Name: Izolacja nowotworowych komórek macierzystych z próbek ludzkiego raka prostaty (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-14T18:32:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Naucz się izolować nowotworowe komórki macierzyste z ludzkiego raka prostaty przy użyciu FACS. Ta metoda umożliwia badaczom charakteryzację molekularną i funkcjonalną komórek CSC in vitro.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Fundację Rodziny Hariri i Fundację TJ Martella.

1. Pobieranie i przetwarzanie tkanki ludzkiego raka prostaty z próbek chirurgicznych
<ol>
	<li>Przygotować dwie stożkowe probówki polistyrenowe o pojemności 50 ml zawierające 15 ml pożywki hodowlanej Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 uzupełnionej 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS) i 1% penicyliny/streptomycyny.</li>
	<li>Personel patomorfologii pobiera próbki pierwotnego i przerzutowego raka prostaty odpowiednio z próbek prostatektomii i chirurgii paliatywnej, zgodnie z protokołem zatwierdzonym przez Instytucjonalną Komisję Rewizyjną. Próbki przerzutowe można uzyskać m.in. z wycięć węzłów chłonnych podczas pierwotnej operacji, kręgów podczas paliatywnych zabiegów chirurgicznych, takich jak dekompresja rdzenia kręgowego, oraz płuc podczas diagnostycznego usuwania pojedynczych zmian przerzutowych.
	<ol>
		<li>Nadmiar tkanki luzem, która nie jest potrzebna do diagnostyki klinicznej, należy pobrać do pierwszej probówki stożkowej z polistyrenu o pojemności 50 ml z kroku 1.1 i natychmiast przechowywać w temperaturze 4 °C. Pobrana tkanka powinna mieć co najmniej 4-5cm2 powierzchni i 1-2 cm grubości.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Personel laboratoryjny przetwarza tkanki masowe pobrane ze służby patomorfologicznej w ramach przygotowania do badania histologicznego i wytwarzania zawiesin komórkowych.
	<ol>
		<li>Przetwarzanie tkanek masowych nie powinno trwać dłużej niż 24 godziny od resekcji chirurgicznej, aby zagwarantować maksymalną żywotność komórek.</li>
		<li>Pracując w komorze bezpieczeństwa biologicznego ze sterylnym skalpelem i kleszczami, należy pobrać poziome odcinki tkanek o grubości 2-4 mm z makroskopowych guzków nowotworowych. Natychmiast umieść skrawki w drugiej stożkowej tubie polistyrenowej o pojemności 50 ml z kroku 1.1.</li>
		<li>Gdy guzki makroskopowe nie są uwidocznione z próbek prostatektomii, należy pobrać losowe poziome odcinki tkanek o grubości 2-4 mm z tylnych płatów i strefy przejściowej.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Oddziel część tkanki chirurgicznej za pomocą sterylnego skalpela i kleszczy i utrwal ją w 10% formalinie przed wytworzeniem zawiesin komórkowych. Zarchiwizuj i przeanalizuj ten materiał histologicznie, aby potwierdzić obecność tkanki raka prostaty.</li>
</ol>
2. Generowanie zawiesin komórkowych z odcinków tkanek
<ol>
	<li>Pracując w sterylnej komorze bezpieczeństwa biologicznego, przenieś wycinek tkanki do naczynia hodowlanego o wymiarach 60 x 15 mm zawierającego 1 ml sterylnego soli fizjologicznej buforowanej 1x fosforanem (PBS).
	<ol>
		<li>Próbkę należy mechanicznie rozcierać za pomocą sterylnego skalpela i kleszczy.</li>
		<li>W tym protokole nie ma trawienia enzymatycznego.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przenieść 1 ml zawiesiny do sterylnej probówki stożkowej o pojemności 50 ml.
	<ol>
		<li>Dodać 1 ml do naczynia hodowlanego i powtarzać etap rozcierania, aż do całkowitego rozdzielenia części tkanki, zwykle 3-4 razy.</li>
