Wzdęcie pęcherza moczowego wywołało reakcje trzewnomotoryczne jako model bólu pęcherza moczowego u myszy

Ogólnym celem tej procedury jest ustalenie fizjologicznego modelu szkodliwego bólu pęcherza moczowego i myszy podczas całej procedury. Temperatura ciała jest utrzymywana za pomocą poduszki grzewczej i promiennika górnego. Pierwszym krokiem w operacji jest wprowadzenie cewnika do cewki moczowej znieczulonej myszy.

Drugim krokiem jest wykonanie nacięcia w celu odsłonięcia lewego mięśnia brzucha. Trzecim krokiem jest ugryzienie mięśni za pomocą igły o rozmiarze 21. Następnie do igły wprowadzana jest wygięta elektroda z drutu srebrnego.

Igła jest następnie przeciągana z powrotem przez mięsień, pozostawiając drut w mięśniu. Proces ten powtarza się dla drugiej elektrody z drutu srebrnego. Czwartym krokiem jest umieszczenie przewodu uziemiającego w klatce piersiowej myszy.

Piątym krokiem teraz, gdy operacja została zakończona, jest rozciągnięcie pęcherza moczowego i zarejestrowanie odpowiedzi EMG. Odbywa się to poprzez najpierw podłączenie trzech elektrod ze srebrnego drutu do wzmacniacza i digitizera, aby zarejestrować reakcję motoryczną wnętrzności lub VMR. Następnie cewnik pęcherza moczowego jest podłączony do regulatora ciśnienia czasu i zbiornika powietrza, aby dostarczyć określone bodźce, które rozszerzają pęcherz przy różnym ciśnieniu przy 15 milimetrach słupa rtęci.

Nie jest rejestrowany VMR. Jednak przy 30, 45 i 60 milimetrach słupa rtęci VMR wzrasta wraz ze wzrostem ciśnienia. Na wykresie można zobaczyć stopniowany stopniowy wzrost znormalizowanego VMR wraz ze wzrostem ciśnienia.

Ta procedura może pomóc w zrozumieniu bólu trzewnego pęcherza. W szczególności, korzystając z modelu wzdęcia pęcherza moczowego, można zbadać cały układ nerwowy w kontekście szkodliwej stymulacji trzewnej. Obejmuje to rejestrowanie i badanie samych nerwów obwodowych, neuronów wtórnych w rdzeniu kręgowym oraz wyższych neuronów w pniu mózgu i mózgu.

Ponadto w tym fizjologicznym modelu bólu pęcherza moczowego można testować nowatorskie terapie stosowane w leczeniu bólu pęcherza moczowego. Wywołaj stan znieczulający, umieszczając mysz w komorze indukcyjnej o zawartości od dwóch do 3% fluoru. Wyjmij mysz z komory indukcyjnej po tym, jak utraci ona odruch pisania.

Umieść mysz w stożku nosowym o zawartości od dwóch do 2,5% fluoru. Następnie odwróć mysz tak, aby jej grzbietowa strona była skierowana w dół. Po odwróceniu przetestuj głębokość znieczulenia, ściskając palec u nogi kleszczami.

Nie powinno być żadnej reakcji ze strony zwierzęcia. Następnie delikatnie przytrzymaj otwór cewki moczowej prostopadle do ciała myszy za pomocą kleszczy i włóż końcówkę cewnika do cewki moczowej. Opuść cewnik tak, aby był równoległy do ciała myszy i delikatnie włóż cewnik do ciała myszy.

Delikatnie dociśnij brzuch, aby usunąć mocz z pęcherza. Znoksić to kawałkiem ręcznika papierowego. Nałóż alkohol na brzuch, aby zdezynfekować obszar.

Wykonaj jedno- lub dwucentymetrowe nacięcie w wysterylizowanym obszarze, aby odsłonić lewy mięsień brzucha. Użyj nożyczek, aby rozprowadzić skórę i poluzować powięź, tak aby odsłonięty był górny skośny mięsień brzucha. Na tym zdjęciu mięsień brzucha znajduje się w pobliżu górnej części otworu chirurgicznego, a mięsień ucha znajduje się na dole.

Użyj igły o rozmiarze 21, aby wziąć mały kęs mięśni. Wbić igłę przez mięsień. Ważne jest, aby podczas tego procesu unikać jakichkolwiek naczyń krwionośnych.

Następnie wsuń jeden koniec srebrnego drutu do igły. Przeciągnij igłę z powrotem przez mięsień, aby wciągnąć srebrny drut do mięśnia, drut powinien być równo z ugryzieniem mięśnia. Powtórz ten proces.

Wszczep drugi srebrny drut, około 0,5 centymetra od pierwszego drutu. Następnie wszczep trzeci srebrny drut do klatki piersiowej. Ten drut działa jak uziemienie.

