jak powtarzająca się reakcja na drapanie, drżenie, nieprawidłowe zachowanie, krążenie, epizody zapadania się, ataksja lub brak reakcji zagrożenia, może mieć różne przyczyny, łączne wystąpienie dwóch lub więcej z tych objawów wysoce sugeruje trzęsawkę owiec lub kóz.</li>
</ol>

<ol><li>Benestad, S. L., Arsac, J. N., Goldmann, W., Nöremark, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atypical%2FNor98+scrapie%3A+properties+of+the+agent%2C+genetics%2C+and+epidemiology%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Res.%22%5BJournal%5D)">Atypical/Nor98 scrapie: properties of the agent, genetics, and epidemiology.</a> Vet Res.. 39 (4), 19 (2008).</li>
<li>D'Angelo, A., Maurella, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+clinical+criteria+to+diagnose+scrapie+in+Italy%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+J%22%5BJournal%5D)">Assessment of clinical criteria to diagnose scrapie in Italy.</a> Vet. J. 174 (1), 106-112 (2007).</li>
<li>Eloit, M., Adjou, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BSE+agent+signatures+in+a+goat%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Rec%22%5BJournal%5D)">BSE agent signatures in a goat.</a> Vet. Rec. 156 (16), 523-524 (2005).</li>
<li>Fediaevsky, A., Maurella, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence+of+atypical+scrapie+in+sheep+from+positive+flocks+is+not+higher+than+in+the+general+sheep+population+in+11+European+countries%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">The prevalence of atypical scrapie in sheep from positive flocks is not higher than in the general sheep population in 11 European countries.</a> BMC Vet. Res. 6, 9 (2010).</li>
<li>Healy, A. M., Weavers, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+neurology+of+scrapie+in+Irish+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vet.+Intern.+Med%22%5BJournal%5D)">The clinical neurology of scrapie in Irish sheep.</a> J. Vet. Intern. Med. 17 (6), 908-916 (2003).</li>
<li>Houston, E. F., Gravenor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+signs+in+sheep+experimentally+infected+with+scrapie+and+BSE%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Clinical signs in sheep experimentally infected with scrapie and BSE.</a> 152 (11), 333-334 (2003).</li>
<li>Kittelberger, R., Chaplin, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atypical+scrapie%2FNor98+in+a+sheep+from+New+Zealand%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vet.+Diagn.+Invest%22%5BJournal%5D)">Atypical scrapie/Nor98 in a sheep from New Zealand.</a> J. Vet. Diagn. Invest. 22 (6), 863-875 (2010).</li>
<li>Konold, T., Bone, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associations+of+clinical+signs+and+prion+protein+genotypes+in+British+sheep+with+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Dtsch.+Tier%C3%A4rztl.+Wochenschr%22%5BJournal%5D)">Associations of clinical signs and prion protein genotypes in British sheep with scrapie.</a> Dtsch. Tierärztl. Wochenschr. 116 (11), 380-388 (2009).</li>
<li>Konold, T., Bone, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scrapie+in+goats%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Rec%22%5BJournal%5D)">Scrapie in goats.</a> Vet. Rec. 161 (11), 395-396 (2007).</li>
<li>Konold, T., Bone, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pruritus+is+a+common+feature+in+sheep+infected+with+the+BSE+agent%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">Pruritus is a common feature in sheep infected with the BSE agent.</a> BMC Vet. Res. 4, 16 (2008).</li>
<li>Konold, T., Bone, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+clinical+signs+in+goats+with+transmissible+spongiform+encephalopathies%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">Monitoring of clinical signs in goats with transmissible spongiform encephalopathies.</a> BMC Vet. Res. 6, 13 (2010).</li>
<li>Konold, T., Davis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+findings+in+two+cases+of+atypical+scrapie+in+sheep%3A+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">Clinical findings in two cases of atypical scrapie in sheep: a case report.</a> BMC Vet. Res. 3, 1 (2007).</li>
<li>Passler, T., Walz, P. H., Pugh, D. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPassler%2C+T+%22Diseases+of+the+Neurologic+System.+In%3A+Sheep+and+Goat+Medicine%22">Diseases of the Neurologic System. In: Sheep and Goat Medicine</a>. Pugh, D. G., Baird, A. N. , 2, W.B.Saunders. Saint Louis. 361-405 (2012).</li>
<li>Russel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body+condition+scoring+of+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22In+Pract%22%5BJournal%5D)">Body condition scoring of sheep.</a> In Pract. 6 (3), 91-93 (1984).</li>
<li>Simmons, H. A., Simmons, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atypical+scrapie+in+sheep+from+a+UK+research+flock+which+is+free+from+classical+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">Atypical scrapie in sheep from a UK research flock which is free from classical scrapie.</a> BMC Vet. Res. 5, 8 (2009).</li>
<li>Simmons, M. M., Konold, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+natural+atypical+scrapie+phenotype+is+preserved+on+experimental+transmission+and+sub-passage+in+PRNP+homologous+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">The natural atypical scrapie phenotype is preserved on experimental transmission and sub-passage in PRNP homologous sheep.</a> BMC Vet. Res. 6, 14 (2010).</li>
<li>Spiropoulos, J., Lockey, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+prion+with+BSE+properties+from+farmed+goat%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Isolation of prion with BSE properties from farmed goat.</a> Emerg. Infect. Dis. 17 (12), 2253-2261 (2011).</li>
<li>Ulvund, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aUlvund%2C+MJ+%22Clinical+Findings+in+Scrapie.+In%3A+Prions+in+humans+and+animals%22">Clinical Findings in Scrapie. In: Prions in humans and animals</a>. Hörnlimann, B., Riesner, D., Kretzschmar, H. , de Gruyter. Berlin. 398-407 (2006).</li>
</ol>

