Name: Heterotopowe pomocnicze przeszczepienie wątroby szczura z tętnicą żyły wrotnej o regulowanym przepływie w ostrej niewydolności wątroby (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 19 s
Description: Poznaj technikę heterotopowego pomocniczego przeszczepienia wątroby szczura z tętnicą żyły wrotnej o regulowanym przepływie w ostrej niewydolności wątroby. Metoda ta umożliwia badanie mikrokrążenia wątrobowego i regeneracji.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie zostało sfinansowane przez "Deutsche Forschungsgemeinschaft" (DFG). K. Schleimer był wspierany przez stypendium Lise Meitner Ministerstwa Nauki i Badań Nadrenii Północnej-Westfalii. Serdecznie dziękujemy Pani Mary-Joan Blümich za doskonałą pomoc redakcyjną. Dr Maria Kokozidou została sfinansowana z Fresenius 2011_A61.

1. Zwierzęta doświadczalne
<ol>
	<li>Uzyskać zgodę Lokalnej Komisji Etycznej na wszystkie eksperymenty, które zostaną przeprowadzone, zgodnie z wytycznymi FELASA dotyczącymi ochrony zwierząt (K 40, 17/99).</li>
	<li>Używaj samców szczurów Lewis, które można kupić u dowolnego hodowcy komercyjnego (np. Charles River Wiga GmbH, Sulzfeld, Niemcy). Na 224 zwierzętach (112 dawców, 112 biorców) wykorzystano do wykonania 112 przeszczepów. Biorcy zostali uśmierceni po 6 tygodniach od operacji. W czasie operacji zwierzęta powinny ważyć 250-350 g.</li>
	<li>Trzymaj zwierzęta w klimatyzowanych pomieszczeniach ze swobodnym dostępem do jedzenia i wody.</li>
</ol>
2. Znieczulenie i przygotowanie operacyjne
<ol>
	<li>Umieścić szczura w pudełku z pleksiglasu podłączonym do aparatu do znieczulania o natężeniu przepływu tlenu 1 l/min i parownika izofluoranowego z 5 % gazem znieczulającym w celu wywołania znieczulenia. Utrzymuj znieczulenie na poziomie 1,5% izofluoranu.</li>
	<li>Ułóż szczury w pozycji leżącej na talerzu grzewczym.</li>
	<li>Usuń sierść brzucha za pomocą kremu do depilacji.</li>
	<li>Przygotuj sterylne pole operacyjne w następujący sposób: Użyj środka dezynfekującego do czyszczenia blatu. Do dezynfekcji miejsca nacięcia należy najpierw użyć chlorheksydyny, następnie alkoholu, a na końcu roztworu do szorowania (np. Chlorheksydyny i 70% alkoholu izopropylowego). Noś jednorazowy fartuch chirurgiczny i rękawiczki chirurgiczne.</li>
	<li>Używaj sterylnych narzędzi mikrochirurgicznych.</li>
	<li>Użyj mikroskopu operacyjnego w powiększeniu 12-20-krotnym.</li>
</ol>
3. Zabieg chirurgiczny
<ol>
	<li>Operacja dawcy 
	 
	preparat
	<ol>
		<li>Wykonaj laparotomię pośrodkową i wyciąć lewy płat boczny oraz środkowy płat przeszczepu, jak opisano przez Higginsa. 14</li>
		<li>Następnie przygotuj więzadło wątrobowo-żuplneczne. Najpierw podlić przewód żółciowy, aby wywołać przekrwienie i rozszerzenie małego przewodu żółciowego. Następnie podwiąż i przeciąć żyłę żołądkowo-dwunastniczą i tętnicę. Następnie wyizoluj pień trzewny i wspólną tętnicę wątrobową oraz przeciąć lewą tętnicę żołądkową i tętnicę śledzionową. Naciąć zatkany przewód żółciowy i wprowadzić do niego stent 20 G. Umiejscowienie stentu musi zapewniać drenaż całego systemu dróg żółciowych wnękowych. Przeciąć przewód żółciowy dystalnie do stentu.</li>
		<li>Odizolować podwątrobowy odcinek żyły głównej tuż nad prawą żyłą nerkową. 
		 
		Perfuzji</li>
		<li>Po podwiązaniu aorty powyżej pnia trzewnego zaciśnij żyłę wrotną i nacij ją. Wprowadzić cewnik perfuzyjny (14 G) do żyły wrotnej i przeprowadzić perfuzję za pomocą 30 ml roztworu histydyny, tryptofanu i ketoglutaranu (HTK) (12 cm H2O, 4°C).</li>
		<li>Przeciąć przeponę i żyłę nadwątrobową jamy brzusznej, aby umożliwić wypłynięcie perfuzatu.</li>
		<li>Wytnij pień trzewnej wraz z plastrem aortalnym i spłucz go roztworem histydyny, tryptofanu i ketoglutaranu. 
		 