Nałóż ciepły olej mineralny na odsłonięte mięśnie brzucha, aby były wilgotne. Ustaw mysz tak, aby leżała na boku w bardzo wygodnej pozycji. Następnie połącz zaciski elektrod z elektrodami z drutu srebrnego.

Ustaw trzy zaciski tak, aby przewody się nie stykały. Obniż znieczulenie do 1,5%Po zakończeniu operacji. Następnie obniżaj poziom znieczulenia o 0,125% co 15 minut, aż mysz wykaże reakcję zgięcia palca

Szczypanie bez wokalizacji i poruszania się. Podłącz cewnik pęcherza moczowego do przewodu przewodzącego powietrze, który jest podłączony do regulatora ciśnienia czasu. Służy do kontrolowania długości interwału ciśnienia wstępnego, próby rozprężenia ciśnienia i interwału między próbami po ciśnieniu.

Wykonaj rozciągnięcie przy 60 milimetrach słupa rtęci, aby przetestować reakcję myszy na rozciągnięcie. Powinien być widoczny silny sygnał EMG przekraczający 0,5 wolta. Jeśli tak się stanie, wykonaj jeszcze dwa rozciągnięcia, aby potwierdzić odpowiedź.

Jeśli nie zaobserwuje się odpowiedniej reakcji, należy obniżyć poziom izofluoru. Jeśli mysz zacznie wokalizować lub chodzić w kierunku chodzenia podczas próby wzdęcia, należy podnieść poziom fluoru Isof. W obecnym przykładzie można zaobserwować silną odpowiedź EMG.

Byłoby to uważane za dobrą odpowiedź bimo na wzdęcie pęcherza i nie byłaby konieczna zmiana poziomu fluoru Isof. Wiele badań wykorzystuje stopniowane rozdęcia, które zaczynają się przy niskich ciśnieniach, takich jak 15 milimetrów słupa rtęci i przechodzą do bardziej szkodliwych ciśnień. Teraz dane zostały zebrane.

Musi być przetwarzany i analizowany. Pierwszym krokiem jest skorygowanie całego zestawu danych poprzez przyjęcie wartości bezwzględnej każdego punktu. Najłatwiej jest to osiągnąć za pomocą oprogramowania do analizy danych, ale można to również zrobić ręcznie.

Teraz, gdy masz już poprawione dane, określ średnią odpowiedź EMG podczas części eksperymentu w tle. Odejmij tę odpowiedź EMG tła od każdego punktu danych w eksperymencie, aby uzyskać zestaw danych skorygowanych w tle. Następnie określ obszar pod krzywą dla przedziału ciśnienia wstępnego, a następnie obszar pod krzywą dla próby rozciągania ciśnienia.

Proces ten jest powtarzany dla wszystkich interwałów ciśnienia wstępnego i prób rozdęcia ciśnienia. Oto zrzut ekranu z zestawu analizowanych danych. Wykresy są ułożone w kolejności od góry do dołu, surowe EMG, ciśnienie zarejestrowane przez przetwornik ciśnienia, sygnał bodźca i wreszcie obszar pod wykresem krzywej.

W tym przykładzie, aby określić nieznormalizowany VMR dla pierwszej próby rozdęcia ciśnienia, należy po prostu odjąć obliczony obszar pod krzywą na początku próby od obszaru pod krzywą na końcu próby. Na koniec każdy obszar próby rozdęcia ciśnienia pod krzywą jest normalizowany do najniższej zmierzonej próby przed interwałem ciśnienia. Odbywa się to poprzez podzielenie każdej próby rozdęcia ciśnienia przez próbę najniższego interwału ciśnienia przed uzyskaniem przez sekundy znormalizowanego VMR w woltach.

Oto wykres przedstawiający znormalizowany VMR dla pojedynczego zestawu rozdęć w zakresie od 15 do 75 milimetrów słupa rtęci. Można zaobserwować stopniowany wzrost VMR na osi Y wraz ze wzrostem nacisków na oś x. Co więcej, w trzech zestawach stopniowanych rozciągnięć w zakresie od 15 do 75 milimetrów słupa rtęci widać, że ogólny VMR z tej myszy jest spójny między seriami.

Stabilność tej techniki pozwala na wykonywanie manipulacji, które mogą trwać wiele godzin. Na koniec zilustrowano znaczenie starannego monitorowania temperatury ciała podczas procedury VMR rozdęcia pęcherza. Oto zestaw danych pokazujących, że spadek temperatury ciała z 37,5 do 33,5 stopni Celsjusza prowadzi do znacznego spadku VMR do 60 milimetrów rozdęcia pęcherza rtęciowego.

Po obejrzeniu tego filmu powinieneś mieć dobre pojęcie o tym, jak chirurgicznie wszczepić elektrody druciane i cewnik do pęcherza moczowego do użytku z modelem rozdęcia pęcherza moczowego bólu trzewnego. Powinieneś również lepiej zrozumieć, w jaki sposób analizowane są dane generowane przez ten test. Dziękujemy za oglądanie i życzymy powodzenia w eksperymentach.