Wszystkie procedury z udziałem zwierząt zostały przeprowadzone zgodnie z ustawą o zwierzętach (procedurach naukowych) z 1986 r., na podstawie licencji brytyjskiego Ministerstwa Spraw Wewnętrznych. Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Trzęsawka owiec jest chorobą wpisaną na listę Światowej Organizacji Zdrowia Zwierząt (OIE), która w przypadku braku szybkiego i wiarygodnego testu przedubojowego opiera się na zdolności hodowców lub lekarzy weterynarii do rozpoznania objawów klinicznych związanych z tą chorobą. Większość przypadków trzęsawki, w szczególności przypadków trzęsawki atypowej, jest jednak obecnie wykrywana w wyniku ukierunkowanego nadzoru nad TSE, tj. poprzez badanie mózgu małych przeżuwaczy poddawanych ubojowi lub padłych zwierząt gospodarskich. Hodowla owiec pod kątem odporności na trzęsawkę klasyczną, która zmniejszyła liczbę przypadków trzęsawki klasycznej, najprawdopodobniej zmniejszyła również świadomość ludzi na temat choroby, przez co rzadziej jest ona brana pod uwagę w diagnostyce różnicowej zaburzeń neurologicznych u owiec. Trzęsawka atypowa ma również niską częstość występowania z około pięcioma przypadkami w rzeźniach i ośmioma przypadłościami na 10 000 badanych w Europie4. Ponadto świąd, zwykle objawiający się jako łysienie z przeczosem lub bez, jest często uważany za charakterystyczny objaw trzęsawki13. W związku z tym choroba neurologiczna bez współistniejącego świądu, jak obserwowana w trzęsawce atypowej12 lub nieświądowej postaci trzęsawki kóz11 , może nie budzić podejrzenia trzęsawki.
Niniejszy protokół badania został opracowany w celu identyfikacji objawów klinicznych TSE u owiec poprzez ocenę specyficznych objawów klinicznych związanych z różnymi rodzajami trzęsawki (trzęsawka atypowa i trzęsawka klasyczna, przy czym ta ostatnia jest reprezentowana przez nietypową owcę zaszczepioną BSE, która wykazywała objawy podobne do trzęsawki klasycznej). W przypadku trzęsawki klasycznej odsetek przypadków, które wykazywały pozytywną reakcję na zadrapanie ("odruch skubania") wahał się od 50 do 77 u ponad 100 badanych owiec5,8. Zaburzenia ruchowe można zaobserwować nawet w 81% przypadków trzęsawki klasycznej na podstawie różnych badań18. Brak koordynacji jest również głównym objawem w różnych naturalnie występujących przypadkach trzęsawki atypowej, której często towarzyszą zmiany w zachowaniu1, ale dodatkowymi objawami zgłaszanymi zarówno u naturalnie, jak i eksperymentalnie zakażonych owiec z trzęsawką atypową były krążenie i upośledzenie wzroku12,15,16, dlatego zawiązanie oczu i badanie reakcji zagrożenia jest uwzględnione w protokole badania. Ocena stanu ciała, na przykład za pomocą 6-punktowego systemu punktacji14, umożliwia ocenę wychudzenia, które można zaobserwować u owiec dotkniętych trzęsawką5. Chociaż kryteria kliniczne mające pomóc w wykrywaniu trzęsawki owiec zostały zaproponowane już wcześniej2, odnosiły się one jedynie do wykrywania trzęsawki klasycznej i uwzględniały historię kliniczną, która może nie być dostępna, jeśli zwierzęta są prezentowane w rzeźni.
Obecny protokół pozwala na badanie przesiewowe wielu zwierząt pod kątem oznak trzęsawki w krótkim czasie. Ponadto protokół badania można zastosować do badań eksperymentalnych trzęsawki owiec i kóz w celu monitorowania początku klinicznego, progresji i punktu końcowego. Nie zastępuje ono jednak bardziej szczegółowego badania fizykalnego i neurologicznego odpowiednim zapisem historii klinicznej, po której mogą nastąpić pomocnicze testy diagnostyczne (badanie krwi i płynu mózgowo-rdzeniowego; w razie potrzeby bardziej zaawansowane techniki obrazowania), które mogą być konieczne w celu wykluczenia różnych innych schorzeń u małych przeżuwaczy, które wykazują podobne objawy, takie jak metaboliczne lub zapalne choroby neurologiczne, ropnie mózgu lub nowotwory.
Chociaż badanie kliniczne jest na ogół mniej czułe w wykrywaniu zwierząt zakażonych TSE niż badania pośmiertne oparte na wykrywaniu białka prionowego2,11, szczególnie we wczesnym stadium okresu inkubacji, jest to obecnie jedyna metoda wykrywania u żywych zwierząt i ma największe znaczenie dla tych krajów, które nie posiadają ukierunkowanego systemu nadzoru w celu identyfikacji małych przeżuwaczy dotkniętych TSE.