		Eksplantacja</li>
		<li>Przeciąć żyłę podwątrobową żyły głównej tuż nad prawą żyłą nerkową.</li>
		<li>Następnie należy umieścić stent o średnicy 0,3 mm w żyle wrotnej i przymocować go za pomocą ligatury. Podczas kolejnej operacji żyła wrotna jest tętniczo przez prawą tętnicę nerkową. Przeciąć żyłę wrotną dystalnie do stentu.</li>
		<li>Po podwiązaniu żyły nadwątrobowej przeciąć ją razem z mankietem przepony.</li>
		<li>Przeszczep należy usunąć i przechowywać w roztworze histydyny-tryptofanu-ketoglutaranu (HTK) w temperaturze 4 ° Celsjusza w plastikowej torbie na lodzie. Założyć szwy narożne (8-0 Ethilon) w żyle podwątrobowej jamy śluzowej.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Operacja odbiorcy
	<ol>
		<li>Wykonaj laparotomię pośrodkową i przygotuj żyłę podwątrobową jamy walnej. Następnie należy odizolować prawą tętnicę nerkową i moczowód, podwiązać moczowód i przeciąć go. Zacisnąć prawą tętnicę nerkową na jej początku, a następnie podwiązać prawą żyłę nerkową. Następnie, po przecięciu obu naczyń nerkowych, należy wykonać nefrektomię. Następnie skrócić prawą tętnicę nerkową, przepłukać ją roztworem soli fizjologicznej heparyny (40 j.m. heparyny/ml roztworu soli fizjologicznej).</li>
		<li>Przeciąć prawą żyłę nerkową proksymalnie do ligatury po bliższym i dalszym zaciśnięciu żyły podwątrobowej w celu utworzenia owalnego światła w żyle podwątrobowej jamy brzusznej. Przepłukać żyłę główną roztworem soli fizjologicznej heparyny. Wszczepić przeszczep w prawą okolicę nerki w jamie brzusznej biorcy.</li>
		<li>Zespolenie żyły podwątrobowej dołu jamy ustnej dawcy koniec do boku z żyłą główną biorcy z wynikiem 8-0 Szew biegowy Ethilon.</li>
		<li>Po przepłukaniu roztworem heparyny/soli fizjologicznej wprowadzić stent w żyle wrotnej do prawej tętnicy nerkowej (ryc. 3). Połącz żyłę wrotną i tętnicę nerkową za pomocą 2 szwów (8-0 Ethilon). Zamocuj stent łączący w tętnicy nerkowej za pomocą ligatury (pleciony jedwabny 7-0).</li>
		<li>Aby umożliwić reperfuzję, najpierw usuń zacisk tętniczy, a następnie oba zaciski żylne (ryc. 4).</li>
		<li>Przygotuj aortę podnerkową, a następnie umieść bliższy i dystalny mikrozacisk i naciąć aortę dokładnie między obydwoma zaciskami. Wykonaj zespolenie z boku między aortą a pniem trzewnym dawcy, używając plastra aortalnego, z szwem biegnącym 10-0 Ethilon.</li>
		<li>Włóż przewód żółciowy do dwunastnicy: Załóż szew sznurkowy w ścianie dwunastnicy, wykonaj małe nacięcie w ścianie dwunastnicy w samym środku sznurka torebkowego. Wprowadzić stentowany przewód żółciowy do dwunastnicy i zacisnąć szew sznurkowy. Na koniec przytrzymaj mocno dwunastnicę i przewód żółciowy razem za pomocą dwóch szwów (Ethilon 8-0) (ryc. 5).</li>
		<li>Następnie wykonaj subcałkowitą resekcję natywnej wątroby, po raz pierwszy opisaną przez Emonda i wsp., aby naśladować ostrą niewydolność wątroby. 7</li>
		<li>Przymocuj żyłę nadwątrobową przeszczepu wraz z mankietem przepony do bocznej ściany brzucha biorcy za pomocą szwu 4-0 Vicryl. Przepłukać brzuch roztworem soli fizjologicznej (ryc. 6).</li>
		<li>Na warstwę mięśniową należy zastosować szew biegowy 4-0 Vicryl, a na skórę szew biegowy 3-0 Vicryl.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Rekonwalescencja i postępowanie pooperacyjne
<ol>
	<li>Pozwól zwierzętom dojść do siebie po znieczuleniu pod lampą ocieplającą na podczerwień.</li>
	<li>Buprenorfinę należy wstrzykiwać w dawce 0,03-0,05 mg/kg m.c. co 8-12 godzin przez 2 dni.</li>
	<li>Zbadać zwierzęta pod kątem ogólnego stanu i objawów choroby lub infekcji.</li>
</ol>
5. Obliczanie początkowej rodzimej masy wątroby
Oblicz początkową rodzimą masę wątroby w następujący sposób: odejmij wagę wyciętych płatów wątroby od całkowitej masy wątroby (2,66% masy ciała (ta wartość z odchyleniem standardowym +/- 0,49% została określona w poprzednich eksperymentach z n=80 zwierzętami tego samego szczepu i wieku)). 15