		<li>Powtarzaj tę procedurę kolejno, aż wszystkie odcinki tkanek zostaną oddzielone.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zawiesić zawartość probówki stożkowej z polistyrenu o pojemności 50 ml za pomocą pipety serologicznej o pojemności 5 ml i wirować z maksymalną prędkością (około 3 200 obr./min) przez 1 min.</li>
	<li>Przefiltruj powstałą zawiesinę przez sitko do komórek o średnicy 35 μm i zbierz do drugiej sterylnej probówki stożkowej o pojemności 50 ml z polistyrenu.</li>
	<li>Wytwarzać osad przez odwirowanie przy 450 x g przez 10 minut.</li>
	<li>Odrzucić supernatant, ponownie zawiesić osad z 5 ml buforu do lizy czerwonych krwinek i inkubować roztwór przez 5 minut w temperaturze pokojowej krwinek. Usunąć bufor do lizy krwinek czerwonych przez odwirowanie przez odwirowanie przez 5 minut przy 450 x g w temperaturze pokojowej.</li>
	<li>Odrzucić supernatant, ponownie zawiesić osad w 1x PBS uzupełnionym 5% FBS i określić ilościowo liczbę żywotnych (trypanowo-ujemnych) komórek za pomocą hemocytometru lub automatycznego licznika komórek. Wytworzyć zawiesinę 1x106 komórek/ml i przechowywać ją na lodzie nie dłużej niż 1 godzinę.
	<ol>
		<li>Żywotność i wydajność komórek może się znacznie różnić w zależności od próbki guza. W warunkach prostatektomii żywotność może wynosić od 45 do 70%, a pięć poziomych odcinków tkanek o grubości 2-4 mm z makroskopowego guzka guza może dać około 3x106 żywotnych komórek.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Barwienie komórek przeciwciałami dla FACS
<ol>
	<li>Oznacz pięć stożkowych probówek polistyrenowych o pojemności 15 ml, jak pokazano poniżej. Użyj znakowania antygenu CD45 i CD31, aby wykluczyć odpowiednio elementy hematopoetyczne i śródbłonkowe.
	<ol>
		<li>Niepoplamione</li>
		<li>IgG2aκ-PE + IgG1κ-FITC</li>
		<li>HLAI-PE + IgG1κ-FITC</li>
		<li>IgG2aκ-PE + CD31-FITC + CD45-FITC</li>
		<li>HLAI-PE + CD45-FITC + CD31-FITC</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Rozprowadzić ilościowo oznaczoną zawiesinę komórek z poprzedniej sekcji (krok 2.7) do pięciu probówek w kroku 3.1. Dodać przeciwciała w rozcieńczeniu 1:250 i inkubować zawiesiny komórkowe na lodzie przez 30 minut.</li>
	<li>Odwirować komórki w temperaturze 450 x g przez 3 minuty w temperaturze 4 °C i odrzucić supernatanty.</li>
	<li>Umyć komórki, ponownie zawieszając każdą granulkę sterylnym 1x PBS uzupełnionym 10% FBS, a następnie odwirować przy 450 x g przez 3 minuty w temperaturze 4 °C.</li>
	<li>Zawiesić komórki w 1 ml roztworze 1x PBS zawierającym 4',6-diamidyno-2-fenyloindol (DAPI) w stężeniu 10 μg/ml.</li>
	<li>Przefiltruj końcowy roztwór przez nasadki sitka 35 μm do rurek polistyrenowych o wymiarach 12 mm x 75 mm.</li>
</ol>
4. Izolacja CSC prostaty przez FACS
<ol>
	<li>Do sortowania komórek użyj cytometru przepływowego.</li>
	<li>Ustaw kontrolki kompensacji za pomocą komórek z probówek #1, #2, #3 i #4.</li>
	<li>Twórz bramki, które wykluczają zanieczyszczenia i skupiska komórek, korzystając z parametrów rozproszenia do przodu i z boku.</li>
	<li>Ustaw bramki FITC i PE za pomocą zawieszeń odpowiednio z rury #3 i rury #4.</li>
	<li>Bramka żywotnych komórek (DAPI-ujemnych) wykorzystujących pacyficzny kanał blue-A.</li>
	<li>Za pomocą probówki #5 odrzuć komórki CD31-dodatnie i CD45-dodatnie i zbierz populacje HLAI-ujemne i HLAI-dodatnie do sterylnych 15-milimetrowych probówek stożkowych z polistyrenu zawierających 2 ml RPMI uzupełnionych 10% FBS.</li>
	<li>Odwirować posortowane zawiesiny komórek przy 450 x g przez 5 minut, a następnie ponownie zawiesić granulki w 200-500 μl RPMI uzupełnionym 10% FBS.</li>
	<li>Określ ilościowo żywotne (trypanowo-ujemne) komórki za pomocą hemocytometru lub automatycznego licznika komórek.</li>
</ol>

