Serotypowanie torebki Streptococcus pneumoniae za pomocą reakcji Quellung

Ogólnym celem tej procedury jest przeprowadzenie stereotypizacji torebki u paciorkowców lub pneumokoków za pomocą reakcji tłumienia. Osiąga się to poprzez pierwsze zaszczepienie bulionu naparu sercowego świeżą, czystą kulturą pneumokoków przez noc. W drugim etapie kropla inokulum jest przenoszona na szklane szkiełko mikroskopowe.

Następnie na szkiełko dodaje się surowicę przeciw w równej objętości. W ostatnim etapie obie krople miesza się, a na zawiesinę nakłada się szkiełko nakrywkowe. Ostatecznie zawiesinę można oglądać w kontraście fazowym, aby zaobserwować pozytywną lub negatywną reakcję płuc

Metoda ta demonstruje złoty standard metody pneumokoków. Metoda jest prosta, łatwa do wykonania i łatwa do interpretacji. Wizualna demonstracja tej metody jest ważna, ponieważ osoby początkujące w tej technice mogą mieć trudności z rozpoznaniem, jaka jest odpowiednia gęstość komórek do wykonania testu qualm.

Zacznij od użycia sterylnej jednorazowej pętli o pojemności jednego mikrolitra, aby uzyskać mały przeciąg świeżej, czystej kultury pneumokoków wyhodowanej przez noc wyhodowanej na stałej, nieselektywnej płytce z agarem z krwią końską, zaszczepić pneumokoki w 100 mikrolitrach bulionu do naparu serca. Zawiesina powinna wydawać się widocznie mętna i delikatnie poruszyć probówkę, aby emulgować roztwór komórkowy. Użyj nowej pętli o pojemności jednego mikrolitra, aby przenieść kroplę inokulum na szklany mikroskop.

Następnie przesuń suwak, umieść małą okrągłą szkiełko nakrywkowe na zawieszeniu i sprawdź gęstość zawieszenia pod wpływem kontrastu fazowego w powiększeniu 400. Jeśli inokulum jest zbyt ciężkie, rozcieńczyć zawiesinę komórek większą ilością bulionu i delikatnie wymieszać komórki ponownie, jeśli inokulum jest zbyt lekkie. Na przykład, jeśli widocznych jest mniej niż 50 komórek, dodaj więcej bakterii do zawiesiny komórkowej i delikatnie wymieszaj ponownie.

Z doświadczeniem. Gęstość zawiesiny komórek można ocenić, potrząsając i trzymając zawiesinę do światła, gdzie powinna wydawać się widocznie mętna. Oglądany pod mikroskopem roztwór komórkowy powinien być mniej więcej tak gęsty.

Po osiągnięciu optymalnego rozcieńczenia komórek bakteryjnych przenieś około jednego mikrolitra inokulum na szklany mikroskop. Przesuń dalej. Korzystając z nowej pętli, dodaj równą objętość temperatury pokojowej.

Surowicy antysurowicy na szkiełko i dobrze wymieszać obie krople. Za pomocą pętli natychmiast umieść małą szkiełko nakrywkowe na zawieszeniu, uważając, aby nie dotknąć kropli kleszkami. Następnie zobacz zawieszenie pod wpływem kontrastu fazowego, jak pokazano poniżej.

Ujemną reakcję płuc obserwuje się, gdy obserwuje się niewielki lub żaden obrzęk komórek pneumokoków. Podobnie jak w przypadku kontroli negatywnej, zawiesina komórek pneumokokowych bez dodatku surowic odpornościowych. Dodatnia reakcja płuc zachodzi, gdy przeciwciało specyficzne dla typu wiąże się z torebką pneumokoków, prowadząc do zmiany jej współczynnika załamania światła.

Patrząc w świetle kontrastu fazowego, bakterie wydają się spuchnięte i bardziej widoczne. Nie zapominaj, że kiedy wykonujesz tę procedurę, tak naprawdę pracujesz z żywymi mikroorganizmami. Z tego powodu należy zachować ostrożność, aby przestrzegać dobrych praktyk laboratoryjnych, nosić odzież ochronną, odpowiedni sprzęt laboratoryjny i bezpiecznie zutylizować cały sprzęt i odczynniki pod koniec procesu.

Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w około 10 minut, jeśli jest wykonywana prawidłowo. Po zapoznaniu się z tą procedurą powinieneś mieć dobre pojęcie o tym, jak serotypować pneumokoki za pomocą reakcji qua płucnej. Technika ta jest ważna dla zrozumienia epidemiologii pneumokoków, zarówno w nosicielstwie nosowo-gardłowym, jak i w chorobie inwazyjnej.