<ol><li>Boudjema, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+for+fulminant+and+subfulminant+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation for fulminant and subfulminant hepatic failure.</a> Transplantation. 59, 218-223 (1995).</li>
<li>Boudjema, K., Jaeck, D., Siméoni, U., Bientz, J., Chenard, M. P., Brunot, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporary+auxiliary+liver+transplantation+for+subacute+liver+failure+in+a+child%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Temporary auxiliary liver transplantation for subacute liver failure in a child.</a> The Lancet. 342, 778-779 (1993).</li>
<li>Chenard-Neu, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation%3A+Regeneration+of+the+native+liver+and+outcome+in+30+patients+with+fulminant+hepatic+failure+-+a+multicenter+European+study%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation: Regeneration of the native liver and outcome in 30 patients with fulminant hepatic failure - a multicenter European study.</a> Hepatology. 23, 1119-1127 (1996).</li>
<li>Gubernatis, G., Pichlmayr, R., Kemnitz, J., Gratz, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+partial+orthotopic+liver%E2%80%93transplantation+%28APOLT%29+for+fulminant+hepatic+failure%3A+first+successful+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary partial orthotopic liver–transplantation (APOLT) for fulminant hepatic failure: first successful case report.</a> World J Surg. 15, 660-666 (1991).</li>
<li>Erhard, J., Lange, R., Giebler, R., Rauen, U., de Groot, H., Eigler, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterialization+of+the+portal+vein+in+orthotopic+and+auxiliary+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Arterialization of the portal vein in orthotopic and auxiliary liver transplantation.</a> Transplantation. 60, 877-879 (1995).</li>
<li>Erhard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+arterialization+of+the+portal+vein+for+acute+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with arterialization of the portal vein for acute hepatic failure.</a> Transpl Int. 11, 266-271 (1998).</li>
<li>Emond, J., Capron-Laudereau, M., Meriggi, F., Bernuau, J., Reynes, M., Houssin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extent+of+Hepatectomy+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Extent of Hepatectomy in the rat.</a> Eur Surg Res. 21, 251-259 (1989).</li>
<li>Mas, A., Rode`s, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fulminant+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Fulminant hepatic failure.</a> Lancet. 349, 1081-1085 (1997).</li>
<li>Terpstra, O. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+grafting%3A+a+new+concept+in+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver grafting: a new concept in liver transplantation.</a> The Lancet. 342, 758(1993).</li>
<li>Terpstra, O. T., Reuvers, C. B., Schalm, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+heterotopic+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Auxiliary heterotopic liver transplantation.</a> Transplantation. 45, 1003-1007 (1988).</li>
<li>Schleimer, K., Lange, R., Rauen, U., Erhard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+in+acute+liver+failure+in+the+rat+-+an+illustrated+description+of+a+new+surgical+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation in acute liver failure in the rat - an illustrated description of a new surgical approach.</a> Langenbecks Arch Surg. 384 (2), 204-208 (1999).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiologic+microcirculation+of+the+heterotopically+transplanted+rat+liver+with+portal+vein+arterialization+depending+on+optimal+stent+diameter%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Monit%22%5BJournal%5D)">Physiologic microcirculation of the heterotopically transplanted rat liver with portal vein arterialization depending on optimal stent diameter.</a> Med Sci Monit. 28 (BR140-145), (2006).</li>
<li>Hong, H. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+portal+arterialization+with+auxiliary+liver+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hiroshima+J.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Study of portal arterialization with auxiliary liver in rats.</a> Hiroshima J. Med. Sci. 40, 29-33 (1991).</li>
<li>Higgins, G. M., Anderson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+pathology+of+the+liver.+I--Restoration+of+the+liver+of+the+white+rat+following+partial+surgical+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Path%22%5BJournal%5D)">Experimental pathology of the liver. I--Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal.</a> Arch. Path. 12, 186-202 (1931).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+flow-regulated+portal+vein+arterialization+offers+a+successful+therapeutic+option+in+acute+hepatic+failure--investigations+in+heterotopic+auxiliary+rat+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with flow-regulated portal vein arterialization offers a successful therapeutic option in acute hepatic failure--investigations in heterotopic auxiliary rat liver transplantation.</a> Transpl Int. 19 (7), 581-588 (2006).</li>
<li>Lee, S., Edgington, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surg.+Forum%22%5BJournal%5D)">Liver transplantation in the rat.</a> Surg. Forum. 17, 220-222 (1966).</li>
<li>Hess, F., Willemen, A., Jerusalem, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+in+the+rat%2C+influence+of+the+condition+of+the+recipient%27s+liver+on+the+fate+of+the+graft%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation in the rat, influence of the condition of the recipient's liver on the fate of the graft.</a> Eur. Surg. Res. 9, 270-279 (1977).</li>
<li>Aguirrezabalaga, J., Arnal, F., Marini, M., Centeno, A., Fernandez-Selles, C., Rey, I., Gomez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+portal+arterialization+in+the+rat%3A+description+of+a+new+model%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with portal arterialization in the rat: description of a new model.</a> Microsurgery. 22, 21-26 (2002).</li>
<li>Palmes, D., Dietl, K. H., Drews, G., Holzen, J. P., Spiegel, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+partial+orthotopic+liver+transplantation%3A+treatment+of+acute+liver+failure+in+a+new+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary partial orthotopic liver transplantation: treatment of acute liver failure in a new rat model.</a> Langenbecks Arch Surg. (386), 534-541 (2002).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+microcirculation+of+a+liver+graft+by+controlled+portal+vein+arterialization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Improved microcirculation of a liver graft by controlled portal vein arterialization.</a> J Surg Res. 116 (2), 202-210 (2004).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+hyperperfusion+causes+disturbance+of+microcirculation+and+increased+rate+of+hepatocellular+apoptosis%3A+investigations+in+heterotopic+rat+liver+transplantation+with+portal+vein+arterialization%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Portal hyperperfusion causes disturbance of microcirculation and increased rate of hepatocellular apoptosis: investigations in heterotopic rat liver transplantation with portal vein arterialization.</a> Transplant Proc. 38 (3), 725-729 (2006).</li>
</ol>

Wszyscy autorzy zadeklarowali brak sprzecznych interesów.

Pierwszy heterotopowy pomocniczy przeszczep wątroby szczura został opisany przez Lee i wsp.16 w 1966 roku, a następnie przez Hessa. 17 Żyła wrotna przeszczepu została zespolona z żyłą wrotną biorcy. Podczas tej procedury dopływ krwi do żyły wrotnej do rodzimej wątroby jest upośledzony.
W 1991 roku Hong wykonał HALT z PVA przez tętnicę biodrową biorcy. 13 Bez regulacji przepływu krwi wystąpiły masywne przekrwienia wrotne i sinusoidalne.
<p class="jo...