<ol><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cancer%3A+the+next+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li>
<li>Magee, J. A., Piskounova, E., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+impact%2C+heterogeneity%2C+and+uncertainty%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: impact, heterogeneity, and uncertainty.</a> Cancer Cell. 21, 283-296 (2012).</li>
<li>Nguyen, L. V., Vanner, R., Dirks, P., Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+an+evolving+concept%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: an evolving concept.</a> Nat. Rev. Cancer. 12, 133-143 (2012).</li>
<li>Valent, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cell+definitions+and+terminology%3A+the+devil+is+in+the+details%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cell definitions and terminology: the devil is in the details.</a> Nat. Rev. Cancer. 12, 767-775 (2012).</li>
<li>Visvader, J. E., Lindeman, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+current+status+and+evolving+complexities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: current status and evolving complexities.</a> Cell Stem Cell. 10, 717-728 (2012).</li>
<li>Lapidot, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367, 645-648 (1994).</li>
<li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 3983-3988 (2003).</li>
<li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432, 396-401 (2004).</li>
<li>Collins, A. T., Berry, P. A., Hyde, C., Stower, M. J., Maitland, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+prostate+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic prostate cancer stem cells.</a> Cancer Res. 65, 10946-10951 (2005).</li>
<li>Domingo-Domenech, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+acquired+docetaxel+resistance+in+prostate+cancer+through+depletion+of+notch-+and+hedgehog-dependent+tumor-initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Suppression of acquired docetaxel resistance in prostate cancer through depletion of notch- and hedgehog-dependent tumor-initiating cells.</a> Cancer Cell. 22, 373-388 (2012).</li>
<li>Patrawala, L., Calhoun-Davis, T., Schneider-Broussard, R., Tang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hierarchical+organization+of+prostate+cancer+cells+in+xenograft+tumors%3A+the+CD44%2Balpha2beta1%2B+cell+population+is+enriched+in+tumor-initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Hierarchical organization of prostate cancer cells in xenograft tumors: the CD44+alpha2beta1+ cell population is enriched in tumor-initiating cells.</a> Cancer Res. 67, 6796-6805 (2007).</li>
<li>Qin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+PSA%28-%2Flo%29+prostate+cancer+cell+population+harbors+self-renewing+long-term+tumor-propagating+cells+that+resist+castration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">The PSA(-/lo) prostate cancer cell population harbors self-renewing long-term tumor-propagating cells that resist castration.</a> Cell Stem Cell. 10, 556-569 (2012).</li>
<li>Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2013%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J.+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2013.</a> CA Cancer J. Clin. 63, 11-30 (2013).</li>
<li>Patrawala, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+purified+CD44%2B+prostate+cancer+cells+from+xenograft+human+tumors+are+enriched+in+tumorigenic+and+metastatic+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Highly purified CD44+ prostate cancer cells from xenograft human tumors are enriched in tumorigenic and metastatic progenitor cells.</a> Oncogene. 25, 1696-1708 (2006).</li>
</ol>

Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Protokół ten opisuje izolację CSC ze świeżych tkanek ludzkiego raka gruczołu krokowego. Na pomyślny wynik tego protokołu wpływa kilka ważnych czynników.
Odzyskanie dużej liczby żywotnych komórek raka prostaty zależy od dokładnej oceny próbek chirurgicznych. Z naszego doświadczenia wynika, że skuteczna izolacja rakotwórczych komórek gruczołu krokowego jest najbardziej pewna, gdy obserwuje się i przetwarza makroskopowe guzki nowotworowe10.
Jednak obecnie ch...