Trzęsawka to zakaźna encefalopatia gąbczasta (TSE) owiec i kóz, która należy do grupy zaburzeń nieprawidłowego fałdowania białek, takich jak gąbczasta encefalopatia bydła (BSE) u bydła, przewlekła choroba wyniszczająca u jeleni i choroba Creutzfeldta-Jakoba u ludzi. Diagnozę stawia się post mortem poprzez wykrycie nieprawidłowej formy białka prionowego, które jest oporne na proteinazy, zwykle w mózgu. Można wyróżnić dwie główne naturalnie występujące formy trzęsawki, które różnią się epidemiologicznie, patologicznie i biochemicznie: trzęsawka klasyczna i trzęsawka nietypowa. Ponadto choroba neurologiczna z klasycznymi objawami klinicznymi podobnymi do trzęsawki może zostać wywołana u owiec i kóz przez eksperymentalne zakażenie czynnikiem BSE6,10-11. W rzeczywistości naturalnie występujące BSE zdiagnozowano u kóz3,17. Zwalczanie trzęsawki klasycznej (i BSE u owiec, jeśli występuje naturalnie) osiągnięto poprzez hodowlę w celu uzyskania odporności genetycznej ukierunkowanej na gen białka prionowego, ale jest to trudniejsze w przypadku trzęsawki atypowej, która jest uważana za chorobę sporadyczną i została zdiagnozowana w krajach uważanych za wolne od trzęsawki klasycznej, np. w Nowej Zelandii7.
Trzęsawka jest chorobą neurologiczną dorosłych owiec i kóz, powodującą zmiany w zachowaniu, czuciu i ruchu, ale choroba postępuje powoli, a objawy kliniczne często nie są rozpoznawane, ponieważ opiekun zwierząt lub lekarz weterynarii może nie być zaznajomiony z objawami klinicznymi, lub trzęsawka nie jest w ogóle brana pod uwagę w diagnostyce różnicowej chorób neurologicznych u małych przeżuwaczy.
Proponowany protokół badania został zaprojektowany, aby pomóc w klinicznej diagnozie trzęsawki z myślą o dwóch celach: powinien być znacznie krótki, aby umożliwić skanowanie wielu zwierząt w krótkim czasie, ale wystarczająco szczegółowy, aby umożliwić wykrycie zwierząt dotkniętych trzęsawką, co jest osiągane poprzez ocenę obecności objawów klinicznych często spotykanych u zwierząt dotkniętych trzęsawką. Protokół ten jest nieznaczną modyfikacją w stosunku do protokołu stosowanego do monitorowania kóz pod kątem objawów trzęsawki klasycznej11 i obejmuje zawiązanie oczu zwierzęciu, co może zaostrzyć objawy kliniczne, które zwykle nie są związane z trzęsawką9.