Ostra niewydolność wątroby stanowi poważny problem w medycynie klinicznej, prowadząc do śmiertelności na poziomie 60-80%. 8 W przypadku ostrej niewydolności wątroby pomocnicze przeszczepienie wątroby jest obiecującą terapią alternatywną w celu zniwelowania ostrej fazy. Rodzimą wątrobę pozostawia się do regeneracji, a po regeneracji można odstawić leki immunosupresyjne. W konsekwencji przeszczep stanie się atroficzny. Jednak nadal dyskutuje się o technice operacyjnej pomocniczego przeszczepu wątroby. 1-3 W tym kontekście firma Terpstra poinformowała o braku miejsca na przeszczep, zjawisku kradzieży krwi wrotnej oraz problemie przekrwienia i drenażu żylnego. 9-10 Żyła wrotna dawcy została zespolona z boku na bok z żyłą wrotną biorcy. Spowodowało to konkurencję przepływu wrotnego między przeszczepem a natywną wątrobą oraz zakrzepicę żyły wrotnej. Większości z tych problemów technicznych można uniknąć dzięki zastosowaniu metody APOLT (ortotopowa implantacja segmentów pomocniczych). 4 Metoda ta wymaga jednak rozległych resekcji zarówno rodzimej wątroby, jak i przeszczepu. 4 W 1998 roku Erhard i jego zespół opracowali heterotopowy pomocniczy przeszczep wątroby (HALT) wykorzystujący arterializację żyły wrotnej (PVA) (Figura 1). Wnęka i żyła wrotna rodzimej wątroby są respektowane przy użyciu tej metody. Oszczędza to biorcy przed niepożądanymi skutkami ubocznymi, takimi jak zakrzepica żyły wrotnej i zjawisko kradzieży krwi wrotnej, które mogą zakłócić naturalną regenerację wątroby. Ponadto w przypadku tej metody nie są wymagane rozległe resekcje wątroby natywnej i przeszczepu, co w konsekwencji skutkuje mniejszym krwawieniem i większą pozostałą całkowitą masą miąższową wątroby do mostkowania (przeszczepu) i regeneracji (wątroba natywna). Technika ta przyniosła obiecujące początkowe wyniki kliniczne. 5-6 Celem tej pracy eksperymentalnej było opracowanie techniki HALT z arterializacją żyły wrotnej u szczura do celów badawczych (ryc. 2). We wstępnych eksperymentach nie wzięliśmy pod uwagę regulacji przepływu krwi w tętniczej żyle wrotnej, co skutkowało przekrwieniem przeszczepionego przeszczepu po reperfuzji i masywnym krwawieniem z torebki wątrobowej. 11 Od tego czasu przepływ krwi w tętniczej żyle wrotnej był regulowany przez stent o średnicy wewnętrznej 0,3 mm i długości 8 mm. Eksperymenty pilotażowe wykazały, że średnica stentu wynosząca 0,3 mm zapewnia średni przepływ krwi w tętniczej żyle wrotnej, który mieści się w górnym zakresie fizjologicznym (1,7 +/- 0,4 ml/min/g masy wątroby). 12 Nasze wyniki bez regulacji przepływu krwi korelują z wynikami Honga, który wykonał HALT z PVA przez tętnicę biodrową biorcy. 13 W jego eksperymentach bez regulacji przepływu krwi występowały masywne przekrwienia wrotne i sinusoidalne.
Celem naszego filmu jest pokazanie krok po kroku tej nowej, eksperymentalnej techniki chirurgicznej u szczura. W dłuższej perspektywie proponowana technika może być stosowana w badaniach nad regeneracją wątroby i konkurencją międzywątrobową oraz tętnicą żyły wrotnej, hiperperfuzją żyły wrotnej i regulacją przepływu krwi wrotnej.

<table><tbody><tr><td>Pleciony jedwab 7-0&nbsp;</td><td>Produkty Ethicon</td><td>892100</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 3-0</td><td>Produkty Ethicon</td><td>J285G</td><td></td></tr><tr><td>Produkty Vicryl 4-0</td><td>Produkty Ethicon</td><td>J284G</td><td></td></tr><tr><td>Produkty Ethilon 8-0</td><td>Produkty Ethicon</td><td>1714G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 10-0</td><td>Produkty Ethicon</td><td>7770G</td><td></td></tr><tr><td>Bezpieczeństwo Vasofix 14G</td><td>B Buty Braun</td><td>2758853</td><td></td></tr><tr><td>Bezpieczeństwo Vasofix 20G</td><td>B</td><td></td> Cewnik poliuretanowy Braun 2758818 <td></td></tr><tr><td>2 francuskie (0,012 cala / 0,3 mm ID x 0,025 cala / 0,6 mm średnicy) x 24 cale / 60 cm</td><td>Dostęp do technologii oddział Norfolk Medical, Inc., Illinois, USA</td><td>CNC-2P</td><td></td></tr><tr><td>HTK solution, Custodiol</td><td>Dr. Franz K&ouml; hler Chemie GmbH, Alsbach-H&auml; hnlein, Niemcy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Izofluoran 5 %</td><td></td><td></td><td>Dowolny generyk</td></tr><tr><td>Heparyna</td><td></td><td></td><td>Dowolny generyk</td></tr><tr><td>0,9% sól fizjologiczna</td><td></td><td></td><td>Dowolny rodzaj:</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td></td><td></td><td>Dowolna generyka</td></tr></tbody></table>

heterotopowe pomocnicze przeszczepienie wątroby szczura z tętnicą żyły wrotnej o regulowanym przepływie w ostrej niewydolności wątroby

Heterotopic Auxiliary Rat Liver Transplantation With Flow-regulated Portal Vein Arterialization in Acute Hepatic Failure