Niejednorodność wewnątrznowotworowa jest uważana za cechę charakterystyczną raka1. Rzeczywiście, opisano kilka mechanizmów heterogeniczności wewnątrznowotworowej, w tym mutacje genetyczne i interakcje z mikrośrodowiskiem. Ponadto niektóre nowotwory mogą zawierać hierarchię komórkową z subpopulacją nowotworowych komórek macierzystych (CSC), która wykazuje właściwości zdolności inicjowania nowotworu i samoodnawiania się w testach przeszczepówseryjnych 2-5. Początkowo opisane w nowotworach hematologicznych6, piersi7 i mózgu8, CSC były również badane w raku prostaty9-12, a także innych typach nowotworów2-5.
CSC są ogólnie uważane za frakcję komórkową w heterogenicznej populacji2-5. W związku z tym charakterystyka funkcjonalna i molekularna CSC jest uzależniona od ich wzbogacenia z populacji masowych. W związku z tym w ciągu ostatnich dwóch dekad opracowano kilka metodologii wzbogacania CSC, które zazwyczaj obejmują rozdzielanie znakowanych populacji za pomocą cytometrii przepływowej. Ponadto istotną kwestią w badaniu CSC jest to, że hierarchiczna organizacja tkanek ludzkich może zostać zakłócona przez manipulacje eksperymentalne, takie jak seryjne pasażowanie w hodowli lub myszy z niedoborem odporności. W rezultacie, bezpośrednia izolacja CSC z tkanek ludzkich stała się ważną metodologią w dziedzinie CSC.
Rak prostaty jest główną przyczyną zachorowalności i śmiertelności z powodu raka w Stanach Zjednoczonych i na całym świecie13. W związku z tym izolacja i biologiczna charakterystyka CSC prostaty jest bardzo interesująca. CSC prostaty zostały wcześniej wzbogacone z linii komórkowych, ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów i kultur zawiesinowych pochodzących od pacjentów o niskim pasażu9,10,12,14.
Niedawno informowaliśmy o izolacji CSC prostaty bezpośrednio z ludzkich próbek chirurgicznych dzięki ich HLAI-ujemnemu fenotypowipowierzchni komórek 10. Tutaj szczegółowo opisujemy procedury wdrożone w celu izolacji tych komórek. Guzy prostaty są pobierane z próbek chirurgicznych i przekształcane w zawiesiny komórkowe. Komórki są następnie barwione przy użyciu przeciwciał przeciwko HLAI oraz markerów zrębu i żywotności, a CSC są izolowane przez sortowanie komórek aktywowane fluorescencją (FACS). Wyizolowane CSC mogą być następnie wykorzystane do testów wymagających żywotnych komórek.

<table><tbody><tr><td>RPMI</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>Surowica bydlęca</td> płodu <td>Gibco Life Technologies</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Penicylina Streptomycyna</td><td>Gibco Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning Cell Gro</td><td>21-031-CM</td><td></td></tr><tr><td>60 mm, 15 mm Naczynie do hodowli komórkowych</td><td>Corning</td><td>3295</td><td></td></tr><tr><td>35 & Mikro; m Sitko do komórek</td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>50 ml probówka stożkowa</td><td>Crystalgen</td><td>23-2263</td><td></td></tr><tr><td>15 ml probówka stożkowa</td><td>Crystalgen</td><td>23-2265</td><td></td></tr><tr><td>Bufor lizujący czerwone krwinki</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>HLA klasa I (W6/32) Przeciwciało PE</td><td>Abcam</td><td>ab43545</td><td></td></tr><tr><td>CD31 Przeciwciało FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-0319-42</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwciało CD45 FITC</td><td>Abcam</td><td>ab27287</td><td></td></tr><tr><td>IgG2a&kappa; Przeciwciało PE</td><td>BD Pharminogen</td><td>555574</td><td></td></tr><tr><td>IgG1&kappa; Przeciwciało FITC</td><td>BD Pharminogen</td><td>551954</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>d3571</td><td></td></tr><tr><td>12 mm x 75 mm Rurki polistyrenowe z nasadką sitową do komórek</td><td>BD Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>Mieszalnik Vortex</td><td>Crystalgen</td><td>CG-BV1000</td><td></td></tr><tr><td>10% neutralny bufor formalina</td><td>Fisher</td><td>RBBP-0480</td><td></td></tr></tbody></table>