protokół badania klinicznego w celu wykrycia trzęsawki atypowej i klasycznej u owiec

Clinical Examination Protocol to Detect Atypical and Classical Scrapie in Sheep

Diagnoza trzęsawki, pasażowalnej encefalopatii gąbczastej (TSE) owiec i kóz, opiera się obecnie na wykrywaniu białka prionowego związanego z chorobą za pomocą testów pośmiertnych. O ile losowa próbka populacji owiec lub kóz nie jest aktywnie monitorowana pod kątem trzęsawki, identyfikacja przypadków trzęsawki opiera się na zgłaszaniu podejrzanych klinicznie, co zależy od znajomości choroby przez daną osobę i zdolności do rozpoznawania objawów klinicznych związanych z trzęsawką. Trzęsawka może nie być brana pod uwagę w diagnostyce różnicowej chorób neurologicznych u małych przeżuwaczy, szczególnie w krajach o niskiej częstości występowania trzęsawki, lub nie być rozpoznawana, jeśli występuje jako postać nieświądowa, taka jak trzęsawka atypowa. Aby pomóc w identyfikacji podejrzanych klinicznie, przedstawiono krótki protokół badania w celu oceny występowania specyficznych objawów klinicznych związanych ze świądowymi i nieświądowymi postaciami TSE u owiec, który można również zastosować do kóz. Obejmuje to ocenę zachowania, wzroku (poprzez testowanie reakcji na zagrożenie), świąd (poprzez testowanie reakcji na drapanie) i ruchu (z opaską na oczy i bez). Może to prowadzić do bardziej szczegółowego badania neurologicznego zwierząt zgłaszanych jako podejrzanych o trzęsawkę. Może być również stosowany w eksperymentalnych badaniach TSE owiec lub kóz w celu oceny postępu choroby lub określenia klinicznego punktu końcowego.

Klinicznie zdrowe owce. Kastrat rasy Poll Dorset z stada wolnego od scrapie, któremu wewnątrzczaszkowo podano inokulum z mózgu bydła pochodzącego z Nowej Zelandii i który został zbadany 49 miesięcy po inokulacji. Owca ta ma prawidłową postawę, zachowuje się normalnie, wykazuje prawidłową reakcję na zagrożenie (Rysunek 1), nie reaguje na test drapania, ma nienaruszone runo i bardzo dobrą kondycję organizmu. Po założeniu opaski na oczy zwierzę nie wykazuje żadnych nieprawidłowości klinicznych i nie przejawia oznak zaburzeń ruchowych.
Owca z nietypową postacią scrapie, przejawiająca nieświądową formę TSE u owiec. Kastrat rasy Cheviot z stada wolnego od scrapie, któremu doopczeraszowo wstrzyknięto homogenat mózgu z polowego przypadku nietypowego scrapie o tym samym genotypie białka prionowego (AHQ/AHQ), zbadany 36 miesięcy po inokulacji. Owca ta również posiada prawidłową postawę, lecz zachowuje się inaczej niż pozostałe owce w zagrodzie i kręci się w kierunku zgodnym z ruchem wskazówek zegara. Nie mruga podczas testowania odruchu obronnego oka. Drapanie nie wywołuje żadnej reakcji i nie stwierdzono zmian w runie, jednak kondycja organizmu jest jedynie przeciętna. Zwierzę kręci się zgodnie z ruchem wskazówek zegara po założeniu opaski na oczy (Rysunek 2) i traci równowagę. Chód jest ataktyczny i widoczny jest delikatny drżenie głowy.
Atypowe BSE u owiec objawiające się świądową postacią TSE u owiec, która klinicznie przypomina obraz kliniczny owiec dotkniętych klasycznym scrapie. Z tego powodu przypadek klasycznego scrapie nie został uwzględniony. Kastrat rasy Poll Dorset z stada wolnego od scrapie, który został zaszczepiony wewnątrzczaszkowo homogenatem mózgu bydlęcego z atypowym BSE (typ L) i zbadany 50 miesięcy po inokulacji. Owca stoi lekko zgarbiona, ma tendencję do szerokiego rozstawiania kończyn tylnych i upada na ziemię po złapaniu. Odruch grozy jest słaby. Drapanie różnych obszarów grzbietu wywołuje ruchy głowy lub warg (Rysunek 3), a na czubku głowy występuje ubytek wełny z niewielkimi urazami skóry. Kondycja ciała jest dobra. Po zawiązaniu oczu zwierzę niechętnie się porusza i opiera tył ciała o przegrodę, aby utrzymać równowagę. Owca jest ataktyczna i wykazuje hipermetrię kończyn przednich.
<img alt="Procedura obsługi owiec w badaniach genetycznych, z oznakowanym zwierzęciem i badaczem w rękawiczkach i fartuchach laboratoryjnych." fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51101/51101fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51101/51101fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1. Test odpowiedzi na zagrożenie. Gest imitujący zagrożenie skierowany w stronę oka zwierzęcia wywołuje odruch mrugania. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51101/51101fig1highres.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększony obraz.</a>
<img alt="Badanie zachowania owiec; zwierzę w kontrolowanym środowisku; badania obserwacyjne; gromadzenie danych." fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51101/51101fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51101/51101fig2.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2. Zaślepianie. Krążenie zgodnie z ruchem wskazówek zegara wywołane zaślepieniem owcy za pomocą kaptura. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51101/51101fig2highres.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić większy obraz.</a>
<img alt="Proces obchodzenia się z owcami, technika zarządzania gospodarstwem, hodowla zwierząt, demonstracja opieki nad inwentarzem." fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51101/51101fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51101/51101fig3.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rycina 3"> 
Rycina 3. Badanie reakcji na drapanie. Drapanie grzbietu wywołuje oblizywanie warg z towarzyszącymi ruchami głowy na boki <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51101/51101fig3highres.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić większy obraz.</a>