W przypadku ostrej niewydolności wątroby pomocnicze przeszczepienie wątroby jest interesującym alternatywnym podejściem. Celem jest zapewnienie tymczasowego wsparcia do czasu regeneracji niewydolnej rodzimej wątroby. 1-3 Metoda APOLT, czyli ortotopowe wszczepianie segmentów pomocniczych, pozwala uniknąć większości problemów technicznych. Jednak ta metoda wymaga rozległych resekcji zarówno rodzimej wątroby, jak i przeszczepu. 4 W 1998 roku Erhard opracował heterotopowy pomocniczy przeszczep wątroby (HALT) z wykorzystaniem tętnicy żyły wrotnej (PVA) (ryc. 1). Technika ta przyniosła obiecujące początkowe wyniki kliniczne. 5-6 Opracowaliśmy technikę halt z regulowanym przepływem PVA u szczura, aby zbadać wpływ PVA o regulowanym przepływie na morfologię i funkcję przeszczepu (ryc. 2).
Przeszczep wątroby zredukowany do 30 % swojego pierwotnego rozmiaru, został heterotopowo wszczepiony w prawą okolicę nerkową biorcy po eksplantacji prawej nerki. Żyła podwątrobowa przeszczepu została zespolona z żyłą podwątrobową biorcy. Arterializację żyły wrotnej dawcy przeprowadzono przez prawą tętnicę nerkową biorcy techniką stentu. Regulację przepływu krwi w tętniczej żyle wrotnej uzyskano za pomocą stentu o średnicy wewnętrznej 0,3 mm. Trzewny pień przeszczepu został zespolony z aortą biorcy od końca do boku, a przewód żółciowy został wszczepiony do dwunastnicy. Wykonano subtotalną resekcję rodzimej wątroby w celu wywołania ostrej niewydolności wątroby. 7
W ten sposób wykonano 112 przeszczepów. Wskaźnik przeżycia okołooperacyjnego wynosił 90%, a przeżycia 6-tygodniowego 80%. Sześć tygodni po operacji natywna wątroba zregenerowała się, wykazując wzrost masy ciała z 2,3±0,8 g do 9,8±1 g. W tym czasie masa przeszczepu zmniejszyła się z 3,3±0,8 g do 2,3±0,8 g.
Udało nam się uzyskać obiecujące długoterminowe wyniki pod względem morfologii i funkcji przeszczepu. HALT z PVA o regulowanym przepływie niezawodnie mostkuje ostrą niewydolność wątroby do czasu regeneracji rodzimej wątroby.

Średni czas trwania transplantacji wynosił około 150 min. Czas niedokrwienia w niskiej temperaturze wynosił 64 +/- 7 min, a czas niedokrwienia w temperaturze pokojowej był krótszy niż 25 min.
Wskaźnik przeżywalności w okresie okołooperacyjnym wyniósł 90%, a wskaźnik przeżywalności po 6 tygodniach wyniósł 80%. 20% ubytków było spowodowane zapaleniem otrzewnej w wyniku przemieszczenia stentu i wycieku żółci (cztery zwierzęta) podczas pierwszego tygodnia po operacji oraz zapaleniem płuc, ropniem ...

Pomocniczy przeszczep wątroby zapewnia tymczasowe wsparcie w ostrej niewydolności wątroby, aż do regeneracji niewydolnej wątroby. Heterotopowy pomocniczy przeszczep wątroby (HALT) z tętnicą żyły wrotnej (PVA) zapewnia wystarczającą czynność wątroby. Opracowaliśmy analogiczną technikę na szczurach, aby zbadać wpływ tętnicy żyły wrotnej na morfologię i funkcję przeszczepu.

Heterotopowe pomocnicze przeszczepienie wątroby szczura z tętnicą żyły wrotnej o regulowanym przepływie w ostrej niewydolności wątroby

In acute hepatic failure auxiliary liver transplantation is an interesting alternative approach. The aim is to provide a temporary support until the ...