izolacja nowotworowych komórek macierzystych z próbek ludzkiego raka prostaty

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

Model rakowych komórek macierzystych (CSC) został znacznie zmieniony w ciągu ostatnich dwóch dekad. W tym czasie CSC zostały zidentyfikowane i bezpośrednio wyizolowane z tkanek ludzkich i seryjnie rozmnażane u myszy z niedoborem odporności, zazwyczaj poprzez znakowanie przeciwciałami subpopulacji komórek i frakcjonowanie za pomocą cytometrii przepływowej. Jednak unikalne cechy kliniczne raka gruczołu krokowego znacznie ograniczyły badanie CSC prostaty ze świeżych próbek ludzkich guzów. Niedawno informowaliśmy o izolacji CSC prostaty bezpośrednio z tkanek ludzkich ze względu na ich fenotyp HLA klasy I (HLAI) ujemny. Komórki raka prostaty są pobierane z próbek chirurgicznych i mechanicznie dysocjowane. Zawiesina komórkowa jest generowana i znakowana fluorescencyjnie sprzężonym HLAI i przeciwciałami zrębowymi. Subpopulacje komórek HLAI-ujemnych są ostatecznie izolowane za pomocą cytometru przepływowego. Głównym ograniczeniem tego protokołu jest często mikroskopijny i wieloogniskowy charakter raka pierwotnego w próbkach prostatektomii. Niemniej jednak izolowane żywe CSC prostaty nadają się do charakterystyki molekularnej i walidacji funkcjonalnej przez przeszczep u myszy z niedoborem odporności.

<img alt="Analiza histologiczna i cytometria przepływowa; przekrój tkanki nowotworowej, wykres populacji komórek, porównanie danych." fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51332/51332fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51332/51332fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 1"> 
Rysunek 1. Pobieranie guza raka prostaty człowieka i wykres cytometrii przepływowej ilustrujący specyficzne populacje komórek raka prostaty człowieka. (<str...

Izolacja nowotworowych komórek macierzystych (CSC) bezpośrednio z tkanek ludzkich jest niezbędna do ich biologicznej charakterystyki. Niniejszy manuskrypt opisuje metodologię izolacji CSC prostaty od tkanek ludzkich, a także zawiera wskazówki dotyczące rozwiązywania trudnych etapów.

Izolacja nowotworowych komórek macierzystych z próbek ludzkiego raka prostaty

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest opisanie izolacji komórek macierzystych raka prostaty z ludzkiej tkanki za pomocą FACS. Jest to realizowane poprzez wstępne przetworzenie tkanki raka prostaty pobranej z preparatów chirurgicznych. W drugim kroku, z przekrojów tkankowych tworzona jest zawiesina komórkowa, a następnie komórki są znakowane przeciwciałami fluorescencyjnymi.W ostatnim kroku komórki macierzyste raka prostaty są sortowane według faktów. Ostatecznie cechy molekularne i funkcjonalne wyizolowanych komórek mogą zostać scharakteryzowane poprzez ksenotransplantację i profilowanie ekspresji genów. Metoda ta może pomóc w udzieleniu odpowiedzi na kluczowe pytania w dziedzinie raka prostaty, ułatwiając molekularną i funkcjonalną charakterystykę komórek macierzystych nowotworu z próbek ludzkich.Procedurę zademonstrują Samuel Vidal, student studiów doktoranckich MD PhD, Aiden Quinn, student studiów magisterskich oraz Jania. Nasze badania A z laboratorium. Rozpocznij od pobrania nadmiaru tkanki objętościowej z próbek nowotworowych, które nie są wymagane do diagnostyki klinicznej, do probówki stożkowej o pojemności 50 ml zawierającej 15 ml pożywki. Natychmiast przechowuj probówkę

isolation-of-cancer-stem-cells-from-human-prostate-cancer-samples

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Izolacja komórek macierzystych raka z ludzkich próbek raka prostaty

Komórki macierzyste nowotworu (CSCs) zidentyfikowano w wielu typach zmian złośliwych. W niniejszym protokole opisujemy metodę cytometrii przepływowej wykorzystującą aktywność dehydrogenazy aldehydowej oraz ekspresję CD44 i CD24 do izolacji CSCs z ksenoprzeszczepów gruczolakoprzewodowego raka trzustki człowieka. Te żywe komórki mogą być następnie wykorzystane w badaniach funkcjonalnych i analitycznych.

Izolacja komórek macierzystych z ksenoprzeszczepów raka trzustki człowieka

W niniejszym raporcie opisujemy protokół izolacji wysoko oczyszczonych populacji leukocytów infiltrujących guzy. Protokół ten został opracowany na podstawie metody firmy Miltenyi Biotech w celu zwiększenia wydajności i czystości izolacji komórek z złożonej tkanki nowotworowej.

Izolacja komórek odpornościowych z guzów pierwotnych

Ten artykuł opisuje technikę izolowania komórek macierzystych raka trzustki (CSC) z ludzkiej tkanki gruczolakoraka przewodowego trzustki (PDAC). Te CSC są wykorzystywane do badania funkcjonalnego wpływu leczenia farmakologicznego na zdolność CSC do samoodnawiania się in vitro w celu opracowania bardziej skutecznych metod leczenia raka.