Przedstawiono krótki protokół badania klinicznego, który ma pomóc w wykrywaniu klasycznej i nietypowej trzęsawki owiec i kóz.

Protokół badania klinicznego w celu wykrycia trzęsawki atypowej i klasycznej u owiec

The diagnosis of scrapie, a transmissible spongiform encephalopathy (TSEs) of sheep and goats, is currently based on the detection of disease-associated ...

Scrapie to zakaźna gąbczasta encefalopatia owiec i kóz, która wywołuje objawy neurologiczne u dotkniętych zwierząt. Potwierdzenie choroby następuje pośmiertnie podczas badania mózgu, co pozwala również na klasyfikację na różne formy scrapie: klasyczną, atypową oraz rzadziej inne formy przeniesione z innych gatunków, takie jak gąbczasta encefalopatia bydła (BSE). Scrapie jest chorobą wymienioną przez Światową Organizację Zdrowia Zwierząt, jednak choroba ta często nie jest rozpoznawana u dotkniętych małych przeżuwaczy.W niniejszym filmie zaprezentowano krótki protokół badania klinicznego trwający około pięciu minut, który ma pomóc w wykrywaniu klinicznych przypadków zapadnięcia na zakaźne encefalopatie gąbczaste, posługując się trzema owcami jako przykładami. Przykład pierwszy to klinicznie zdrowa owca, której w obrębie mózgu zaszczepiono homogenat mózgu bydlęcego wolny od BSC, zbadana w 49. miesiącu po inokulacji, co stanowi grupę kontrolną.Przykład drugi to klinicznie chora owca, która została inokulowana dożylnie w mózg homogenatem mózgu owczego z atypowym scrapie i zbadana w 36. miesiącu po inokulacji, co stanowi przypadek atypowego scrapie. Przykład trzeci to klinicznie chora owca reinokulowana homogenatem mózgu bydlęcego z atypowym BSE i zbadana w 50. miesiącu po inokulacji, u której objawy kliniczne są podobne do klasycznego scrapie. Z tego powodu w zestawieniu nie uwzględniono przypadku klasycznego scrapie.Ocena postawy. Zdrowa owca z kolczykiem numer jeden, wskazana czerwoną strzałką, wykazuje prawidłową postawę, gdy nie jest niepokojona w zagrodzie. Postawa owcy z nietypową postacią scrapie również wydaje się prawidłowa.Owca o nietypowym wskaźniku BSC wydaje się lekko zgarbiona i ma tendencję do stąpania na tylnych kończynach. Podczas ogólnej oceny zachowania, oczekiwanej u normalnych owiec, zdrowa owca pozostaje w grupie i podąża za ruchami badacza. Podejście i złapanie zwierzęcia przy uwzględnieniu jego wielkości nie wywołuje żadnych nieprawidłowości.Owca z nietypowym zespołem scrapy zachowuje się inaczej niż pozostałe owce w zagrodzie i stoi tyłem do kamery, podczas gdy wszystkie inne owce patrzą w stronę kamery. Owce są zwierzętami stadnymi i poruszają się w grupach, lecz ta owca nie podąża natychmiast za pozostałymi i wydaje się powoli orientować, że inne owce przesunęły się zgodnie z ruchem wskazówek zegara. Po zbadaniu tej owcy wywołano zachowanie krążenia.To kompulsywne zachowanie ustaje dopiero w momencie podejścia do owcy, co powoduje jej ucieczkę. Owca z nietypowym BSC upada na ziemię podczas manipulacji po schwytaniu. Test reakcji na zagrożenie polega na kilkukrotnym przemieszczaniu dłoni