Ostra niewydolność wątroby stanowi poważny problem w medycynie klinicznej, prowadząc do śmiertelności na poziomie od 60 do 80% w przypadku ostrej niewydolności wątroby. Pomocniczy przeszczep wątroby jest obiecującą terapią alternatywną. Po regeneracji rodzimej wątroby można zaprzestać immunosupresji, a przeszczep wątroby można usunąć lub pozostawić do zaniku.Technika operacyjna w przypadku pomoczego przeszczepienia wątroby pozostaje jednak przedmiotem kontrowersji. Metoda APOL, polegająca na ortotopowym wszczepieniu segmentów pomocniczych, pozwala uniknąć większości potencjalnych problemów technicznych. Metoda ta wymaga jednak rozległych resekcji zarówno wątroby natywnej, jak i przeszczepu.W 1998 roku Erhart i jego zespół zainicjowali heterotopiczną pomocniczą transplantację wątroby, zwaną halt. Dzięki zastosowaniu tętniczego dostępu do żyły wrotnej, zwanego PVA, technika ta wykazała obiecujące wstępne wyniki kliniczne. Opracowaliśmy technikę halt z regulowanym przepływem tętnicznym w żyle wrotnej u szczura do celów badawczych. Niniejsze wideo szczegółowo ilustruje tę nową technikę eksperymentalną. Operację przeprowadzono na 24 syngenicznych samcach szczurów szczepu Louis o masie od 250 do 350 g.Operacje u dawcy i biorcy przeprowadzono w znieczuleniu wziewnym. Znieczulenie ogólne zwierząt wprowadzono za pomocą izofluranu w pudełku z pleksiglasu podłączonym do aparatu do znieczulania przy przepływie tlenu wynoszącym 1 l/min. W parowniku zastosowano stężenie izofluranu wynoszące 5%.Znieczulenie utrzymywano na poziomie 1,5%. Uzyskano zgodę lokalnej komisji etycznej na wszystkie eksperymenty, które zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi dotyczącymi ochrony zwierząt. W trakcie następującej operacji żyła wrotna zostaje zarterializowana poprzez prawą tętnicę nerkową.Przepływ krwi w zarterializowanej żyle wrotnej jest regulowany za pomocą stentu o średnicy wewnętrznej 0,3 mm i długości 8 mm. Eksperymenty pilotażowe wykazały, że średnica stentu wynosząca 0,3 mm zapewnia średni przepływ krwi w zarterializowanej żyle wrotnej, który mieści się w górnym zakresie fizjologicznym.Mikrokrążenie wątroby jest wizualizowane za pomocą obrazowania OPS, techniki spektroskopii refleksyjnej, która umożliwia obserwację mikrokrążenia wątroby in vivo w czasie rzeczywistym. Bez użycia środków kontrastowych, przy zanurzeniu w soli fizjologicznej, sondę delikatnie umieszcza się na powierzchni prawego płata wątroby. Ważne jest, aby w tym miejscu nie uciskać miąższu wątroby.Operacja dawcy jest prezentowana najpierw po laparotomii pośrodkowej. Lewy płat boczny i płat pośrodkowy przeszczepu są resekowane zgodnie z opisem Higginsa. Tutaj widoczne jest przygotowanie więzadła wątrobowo-dwunastniczego.W pierwszej kolejności podwiązuje się przewód żółciowy, aby wywołać zastój i rozszerzenie małych przewodów żółciowych. Żyłę i tętnicę dwunastniczo-żołądkową podwiązuje się i przecina. Następnie izoluje się pień trzewny, wspólną tętnicę wątrobową, lewą tętnicę żołądkową oraz tętnicę śledzionową.Tętnica żołądkowa lewa oraz tętnica śledzionowa zostają przecięte. Tutaj widoczny jest pień CIC, a tutaj wspólna tętnica wątrobowa. Przecięto przekrwiony przewód żółciowy i wprowadzono do niego stent o rozmiarze 20 gauge.Pozycjonowanie stentu musi zapewniać drenaż całego systemu dróg żółciowych wątrobowych. Przewód żółciowy zostaje przecięty dystalnie względem stentu. Podwątrobowy odcinek żyły wrotnej zostaje wyizolowany bezpośrednio powyżej prawej żyły nerkowej.Tutaj widoczny jest organ po przygotowaniu, po podwiązaniu aorty powyżej pnia trzewnego. Żyła wrotna zostaje zaklemowana i nacięta. Następnie wprowadza się cewnik perfuzyjny i przeprowadza perfuzję z użyciem 30 ml roztworu histydyny, tryptofanu i glukozy.Przeponę oraz nadwątrobową żyłę główną przecina się, aby umożliwić wypływ krwi. Pień żylny z łatą aortalną zostaje wycięty i przepłukany roztworem histydyno-tryptofano-ketoglutaranu. Podwątrobową żyłę główną przecina się bezpośrednio powyżej prawej żyły nerkowej.Następnie w żyle wrotnej umieszcza się stent o średnicy 0,3 mm i mocuje go za pomocą podwiązki. Żyłę wrotną przecina się dystalnie względem stentu. Tutaj widoczny jest przewód żółciowy, żyła wrotna, pień trzewny oraz żyła główna dolna pod wątrobą.Po podwiązaniu żyły głównej dolnej powyżej wątroby, zostaje ona przecięta wraz z mankietem przepony. Przeszczep zostaje pobrany i przechowywany w roztworze histydyny, tryptofanu i ketoglutaranu w temperaturze 4°C w plastikowej torebce na lodzie. Następnie w żyle głównej dolnej poniżej wątroby zostają założone szwy. W dalszej części zaprezentowany zostanie przebieg operacji u biorcy.Po laparotomii i przygotowaniu pola operacyjnego, w pierwszej kolejności izoluje się żyłę główną dolną poniżej wątroby oraz prawą tętnicę nerkową. Następnie moczowód zostaje podwiązany i przecięty. Po zaklemowaniu prawej tętnicy nerkowej u jej ujścia, podwiązuje się prawą żyłę nerkową.Następnie po przecięciu obu naczyń nerkowych przeprowadza się nefrektomię. W dalszej kolejności, po założeniu zacisków proksymalnego i dystalnego na żyłę główną dolną poniżej wątroby, prawą tętnicę nerkową skraca się i płucze roztworem soli fizjologicznej z heparyną. Prawą żyłę nerkową przecina się proksymalnie względem podwiązania.W ten sposób w żyłach wątrobowych (cable