Izolacja komórek macierzystych PDAC: metoda izolowania rakowych komórek macierzystych z guzów trzustki

Komórki macierzyste raka trzustki (CSC) mogą być namnażane in vitro za pomocą techniki hodowli sferycznej niezależnej od zakotwiczenia, która stanowi potężne narzędzie do badania biologii CSC i może służyć jako pierwszy krok do opracowania nowych terapii ukierunkowanych na CSC. W tym miejscu przedstawiono metodologię rozszerzania, analizowania i celowania w CSC trzustki.

Badanie charakterystyki komórek macierzystych raka trzustki w celu opracowania nowych strategii leczenia

Ten manuskrypt szczegółowo opisuje metodę używaną do generowania ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów z rakiem prostaty (PDX) z krążących komórek nowotworowych (CTC). Generowanie modeli PDX z CTC zapewnia alternatywny model eksperymentalny do badania raka prostaty; Najczęściej diagnozowany nowotwór i częsta przyczyna zgonów z powodu raka u mężczyzn.

Generowanie modeli ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów z rakiem prostaty z krążących komórek nowotworowych

Obecność nowotworowych komórek macierzystych (CSC) w mięsakach kostnych została ostatnio powiązana z ich patogenezą. W artykule przedstawiono izolację CSCs z pierwotnych kultur komórkowych uzyskanych z ludzkich biopsji konwencjonalnego kostniakomięsaka (OS) z wykorzystaniem zdolności CSC do wzrostu w warunkach niezakaźnych.

Ustanowienie hodowli nowotworowych komórek macierzystych z ludzkiego konwencjonalnego kostniakomięsaka

Zrozumienie roli nowotworowych komórek macierzystych w nawrotach nowotworów i oporności na terapie stało się tematem wielkiego zainteresowania w ostatniej dekadzie. W artykule opisano izolację i charakterystykę subpopulacji nowotworowych komórek macierzystych z linii komórkowych raka płaskonabłonkowego głowy i szyi (HNSCC).

Izolacja i charakterystyka subpopulacji raka płaskonabłonkowego głowy i szyi o charakterystyce komórek macierzystych

Celem tej metodologii jest identyfikacja komórek macierzystych raka (CSC) w liniach komórek rakowych i pierwotnych próbkach guzów ludzkich za pomocą protokołu formowania kuli, w solidny sposób, przy użyciu testów funkcjonalnych i charakterystyki fenotypowej za pomocą cytometrii przepływowej i Western blot.

Pozyskiwanie kulek komórek macierzystych raka z guzów ginekologicznych i raka piersi

Korzystając z ludzkich pierwotnych komórek nabłonka prostaty, przedstawiamy nową, wolną od biomarkerów metodę funkcjonalnej charakterystyki komórek macierzystych za pomocą testu retencji znaczników opartego na sferoidach. Opisano protokół krok po kroku dla znakowania komórek BrdU, CFSE lub Far Red 2D; trójwymiarowe tworzenie sferoid; identyfikacja komórek macierzystych zachowujących znacznik za pomocą immunocytochemii; i izolacja przez FACS.

Izolacja komórek macierzystych z trójwymiarowych kultur sferoidalnych

Ten eksperymentalny protokół opisuje izolację BCSC z próbek komórek i tkanek raka piersi, a także testy in vitro i in vivo, które mogą być użyte do oceny fenotypu i funkcji BCSC.

Izolacja i ocena funkcjonalna komórek macierzystych ludzkiego raka piersi z próbek komórkowych i tkankowych

Protokół ten zapewnia kompleksową procedurę izolacji, ekspansji i unieśmiertelnienia fibroblastów z radykalnej prostatektomii. Ponadto opisano testy opracowane w celu oceny funkcjonalnych skutków przesłuchu fibroblast-komórki nowotworowe, wykorzystujące zarówno leczenie pożywką kondycjonowaną, jak i kokulturę.

Izolacja, hodowla i charakterystyka fibroblastów związanych z rakiem prostaty

Naucz się izolować nowotworowe komórki macierzyste z ludzkiego raka prostaty przy użyciu FACS. Ta metoda umożliwia badaczom charakteryzację molekularną i funkcjonalną komórek CSC in vitro.

Izolacja nowotworowych komórek macierzystych z próbek ludzkiego raka prostaty

Przeglądaj więcej filmów