lub kilku palców w kierunku każdego z oczu zwierzęcia, bez dotykania włosów na pysku i bez wytwarzania podmuchów powietrza.Turbulencja powinna wywołać mruganie, co zaobserwowano w przypadku obu oczu oraz u zdrowej owcy. Odpowiedź ta jest utracona u owcy z nietypową postacią scrapy, która nie mruga. Niemniej jednak jej zdolność do mrugania po dotknięciu powiek nie jest upośledzona.Atypowa owca z BSE mruga w odpowiedzi na bodziec, jednak reakcja mrugania w lewym oku jest słabsza w porównaniu z prawym okiem. Podczas dotykania powieki w celu sprawdzenia odruchu drapania, testy są przeprowadzane, gdy owca stoi przy ścianie i jest blokowana przed ucieczką do przodu przez jedną nogę badacza; zwierzę jest na tyle spokojne, aby kontynuować badanie. W tym miejscu drapane są kilka obszarów grzbietu: regiony lędźwiowo-krzyżowe, środkowo-piersiowe oraz przednio-piersiowe, z przerwą między każdym epizodem drapania w celu obserwacji reakcji.Ta klinicznie zdrowa owca nie wykazuje powtarzalnej reakcji stereotypowej. Podobnie owca z atypowym scrapy nie reaguje na drapanie kilku obszarów grzbietu. Reakcja zostaje jednak wywołana w przypadku drapania owcy z atypowym BSC.W zależności od miejsca zadrapania, reakcją są albo ruchy gryzące wargą, albo ruchy głową. Odpowiedź ta jest uznawana za pozytywny wynik badania (Positive Checking) pod kątem ubytków wełny i zmian skórnych. Obszarne ubytki wełny z towarzyszącymi im zmianami skórnymi lub bez nich można zazwyczaj zaobserwować z odległości, jednak dokładniejsze badanie owcy podczas unieruchomienia może pozwolić na zidentyfikowanie mniejszych ubytków wełny spowodowanych nadmiernym świądem.Obszary te występują często na głowie, grzbiecie, zadku oraz na bokach klatki piersiowej lub brzucha, często w sposób obustronnie symetryczny. Podczas gdy u owiec kontrolnych oraz owiec z nietypowym scrapy nie stwierdzono ubytków wełny, owca z nietypowym BSC utraciła wełnę na czubku grzbietu. Poza niewielkim strupem, który powstał w wyniku uszkodzenia skóry, skóra pozostaje w pozostałych miejscach nienaruszona.Mogło to zostać spowodowane nadmiernym świądem wpływającym na ocenę kondycji ciała. Kondycję ciała zwierzęcia ocenia się poprzez badanie palpacyjne wyrostków poprzecznych i grzbietowych kręgów lędźwiowych. Można to również przeprowadzić podczas testów drapania u owiec.Można zastosować punktację od zera do pięciu, gdzie wartość pięć przypisuje się owcy z bardzo dużym stopniem otyłości. Jest to przedstawione na schemacie przekroju poprzecznego kręgosłupa lędźwiowego. Wyrostki kręgów są pokryte mięśniami zaznaczonymi na czerwono oraz tkanką tłuszczową na żółto; w takim przypadku wypełnienie końców wyrostków poprzecznych byłoby niemożliwe, nawet przy zastosowaniu nacisku na skórę.W przeciwieństwie do tego, kondycja organizmu jest zła. Jeśli końce wyrostków kolczystych są wyczuwalne jako ostre, co oznacza, że przy wywieraniu nacisku nie wyczuwa się żadnej warstwy tkanek nad nimi, tak jak pokazano na tym obrazie. Taki stan ocenia się jako zero.Kondycja organizmu