vein) poniżej wątroby tworzy się owalny otwór. Przeszczep jest umieszczany poniżej rodzimej wątroby. Żyła wątrobowa dawcy poniżej wątroby jest anastomozowana koniec-do-boku z żyłą wątrobową biorcy przy użyciu ciągłego szwu z nici etylenowej o grubości 8-0.Po wypłukaniu roztworem soli fizjologicznej z heparyną, stent znajdujący się w żyle wrotnej zostaje wprowadzony do prawej tętnicy nerkowej. Żyła wrotna i tętnica nerkowa zostają połączone za pomocą dwóch szwów. Użycie stentu o średnicy wewnętrznej 0,3 mm i długości 8 mm umożliwia wykonanie anastomozy tętniczo-żylnej ze zestandaryzowanym przepływem oraz regulowanymi szybkościami dopływu.Stent łączący zostaje przymocowany w tętnicy nerkowej za pomocą ligatury, aby umożliwić reperfuzję. Najpierw zdejmuje się zacisk tętniczy, a następnie oba zaciski żylne. Obecnie widoczna jest mikrocyrkulacja w momencie rozpoczęcia reperfuzji, która zaczyna się od naczyń międzypłacikowych, przebiega wzdłuż sinusoid i dociera do żyły środkowej płacika wątrobowego.Widoczny jest teraz reperfundowany przeszczep, zarterializowana żyła wrotna oraz przewód żółciowy. Aorta podnerbowa zostaje przygotowana, a następnie zaklemowana i nacięta. Wykonuje się anastomozę koniec-bok między aortą a pniem trzewnym przy użyciu łaty aortalnej, stosując szew ciągły z nici etylenowej 10 O.Po założeniu szwu typu woreczek, w ścianie dwunastnicy wykonuje się niewielkie nacięcie. Następnie stentowany przewód żółciowy jest wprowadzany do dwunastnicy, a szew typu woreczek zostaje zaciśnięty. Na koniec dwunastnicę i przewód żółciowy mocno ze sobą zszywa się za pomocą dwóch szwów.Tutaj widać reperfundowany przeszczep oraz natywną wątrobę, która została poddana resekcji subtotalnej w celu symulacji ostrej niewydolności wątroby. Zwierzętom po operacji podawano buprenorfinę w zastrzykach podskórnych co 8 do 12 godzin przez dwa dni.Wskaźnik przeżywalności okołooperacyjnej wyniósł 90%, a wskaźnik przeżywalności po sześciu tygodniach wyniósł 80%. W ciągu pierwszego tygodnia po operacji cztery szczury padły z powodu zapalenia otrzewnej wywołanego przemieszczeniem stentu i wyciekiem żółci. Ponadto siedem szczurów padło z powodu zapalenia płuc, ropnia wewnątrzbrzusznego lub niedrożności jelit. Zwierzęta, które przeżyły, pozostawały w doskonałym stanie ogólnym.Sześć tygodni po operacji parametry syntezy wątrobowej mieściły się w normie. Tutaj widzimy naukowców sześć tygodni po heterotopicznym pomocniczym przeszczepie wątroby szczura z połączeniem tętniczym żyły wrotnej. Sześć tygodni po operacji natywna wątroba uległa regeneracji, co objawiło się wzrostem masy z 2,3 ± 0,8 g do 9,8 ± 1 g.W tym czasie GRAT był zanikowy, a masa wątroby zmniejszyła się z 3,3 ± 0,8 g do 2,3 ± 0,8 g. Całkowita masa obu wątrób mieściła się w fizjologicznym stosunku masy wątroby do masy ciała w barwieniu histopatologicznym hematoksyliną i eozyną w szóstym tygodniu po przerwaniu. Obserwowano prawidłowe hepatocyty, bez obrzęku i degeneracji tłuszczowej.Wszystkie preparaty wykazały lekką proliferację dróg żółciowych oraz cholangitis wynikającą z formowania się osadu żółciowego. Tylko w dwóch preparatach zaobserwowano martwicę hepatocytów o niskim stopniu w obszarach CTU. Zastosowanie stentu o średnicy wewnętrznej 0,3 mm i długości ośmiu mm zapewnia średni przepływ krwi w żyłce wrotnej po reperfuzji zarterializowanej żyły wrotnej, który mieści się w górnym zakresie fizjologicznym.Drenaż dróg żółciowych jest najsłabszym ogniwem w transplantacji wątroby. W przypadku przeszczepiania wątroby u szczurów biorcy często umierają w pierwszych dniach pooperacyjnych z powodu wycieku żółci i zapalenia otrzewnej. Wykonujemy koloducho-stomię z użyciem stentu, szwu pierścieniowego oraz dwóch dodatkowych szwów, które zabezpieczają połączenie przed nieszczelnością i rozłączeniem.Dzięki zastosowaniu tej techniki odsetek powikłań dróg żółciowych został zredukowany do 4%. W niniejszym badaniu przeprowadzono subtotalną resekcję rodzimej wątroby. Metody tej, opisanej po raz pierwszy przez Amonda, używamy w celu wywołania ostrej niewydolności wątroby. W przeciwieństwie do stosowania czynników hepatotoksycznych, metoda ta jest ustandaryzowana i nie wykazuje działań niepożądanych w obrębie innych układów organów ani przeszczepu.W przeciwieństwie do ortotopowego przeszczepienia wątroby, nie występuje tutaj końcowa faza hepatyczna. Podczas heterotopowego przeszczepienia wątroby zabieg Anas można przeprowadzić bez presji czasu. Co więcej, w pozycji heterotopowej nie występuje utrudnienie wynikające z ruchu przepony.Ponadto żyła wrotna biorcy nie jest zakleszczana, co pozwala uniknąć zastoju żylnego w jelicie cienkim, śledzionie, trzustce i żołądku. Dzięki tej technice udało nam się uzyskać obiecujące długoterminowe wyniki w zakresie morfologii i funkcji przeszczepu w heterotopicznym pomocniczym przeszczepieniu wątroby szczura z regulowanym przepływem w żyle wrotnej. Przeszczepienie tętnicze jest innowacyjną techniką, która wiąże się z niewielką liczbą komplikacji i jest łatwa do opanowania.Technika ta jest odpowiednia do badania wpływu nadperfuzji żyły wrotnej i tętnic wątrobowych oraz regulacji przepływu krwi na funkcję i morfologię mikrokrążenia wątrobowego. Model ten umożliwia przyszłe badania nad regeneracją wątroby w warunkach konkurencji międzywątrobowej.