u klinicznie zdrowych owiec jest bardzo dobra, z wynikiem czterech; atypowy scrapie spowodował pogorszenie kondycji organizmu, która jest jedynie przeciętna z wynikiem dwóch. Natomiast owca z atypowym BSC utrzymała dobrą ocenę kondycji organizmu na poziomie trzech. Przy zakładaniu opaski na oczy głowa owcy jest tutaj zakryta ręcznie wykonaną opaską, którą może być dowolna torba niebędąca C3, w której jeden róg jest wycięty przy nosie zwierzęcia, aby umożliwić oddychanie; przed wypuszczeniem owcy należy upewnić się, że jest to bezpieczne dla zwierzęcia.Niektóre owce mogą wpaść w panikę i biegać lub skakać, co może stwarzać ryzyko zranienia ich samych lub innych osobników. W takim przypadku nie należy całkowicie uwalniać zwierzęcia, lecz obserwować jego ruchy, wciąż je trzymając. Zdrowa owca pozostaje spokojna z zasłoniętymi oczami, ale potrząsa głową w próbie zdjęcia opaski.Jego ruch lub równowaga nie są zaburzone. W przeciwieństwie do niego, owca z atypowym scrapie zaczyna poruszać się po okręgu w kierunku zgodnym z ruchem wskazówek zegara. Występuje również utrata równowagi.Owca z nietypowym BSC niechętnie się porusza i opiera się o zagrodę, jednak podczas tej czynności krzyżuje cztery nogi, co powoduje wyraźną utratę równowagi. W ocenie ruchu zwierzęcia chód u klinicznie zdrowej owcy wydaje się prawidłowy. Nie stwierdzono wyraźnych drżeń, zarówno gdy owca pozostaje niezakłócona, jak i wcześniej podczas obchodzenia się z nią.U owiec z nietypową postacią scrapie występuje ataksja. Zwierzęta potykają się podczas podążania za stadem, a ruchy ich kończyn tylnych wydają się nieskoordynowane; ponadto, gdy owca stoi w grupie, można krótko zaobserwować delikatne drżenie głowy.Tekstura jest również widoczna u owcy oznaczonej jako atypowe BSE. Występuje utrata równowagi w koordynacji oraz hipermetria, co objawia się wysokim unoszeniem kopyt i upadkiem. Interpretacja chodu.Objawy kliniczne u owiec dotkniętych zakaźnymi encefalopatiami gąbczastymi obejmowały nieprawidłowe zachowanie, brak reakcji na zagrożenie, dodatnią reakcję na drapanie, łysienie, uszkodzenia skóry, kręcenie się w kółko po zawiązaniu oczu, zaburzenia koordynacji oraz drżenia; w prezentowanym tutaj przypadku wystąpiły niektóre z tych objawów. Wystąpienie dowolnego z tych symptomów powinno zaalarmować badającego, a encefalopatię gąbczastą należy rozważyć jako jedną z przyczyn. Podsumowanie. Niniejsze wideo przedstawia protokół badania klinicznego przeprowadzonego u klinicznie zdrowej owcy oraz podaje przykłady nieprawidłowych wyników u owiec dotkniętych zakaźnymi encefalopatiami gąbczastymi.Niniejszy protokół jest przydatny do wykrywania przypadków budzących podejrzenia kliniczne, które mogą zostać poddane bardziej szczegółowemu badaniu w celu wykluczenia innych chorób o podobnym obrazie klinicznym, lub może być stosowany do oceny klinicznego początku, progresji choroby lub punktów końcowych badania. Stosowany w badaniach eksperymentalnych nad transmisyjnymi encefalopatiami gąbczastymi u małych przeżuwaczy.