heterotopic-auxiliary-rat-liver-transplantation-with-flow-regulated

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Przeszczepienie wątroby szczura pomocniczej z heterotopowym przepływem krwi z tętnicy w przypadku ostrego niewydolenia wątroby

Przedstawiamy łatwą do wdrożenia modyfikację klasycznej techniki dwóch mankietów stosowanej w ortotopowym przeszczepieniu wątroby u szczura.

Ortotopowa transplantacja wątroby u szczurów

Ortotopowe przeszczepienie wątroby u szczurów jest niezbędnym modelem eksperymentalnym w badaniach biomedycznych. W niniejszym materiale przedstawiamy procedury chirurgiczne ortotopowego przeszczepienia wątroby szczura z rekonstrukcją tętnicy wątrobowej z wykorzystaniem 50% częściowego graftu.

Procedury chirurgiczne w szczurzym modelu częściowego ortotopowego przeszczepu wątroby z rekonstrukcją tętnicy wątrobowej

Eksperymentalne badania na zwierzętach odgrywają kluczową rolę w rozwoju klinicznej praktyki transplantacyjnej. Ortotopowy model przeszczepiania wątroby u świń (OLTx) jest bardzo zbliżony do warunków panujących u ludzi i jest często stosowany w badaniach klinicznych. Poniższy protokół zawiera wszystkie informacje dotyczące wiarygodnego modelu OLTx świni przy użyciu aktywnej zastawki porto-caval-szyjnej.

Technika pozyskiwania wątroby świń i przeszczepu ortotopowego z wykorzystaniem aktywnej zastawki Porto-Caval

Opisujemy nową technikę heterotopowego przeszczepu płuco-serce w jamie brzusznej (HAHLT) u szczurów. Konfiguracja przeszczepu powoduje częściowo załadowane krążenie przeszczepu, co pozwala na bezpośrednią ocenę funkcjonalną. Model ten może być stosowany do ostrych lub przewlekłych badań funkcji i statusu immunologicznego przeszczepionego przeszczepu.

Szczur Heterotopowe serce brzuszne/przeszczep pojedynczego płuca w konfiguracji z obciążeniem objętościowym

Tutaj przedstawiono protokół polegający na ponownym przeszczepieniu wątroby szczurowi. W szczególności 70% wątroby wycięto in vivo przy użyciu zaktualizowanej techniki hepatektomii zorientowanej na naczynia. Tętnicę wątrobową zrekonstruowano w sposób end-to-side. Technika mankietu została zmodyfikowana w celu skrócenia czasu zespolenia żyły podwątrobowej głównej.

Ponownie zarteryalizowany częściowy przeszczep wątroby szczura z 70% hepatektomią in vivo zorientowaną na naczynia

Rekonstrukcja żyły głównej nadwątrobowej (SHVC) pozostaje trudnym krokiem w ortotopowym przeszczepie wątroby u szczurów. W tym artykule przedstawiamy krok po kroku protokół rekonstrukcji SHVC u szczurów przy użyciu nowatorskiej techniki zespolenia magnetycznego.

Szczurzy model ortotopowego przeszczepu wątroby z wykorzystaniem nowatorskiej techniki zespolenia magnetycznego do rekonstrukcji żyły głównej nadwątrobowej

Celem tego badania jest modyfikacja modelu ortotopowego przeszczepu wątroby u szczurów, aby lepiej reprezentowała przeszczep wątroby u człowieka i poprawiła przeżywalność biorców. Przedstawiona metoda przywraca dopływ tętniczy wątrobowej poprzez połączenie wspólnej tętnicy wątrobowej wątroby dawcy z właściwą tętnicą wątrobową biorcy.

Zmniejszone powikłania po ponownym połączeniu tętnic w szczurzym modelu ortotopowego przeszczepu wątroby

Ten artykuł zawiera szczegółowy opis, jak zbudować zwierzęcy model fazy anhepatycznej (niedokrwienie wątroby) u szczurów, aby ułatwić podstawowe badania nad uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym po przeszczepie wątroby.

Uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne narządów poprzez symulację zmian hemodynamicznych w modelu przeszczepu wątroby szczura

Opisany tutaj protokół heterotopowego pomocniczego przeszczepu wątroby u szczurów stanowi praktyczne narzędzie badawcze do badania mechanizmów odrzucania alloprzeszczepu wątrobowego. Model ten pomaga złagodzić przeszkody chirurgiczne i stres zwierząt związany z ortotopowym przeszczepem wątroby u szczurów.

Heterotopowy pomocniczy model przeszczepu szczura całej wątroby z wykorzystaniem hepaticoureterostomii do badań odrzucenia przeszczepu allogenicznego

W manuskrypcie opisano kroki wymagane do przeprowadzenia heterotopowego przeszczepu serca u myszy.

Mysia heterotopowa technika przeszczepu serca

Poznaj technikę heterotopowego pomocniczego przeszczepienia wątroby szczura z tętnicą żyły wrotnej o regulowanym przepływie w ostrej niewydolności wątroby. Metoda ta umożliwia badanie mikrokrążenia wątrobowego i regeneracji.

Heterotopowe pomocnicze przeszczepienie wątroby szczura z tętnicą żyły wrotnej o regulowanym przepływie w ostrej niewydolności wątroby (Wideo) | JoVE Journal

Heterotopowe pomocnicze przeszczepienie wątroby szczura z tętnicą żyły wrotnej o regulowanym przepływie w ostrej niewydolności wątroby

Przeglądaj więcej filmów