clinical-examination-protocol-to-detect-atypical-classical-scrapie

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Protokół badania klinicznego w celu wykrycia atypowej i klasycznej gąbki w owcy

W niniejszej pracy opisujemy nową metodę monitorowania pobierania i transportu prionów przez komórki odpornościowe bezpośrednio po inokulacji doprzewnowej, polegającą na oczyszczaniu i znakowaniu fluorescencyjnym zagregowanych prętów prionowych z zakażonego materiału mózgowego, a następnie śledzeniu ich pobierania i przemieszczania się z miejsca wstrzyknięcia oraz charakteryzacji komórek pośredniczących w tych zdarzeniach.

Monitorowanie przemieszczania się komórek odpornościowych do fluorescencyjnych pręcików prionowych w godzinach po zakażeniu drogą dosytrychialną

Padlinożercy mają potencjał do przenoszenia zakaźnych prionów gąbczastej encefalopatii w swoim kale do obszarów wolnych od chorób.  Szczegółowo opisujemy metody stosowane do określenia, czy priony trzęsawki przystosowane do myszy pozostają zakaźne po przejściu przez przewód pokarmowy wron amerykańskich (Corvus brachyrhynchos), powszechnego konsumenta martwych zwierząt.

Procedury identyfikacji zakaźnych prionów po przejściu przez układ pokarmowy gatunku ptaków

Pomiar bariery dla międzygatunkowego przenoszenia chorób prionowych jest trudny i zazwyczaj wiąże się z wyzwaniami zwierzęcymi lub testami biochemicznymi. W tym miejscu przedstawiamy test konwersji białka prionowego in vitro z możliwością przewidywania barier gatunkowych.

Ocena barier gatunkowych pasażowalnej encefalopatii gąbczastej za pomocą testu konwersji białka prionowego in vitro

Tutaj prezentujemy protokół opisujący prostą, szybką i efektywną technikę wzmacniania prionów, metodę konwersji indukowanej wstrząsami w czasie rzeczywistym (RT-QuIC).

Test konwersji wywołany wstrząsem w czasie rzeczywistym do wykrywania prionów CWD w materiale kałowym

Bezpośredni szybki test immunohistochemiczny (DRIT) stanowi uznaną przez Światową Organizację Zdrowia Zwierząt i Światową Organizację Zdrowia (OIE/WHO) alternatywę dla testu na przeciwciała fluorescencyjne (DFA) do diagnozowania wścieklizny. Test ten pozwala na zastosowania w terenie, które można wykonać w ciągu około 1 godziny po pobraniu wycisków mózgu za pomocą mikroskopii świetlnej.

Wzmocniony nadzór nad wścieklizną za pomocą bezpośredniego szybkiego testu immunohistochemicznego

Celem tego protokołu jest zademonstrowanie bezpiecznych technik sekcji zwłok na małych i dużych zwierzętach, aby uzyskać zadowalające próbki tkanek do badania wścieklizny.

Techniki sekcji zwłok wścieklizny u dużych i małych zwierząt

Immunoznakowanie nieprawidłowego białka prionowego za pomocą protokołów immunohistochemicznych wymaga specyficznych metod przygotowania próbki i przeciwciał anty-PrP. Niniejszy protokół opisuje kluczowe etapy demaskowania epitopów w celu zapewnienia prawidłowego znakowania immunologicznego PrP i zminimalizowania niespecyficznego barwienia tła. Podejście to uwzględnia również środki bezpieczeństwa biologicznego podczas prowadzenia badań immunohistochemicznych na tkankach zakażonych prionami.

Wykrywanie nieprawidłowego białka prionowego za pomocą immunohistochemii

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia jest jednym z najczęściej stosowanych mysich modeli stwardnienia rozsianego. W obecnym protokole myszy C57BL/6J obu płci są immunizowane peptydem glikoproteinowym oligodendrocytów mielinowych, co skutkuje głównie wznoszącym się niedowładem ogona i kończyn. W tym miejscu omówiono protokół indukcji i oceny EAE.

Modelowanie stwardnienia rozsianego u obu płci: eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia wywołane MOG35-55

Protokół ten demonstruje test reakcji łańcuchowej odwrotnej transkrypcji i polimerazy (RT-PCR) pan-lizawirusa LN34 w czasie rzeczywistym od pobierania tkanek do interpretacji wyników, w tym aktualizacje sekwencji primerów i formuł poprawiających wydajność testu dla niektórych lizawirusów i zalegowców niezwiązanych z wścieklizną. Demonstrujemy także konfigurację testu dla multipleksowanego formatu LN34 z pojedynczym dołkiem (LN34M).

Diagnostyka pośmiertna wścieklizny u zwierząt za pomocą zaktualizowanego, multipleksowanego testu LN34 w czasie rzeczywistym reakcji łańcuchowej odwrotnej transkrypcji i polimerazy

Brakuje metody oceny powszechnie używanych obszarów w warunkach laboratoryjnych pod kątem zanieczyszczenia prionami i skutecznej dekontaminacji. Opisany tutaj protokół zawiera kluczowe podstawy do wdrożenia laboratoryjnego testu bezpieczeństwa prionów, który można łatwo modyfikować w celu spełnienia indywidualnych potrzeb określonych laboratoriów.

Test laboratoryjny bezpieczeństwa prionowego

Poznaj protokół badania klinicznego owiec w celu wykrywania klasycznej i atypowej postaci scrapie. Ta metoda obejmuje ocenę zachowania, postawy, odruchów oraz kondycji ciała.

Protokół badania klinicznego w celu wykrycia trzęsawki atypowej i klasycznej u owiec

Przeglądaj więcej filmów